Диссертация на соискание ученой степени кандидата

Анализ воздуха из ульев, взятый на 12 сутки опыта, показал, что в ульях стали присутствовать и микроорганизмы растений.

К 20.02 видовой состав микроорганизмов возрос вдвое, а количество колониальных единиц – в 4 раза в сравнении с 26.01. Необходимо отметить, что наиболее высокий удельный вес в комплексе микроорганизмов в ульях имел патогенный гриб Erysiphe cichoracearum (33,9 %), который вызывает мучнистую росу у культуры огурца. В 1,5 раза возросло число колоний гриба A.apis и в 2,6 раза повысилось число колоний гриба рода Penicillium в сравнении с предыдущими данными (7.02). Последнее может быть связано с тем, что пчелы, вероятно, приносили их специально в гнездо, так как многие виды этого рода являются продуцентами антибиотически активных веществ, подавляющих развитие фитопатогенных грибов.

Клинические обследования пчелиных семей, зоотехнические учеты и динамика продолжительности жизни пчел представлены в таблицах 5, 6 и 7. При облете после постановки пчелиных семей в теплицу в среднем на 8 % произошел отход пчел (08.02). Затем состояние пчелиных семей стабилизировалось. К 20.02 в семьях на 1,5 % увеличилась масса пчел и в 2,2 раза увеличилось количество печатного расплода. Вместе с тем средняя продолжительность жизни пчел за период 08.02-20.02 снизилась в 1,6 раза. Это связано с отходом старых пчел, с возобновлением воспитания расплода и продуцированием маточного молочка для его кормления, а также с преодолением отрицательного воздействия микроклимата теплиц.

Несмотря на то, что общий уровень патогенов растений в ульях составил 39,7 % (Pseudomonas и E.cichoracerum, см. табл.3), а также в 1,5 раза возросло число колоний A.apis – патогена пчел, вызывающего аскосфероз, клинических признаков инфекционной болезни расплода пчел не отмечено. Тем не менее, на основании микробиологических исследований можно считать, что произошла активизация патогена пчел грибковой природы. Вывод сделан на основании увеличения в 1,5 раза числа колоний гриба A.apis в пчелиных семьях.

К 03.03 разнообразие микроорганизмов осталось почти прежним. Не был зарегистрирован только патоген грибковой природы Aspergillius. Однако общее число колоний возросло еще в 2,2 раза в сравнении с предыдущими данными.

Для лучшего подсчета колоний перед разливом в чашки Петри в охлажденную до 40-45 ⁰С среду стали добавлять медицинскую стерильную желчь (15,0 г/л) в качестве ограничения роста грибных колоний.

Удельный вес патогенного гриба E.cichoraceаrum оставался самым высоким и вместе с другим опасным для растений патогеном Pseudomonas их процент в общем количестве микроорганизмов ульев составил 44,6 %.

Поведение патогенов пчел также изменилось. Если представительство P.alvei и H.alvei находилось приблизительно на одном уровне в процессе исследований, то число колоний A.apis продолжало возрастать. В процентном соотношении с другими представителями комплекса микроорганизмов данный показатель увеличился в 2,3 раза, а если считать по количеству выявленных колоний – в 7,5 раза в сравнении с исходными данными на 26.01. Представительство колоний грибов рода Penicillium возросло в 11 раз в сравнении с результатами на 07.02.

Появление пестрого расплода и увеличение количества колоний гриба A.apis свидетельствовало о том, что патоген аскосфероза стал активно размножаться. Создались условия для поражения ослабленных личинок грибом A.apis. Однако пчелиные семьи массой 1,55 кг (учет 05.03, табл.4) интенсивно освобождали расплод от больных личинок, не допуская сильного увеличения микозной массы в гнездах. В этих условиях в 1,5 раза возросло количество печатного расплода. Однако продолжительность жизни за период 20.02-05.03 сократилась еще на 27,2 % в сравнении с предыдущим показателем (табл.5).

