- Әдетте элюент сефадексі бар колонкадан шығатын заттардың пайда болу сәті формуламен көрінеді V=V0+KVi
- мұнда V – К деректері бар заттың элюирлеуші сұйықтығының көлемі, мл; V0 – колонканың бос көлемі немесе сыртқы еріткіштің жалпы көлемі (гель дәнінен тыс), мл; Vi – гель ішіндегі еріткіштің көлемі, мл; K – гель дәнінің ішіндегі еріткіш пен айналадағы еріткіш арасында еритін зат үшін таралу коэффициенті. Егер с = 1 бір ерітілген заттан тұратын Талданатын сынаманы С = 0 бағанына енгізсе, онда екінші зат элюирлеуші сұйықтықта V0 бағанасынан шыққаннан кейін бірден, ал біріншісі – v0+ Vi көлемі шыққаннан кейін ғана пайда болады.
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау - Үлкен молекулалық салмағы мен өлшемдері бар ақуыз молекулалары сефадекс дәндерінің ішіне диффундирленбейтіндіктен, олар v0 колонкасының бос көлемі шыққаннан кейін колонкадан бірінші болып жуылады, ал қалған заттардың барлығы (төмен молекулалық қоспаларды қоса алғанда) v0+ К · Vi тең көлем шыққаннан кейін жуылады.
- Әдіс препаративті энзимологияда кеңінен қолданылады. Сефадекстің көмегімен ақуызды әртүрлі молекулалық массамен бөлуге болады.
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау - Сефадексті колонкадағы Гель-хроматография (схема).
- Крестері бар үлкен ашық кружкалар-сефадекс дәндері; шағын қара және қызыл кружкалар мен үшбұрыштар-әртүрлі молекулалық массасы бар белоктар; а - жұмыстың басындағы колонка; Б, В, Г - уақыттың әр түрлі кезеңдеріндегі колонка. Элюция графигінде ақуыз компоненттерінің бөлінуі анық көрінеді.
Ақуызды тазалау әдістері Белокты фракциондау және тазалау - Электрофорез.
- Нобель сыйлығының лауреаты А. Тизелиус әзірлеген еркін электрофорез әдісі рН және ерітіндінің иондық күшінің белгілі мәндері кезінде белок зарядының шамасымен анықталатын электр өрісіндегі белоктардың қозғалыс жылдамдығының (қозғалысының) айырмашылықтарына негізделген. Соңғы уақытта әртүрлі тасымалдаушыларда, атап айтқанда қатты демеуші ортада: крахмал және полиакриламид гельдерінде, целлюлозада белоктардың аймақтық электрофорез әдістері кеңінен таралған. Олардың еркін электрофорез әдісімен салыстырғанда артықшылықтары диффузия мен конвекция нәтижесінде белок-еріткіштің шектерін шайып кетуден тұрады, шекараның орналасуын анықтау үшін күрделі аппаратураны ретке келтіру қажет емес, ал талдау үшін ақуыздың аз мөлшері қажет (бұл әдістер мен тиісті аппаратуралар Биохимия бойынша практикалық нұсқаулықтарда егжей-тегжейлі қаралады).
Достарыңызбен бөлісу: |
