К вопросу о пригодности вещественных доказательств биологического происхождения для проведения идентификационного исследования

Д.Ю. Яковлев

Резюме

Методом электрофореза в полиакриламидном денатурирующем геле изучена возможность оценки пригодности вещественных доказательств биологического происхождения для проведения идентификационных исследований при сильно выраженной деструкции биологического материала. Предложена методика проведения такого рода исследований. Показано, что при комплексном воздействии поражающих факторов на биологический материал и полной деструкции форменных элементов крови структурная целостность и качественный состав спектра сывороточных белков сохраняется.

 

Введение

Необходимость оценить представленный на исследование биологический материал с точки зрения пригодности для проведения медико-биологических исследований возникает перед экспертом при выполнении любого исследования вещественных доказательств. От того, насколько грамотно будет выполнен данный этап экспертизы, зависит успешное решение вопросов планирования предстоящего исследование, разрешение вопросов, поставленных перед экспертом.

Решение данной задачи особенно актуально при работе с материалом, подвергшимся, мощному комплексному действию поражающих факторов, сильным гнилостным изменениям. Такое повреждение биологического материала имеет место при крупномасштабных катастрофах, сопровождающихся массовой гибелью людей.

На наш взгляд, решение указанных задач в судебной медицине может быть успешно осуществлено при использовании метода электрофореза в полиакриламидном денатурирующем геле.

Таким образом, целью настоящей работы было изучение деструктированного биологического материала ( авиакатастрофа самолета АН – 124 «Руслан» 6.12.97г. в г.Иркутске ) методом электрофореза в полиакриламидном геле ( ПААГ ) для оценки пригодности биологического материала при проведении медико-биологических исследований.

Исследовали трупную гемолизированную кровь, полученную в БСМЭ Иркутской области.

Для проведения электрофореза в пластинах градиентного полиакриламидного геля [ 1 ] использовали аппарат фирмы Biorad ( США ), градиентные сместиели для формирования линейных градиентов пор геля фирма Biorad ( США ), наборы соответствующих реагентов фирмы LKB ( Швеция ).

В качестве маркеров молекулярных масс использовали наборы фирмы Pharmacia Phine Chemical ( Швеция ) и Diaport-1 ( Москва ). Это позволило оценить массу белков и белковых субъединиц в дипозоне 12 - 45 кD.

Для обнаружения субъединиц белков электрофорез проводили в присутствии 2-меркаптоэтанола и додецилсульфата натрия после кипячения в течение 2 мин [ 2 ].

Ограниченный протеолиз белков проводили как непосредственно в геле, так и перед внесением образцов в гель [ 3 ].

Электрофореграммы окрашивали Кумасси бриллиантовым синим R-250 [ 4 ], а также использовали метод окраски серебром [ 5 ]. В этом случае пластины геля после фиксирования белков 12,5 % трихлоруксусной кислоте тщательно отмывали водой и инкубировали при интенсивном освещении в 0,1 % растворе нитрата серебра, содержащего 0,2 % формалина. Затем гель кратковременно промывали водой и помещали в раствор 5 % раствора карбоната натрия, содержащего 0,2 % формалина до появления белковых полос. Реакцию останавливали, погружая пластину геля в 1 % раствор уксусной кислоты.

 

Результаты и обсуждение

Как видно из приведенной фотографии ( рис.1 ), при комплексном воздействии поражающих факторов ( динамического, химического, токсического, температурного и др. ) на биологический материал сывороточные белки крови не подвергаются ярко выраженным деструктивным изменениям. Однако, в подавляющем большинстве случаев имеет место увеличение доли низкомолекулярных фрагментов ( 11 – 13 кD ), образующихся, вероятно, за счет частичной деструкции свободных концов пептидных молекул.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о том, что спектр белков сыворотки крови не претерпевает качественных изменений в случае полного гемолиза крови, разрушения форменных элементов. Такие образцы могут быть использованы для решения идентификационных задач при проведении судебно-медицинских и медико-биологических исследований.

Литература

Allen R.C., Maurer H.R. Elektrophoresis and isoelectric focusing in polyacrylamide gel.- Berlin: Gruyner, 1974.

Такач Б. Электрофорез белков в пластинах полиакриламидного геля / Методы исследования в иммунологии / Под ред. Лефковитса, Б.Перниса. – М.: Мир, 1981.

Зорин Н.А., Белогорлова Т.И., Зайцева С.В., Чирикова Т.С., Лыкова О.Ф. Изучение А₂ - макроглобулина и его аналогов у животных // ЖЭБиФ. – 1990. – т.26, №1.

Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. – М.: Наука, 1983.

Блохин Д.Ю. Локализация белковых зон в полиакриламидном геле методом серебряного окрашивания // Лабораторное дело. – 1988, №1.

Д.Ю. Яковлев