зимне-весеннего культурооборота огурца

Резкий перепад температуры и относительной влажности между днем и ночью в начале второй декады марта в теплицах потребовали от пчелиных семей дополнительной энергии для стабилизации микроклимата гнезда. Открытие фрамуг привело к потере части летной пчелы. В результате перечисленных отрицательных воздействий произошла дестабилизация пчелиных семей. В среднем сила семей к 18.03 сократилась на 22,6 %, воспроизводство молодых пчел – на 21,6 %, а продолжительность жизни за период 05.03-18.03 снизилась в 1,6 раза. Удельный вес патогенов огурца (14.03, табл.3) в комплексе микроорганизмов ульев повысился еще на 31,4 %, а общее число микроорганизмов в комплексе увеличилось в 2 раза в сравнении с предыдущими данными (03.03). Число колоний A.apis в чашках Петри возросло в 2,3 раза. Все это способствовало тому, что во всех пчелиных семьях были зарегистрированы клинические признаки аскосфероза.

Проявление мучнистой росы на культуре огурца было зарегистрировано 23.03. т.е. через неделю после того, как проявились клинические признаки аскосфероза в пчелиных семьях. К лечению болезни приступили 25.03 и проводили регулярные обработки до конца мая.

Как отмечалось ранее, препарат квадрис принадлежит к 3-му классу опасности для пчел и является слаботоксичным. Тем не менее, постоянные обработки против мучнистой росы, выпад растений, наличие в большом количестве возбудителя мучнистой росы в теплице, проявление аскосфероза в семьях пчел крайне отрицательно сказалось на состоянии пчелиных семей. Зоотехнические учеты от 31.03; 13.04; 26.04 показали постоянное снижение численности семей, количества расплода и продолжительности жизни пчел. Фактически работоспособными остались две пчелиные семьи из пяти. Остальные погибли.

В результате исследований микрофлоры в ульях пчелиных семей в процессе зимне-весеннего культурооборота установлено, что патогены растений свободно попадают в ульи пчелиных семей. При наличии большой массы патогенов растений в теплицах они могут нанести микробный стресс пчелиным семьям, который проявляется в активизации патогенов пчелиных семей аналогичной природы, если те имеются в их гнезде.

Выявлена величина экономического порога опасности: 34 % удельного веса патогена растений в комплексе микроорганизмов, находящихся в воздухе улья, от общего числа колониальных единиц равных 100.

На основании полученных результатов можно считать, что запуском к началу инфекционных болезней пчелиных семей является накопление патогенов растений в теплицах до уровня, вызывающего снижение резистентности у пчел к собственным патогенам. Отравление пчел в результате химических обработок растений лишь усугубляет эпизоотологический процесс конкретного заболевания.

В результате исследований динамики микрофлоры в воздухе ульев пчелиных семей установлено следующее. Пчелиные семьи поступают в теплицы с нарушением зоогигиенических норм, и их микробиологический фон включает различные патогены пчел. При наличии большой массы патогенов растений в воздухе ульев они наносят микробный стресс пчелиным семьям, который проявляется в активизации патогенов пчелиной семьи аналогичной природы.

Выявлена величина экономического порога опасности: 34 % удельного веса патогена растений в комплексе микроорганизмов от числа колониальных единиц больше 100.

Дестабилизация условий содержания пчелиных семей на фоне активизации патогена пчел приводит к снижению разистентности пчелиных семей и появлению клинических признаков болезни.

Некоторое отравление пчел остатками препарата, который применяла служба защиты против болезни растений, усугубляет эпизоотологический процесс конкретной болезни.
2.2.3. Разработка условий применения Монклавита-1 в качестве

дезинфектанта против патогенной грибковой микрофлоры пчел

При оценке морфолого-культурального разнообразия микрофлоры растений выявлено, что в теплицах большинство патогенов растений составляли микроорганизмы микозной этиологии. В ульях пчелиных семей, поставленных в модули теплиц для опыления огурцов, также обнаружены микроорганизмы микозной природы, вызывающие аскосфероз пчел.

Полученные результаты привели к необходимости поиска современного дезинфектанта широкого спектра действия для надежного обеззараживания ульев и сотов от патогенной микрофлоры с тем, чтобы свести к минимуму вероятность присутствия патогенов в пчелиных семьях при их постановке в теплицы.

В последнее время все чаще встречаются публикации об успешном применении отечественного препарата Монклавит-1 в качестве лечебного средства при болезнях различной этиологии животных и птицы, а также в качестве дезинфектанта [125, 131, 173, 174].

