Цинк Zinc Эпигаллокатехин egcg
The polyphenol epigallocatechin-3-gallate affects lipid rafts to block activation of the c-Met receptor in prostate cancer cells
жүктеу/скачать 1.81 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Limitations of MTT and MTS-based assays for measurement of antiproliferative activity of green tea polyphenols.
- METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS
- CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE
The polyphenol epigallocatechin-3-gallate affects lipid rafts to block activation of the c-Met receptor in prostate cancer cells.Duhon D1, Bigelow RL, Coleman DT, Steffan JJ, Yu C, Langston W, Kevil CG, Cardelli JA. The HGF/c-Met pathway is an important regulator of signaling pathways responsible for invasion and metastasis of most human cancers, including prostate cancer. Exposure of DU145 prostate tumor cells to HGF stimulates the PI3-kinase and MAPK pathways, leading to increased scattering, motility, and invasion, which was prevented by the addition of EGCG. EGCG acted at the level of preventing phosphorylation of tyrosines 1234/1235 in the kinase domain of the c-Met receptor without effecting dimerization. HGF-induced changes were independent of the formation of reactive oxygen species, suggesting that EGCG functioned independent of its antioxidant ability. ECG, another tea polyphenol, was as effective as EGCG, while EGC and EC were less effective. EGCG added up to 4 h after the addition of HGF still blocked cell scattering and reduced the HGF-induced phosphorylation of c-Met, Akt, and Erk, suggesting that EGCG could act both by preventing activation of c-Met by HGF and by attenuating the activity of pathways already induced by HGF. HGF did not activate the MAPK and PI3-K pathways in cells treated with methyl-beta-cyclodextrin (mCD) to remove cholesterol. Furthermore, subcellular fractionation approaches demonstrated that only phosphorylated c-Met accumulated in Triton X-100 membrane insoluble fractions, supporting a role for lipid rafts in regulating c-Met signaling. Finally, EGCG treatment inhibited DiIC16 incorporation into membrane lipid ordered domains, and cholesterol partially inhibited the EGCG effects on signaling. Together, these results suggest that green tea polyphenols with the R1 galloyl group prevent activation of the c-Met receptor by altering the structure or function of lipid rafts. Полифенолов эпигаллокатехин-3-галлат влияет на липидный плоты, чтобы блокировать активацию c-Met рецепторов в клетки рака простаты. В HGF/c-Met путь-важный регулятор сигнальных путей ответственность за инвазии и метастазировании большинство человеческих раковых заболеваний, включая рак простаты. Экспозиция DU145 клетки опухоли простаты, чтобы HGF стимулирует PI3-киназы и MAPK путей, ведущих к увеличению рассеяния, подвижность, и вторжения, которое было предотвращено путем добавления EGCG. EGCG действовал на уровне предотвращения фосфорилирования tyrosines 1234/1235 в киназы домен c-Met рецепторов без производства димеризации. HGF-индуцированные изменения были независимы от образованию активных форм кислорода, предполагая, что EGCG функционировал независимо от его антиоксидантной способности. ЭКГ, другой чайного полифенола, было так же эффективно, как EGCG, в то время как EGC и ЕС, были менее эффективными. EGCG добавил, до 4-х часов после того, HGF еще заблокированные ячейки рассеяния и сократили ГЗК-индуцированной фосфорилирования c-Met, Akt, и " Эрк", предполагая, что EGCG может действовать как предотвращение активации c-Met по HGF и ослабления активности пути уже индуцированных ГЗК. HGF не активируете MAPK и PI3-K пути в клетках, обработанных метил-бета-циклодекстрина (mCD), чтобы удалить холестерина. Кроме того, субклеточном фракционирования подходов показал, что только фосфорилированных c-Met накопленный в Triton X-100 мембраны нерастворимыми фракциями, оказывая влияние на липидный плоты в регулировании c-Met сигнализации. Наконец, EGCG лечения приостанавливают DiIC16 включения в мембранных липидов заказанных доменов, холестерина и частично ингибирует EGCG воздействие на сигнализации. Вместе, эти результаты позволяют предположить, что полифенолы зеленого чая с R1 galloyl группы предотвратить активацию c-Met рецепторов путем изменения структуры или функции липидов плоты. PLoS One. 2010 Apr 16;5(4):e10202. doi: 10.1371/journal.pone.0010202. Limitations of MTT and MTS-based assays for measurement of antiproliferative activity of green tea polyphenols.Wang P1, Henning SM, Heber D. The chemopreventive effect of green tea polyphenols, such as (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG), has been well demonstrated in cell culture studies. However, a wide range of IC(50) concentrations has been observed in published studies of the anti-proliferative activity of EGCG from different laboratories. Although the susceptibility to EGCG treatment is largely dependent on cancer cell type, the particular cell viability and proliferation assays utilized may significantly influence quantitative results reported in the literature. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS:We compared five widely used methods to measure cell proliferation and viability after EGCG treatment using LNCaP prostate cancer cells and MCF-7 breast cancer cells. Both methods using dyes to quantify adenosine triphosphate (ATP) and deoxynucleic acid (DNA) showed accuracy in the measurement of viable cells when compared to trypan blue assay and results showed good linear correlation (r = 0.95). However, the use of MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) as indicators of metabolically active mitochondria overestimated the number of viable cells by comparison with the ATP, DNA, or trypan blue determinations. As a result, the observed IC(50) concentration of EGCG was 2-fold higher using MTT and MTS compared to dyes quantifying ATP and DNA. In contrast, when cells were treated with apigenin MTT and MTS assays showed consistent results with ATP, DNA, or trypan blue assays. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE:These results demonstrate that MTT and MTS -based assays will provide an underestimation of the anti-proliferative effect of EGCG, and suggest the importance of careful evaluation of the method for in vitro assessment of cell viability and proliferation depending on the chemical nature of botanical supplements. Ограничения ОАО " МТТ " и МТС на основе анализов для измерения антипролиферативное деятельности полифенолы зеленого чая. В химические эффект полифенолы зеленого чая, такие как (-)-эпигаллокатехин-3-галлат (EGCG), была хорошо продемонстрирована в клеточной культуре исследований. Тем не менее, широкий спектр IC(50) концентрации наблюдается в опубликованных исследований анти-пролиферативной активности EGCG из разных лабораторий. Хотя восприимчивость к EGCG лечения во многом зависит от раковых клеток типа, в частности жизнеспособность клеток и распространение тестов, используемых может оказать значительное влияние на количественные результаты, представленные в литературе. МЕТОДОЛОГИЯ/ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ:Мы по сравнению пяти широко применяемых методов измерения клеточной пролиферации и жизнеспособность после EGCG лечение с использованием LNCaP клеток рака предстательной железы MCF-7 клеток рака молочной железы. Оба метода с использованием красителей для количественной оценки аденозинтрифосфат (АТФ) и deoxynucleic кислоты (ДНК) показал точности в измерении жизнеспособных клеток при сравнении с трипановым синим и результаты анализа показали хорошие линейной корреляции (r = 0.95). Однако, использование МТТ (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-Ил)-2,5-diphenyltetrazolium бромида) и МТС (3-(4,5-dimethylthiazol-2-Ил)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) в качестве индикаторов метаболически активных митохондрий переоценили количество жизнеспособных клеток по сравнению с АТП, ДНК, или трипановым синим определений. Как следствие, наблюдается IC(50) концентрация EGCG была в 2 раза выше, с использованием MTT и МТС по сравнению с красителями количественная оценка ATP и ДНК. В отличие от этого, когда клетки были обработаны апигенин МТС, МТТ и анализы показали результаты согласуются с СПС, ДНК, или трипановым синим анализов. ВЫВОДЫ И/ИЛИ ЗНАЧИМОСТИ:Эти результаты показывают, что МТТ и МТС на основе анализов обеспечит недооценка антипролиферативное EGCG, и рекомендуем важность тщательной оценки методом in vitro оценка жизнеспособности клеток и распространения в зависимости от химической природы, ботанические добавки. Nutr Cancer. 2009;61(6):836-41. doi: 10.1080/01635580903285056. жүктеу/скачать 1.81 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|