Монклавит-1 – йодополимерный ветеринарный препарат относится к новому поколению йодосодержащих антисептиков-дезинфектантов, содержащий йод в форме комплекса N-амида-цикло-сульфопроизводного. По внешнему виду представляет собой полупрозрачную стерильную жидкость темно-желтого или красноватого цвета со слабым специфическим запахом и рН 4,1, пенящуюся при взбалтывании (ТУ 9337-007-462707004-04). Препарат производится ООО «Оргполимерсинтез СПб», Санкт-Петербург.

На основании большого количества исследований выявлено, что Монклавит-1 обладает бактерицидной и фунгицидной активностью в отношении грамотрицательных микроорганизмов, патогенных грибов и дрожжей: Escherichia coli, Candida albicans, Malassezia pachydermatis, Aspergillus fumigates, Aspergillus niger, Penicillium granulatum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum canis, Pseudomonas aerusinosa, Proteus vulgaris. Проявляет бактериостатические свойства к грамположительным микроорганизмам родов Staphylococcus и Streptococcus, также Microplazma и другие. Кроме того, оказывает пролонгированное антисептическое, дезинфицирующее, десенсибилизирующее, противоотечное и регенерирующее действие. Препарат не обладает местно-раздражающим действием, токсичностью, аллергенностью, мутагенностью, иммунодепрессивностью, тератогенностью, канцерогенностью [101].

В связи с изложенным цель работы заключалась в изучении возможности применения препарата Монклавит-1 в качестве дезинфектанта против патогенной микозной микрофлоры пчел.

Для выполнения поставленной задачи необходимо было решить следующие вопросы:

- изучить фунгицидную активность Монклавита-1 в отношении гриба Ascosphaera apis на различных тест-объектах;

- разработать режимы дезинфекции Монклавитом-1 пчеловодного инвентаря;

- изучить влияние продезинфицированных Монклавитом-1 предметов на пчел.

препарата Монклавит-1

Взвесь наносили на тест-объекты из дерева, оцинкованного железа и воска (кусочки сота). Инфицированные тест-объекты подсушивали в течение 30 минут, после чего наносили 1, 3, 5, 7 и 10 %-ные растворы Монклавита-1. Тест-объекты контрольной группы подвергали обработке стерильной водой в тех же условиях. Экспозиции в опытах составляли 2, 4, 6, 12, 24 ч.

После окончания экспозиции с тест-объектов путем смыва и соскоба брали пробы и центрифугировали при 3 тыс. об/мин в течение 20 минут. Надосадочную жидкость сливали, а осадок высевали на среду Сабуро и культивировали в термостате при температуре 30-32 ⁰С в течение 12 суток.

Оценку качества дезинфекции проводили по наличию или отсутствию роста гриба. Достоверность эксперимента учитывали при получении трех совпадающих результатов.

Представленные результаты (табл.6) показали, что препарат Монклавит-1 обеззараживает деревянные, металлические и восковые тест-объекты от Ascosphaera apis при концентрации 5 %. Причем деревянные и восковые тест-объекты обеззараживались при экспозиции 12 ч, а металлические – 24 ч.

Перед испытанием дезинфектанта мы изучали характер распределения аэрозоля при помощи баллона «Росинка» объемом 1,5 л на стенках, дне улья, в ячейках сотов, металлическом инвентаре. Длина факела аэрозоля достигала 25,0+3 см, что позволяло обрабатывать и внутреннюю поверхность безразборных ульев (лежаки, Дадан).

Таблица 6. Степень обеззараживания тест-объектов

препаратом Монклавит-1 (n = 20)

В ходе опытов установлено, что для оптимального равномерного покрытия окрашенным аэрозолем требуется 500+10 мл на 12-рамочный улей, 1200+15 мл – на многокорпусный (4 корпуса). Полученные результаты позволили рассчитать необходимое количество дезраствора в зависимости от типа ульев, их площади и объема внутреннего пространства (табл.7).При разработке режимов дезинфекции сотов использовали традиционный способ дезинфекции, когда заполняют раствором дезинфектанта каждую ячейку. В этом случае на 1 сотовую рамку требуется 1 л дезраствора. Кроме того, применяли метод опрыскивания, когда с помощью окрашенного раствора, чтобы правильно рассчитать объем дезинфектанта, опрыскивали внутренние стенки ячеек до равномерного нанесения дезраствора. Установлено, что обеззараживание происходит при аэрозольной обработке с обеих сторон с расстояния 25-30 см с расходом на гнездовую рамку (435х300 мм) по 200-250 мл, на магазинную – 100-125 мл.