Эволюция микробно-растительных симбиозов: филогенетические, популяционно-генетические и селекционные аспекты
жүктеу/скачать 4.14 Mb.
|
| Материалы и методы
Штаммы ризобий люцерны (Sinorhizobium meliloti: CIAM1723=425а, CIAM1752=406б, 281, 851, CIAM2502=852), гороха (Rhizobium leguminosarum bv. viceae: CIAM1026=250a), козлятника (R. galegae: 740), маша (Bradyrhizobium sp. Vigna: CIAM190 и арахиса (B. sp. Arachis: CIAM0104) получены из коллекции клубеньковых бактерий ВНИИСХМ. Штаммы S. meliloti СХМ1, СХМ1-105, СХМ1-214, СХМ1-46 получены из лаборатории генетики и селекции микроорганизмов ВНИИСХМ. Рекомбинантные штаммы S. meliloti c дополнительными копиями генов транспорта дикарбоновых кислот получены из отдела генетики Билефельдского университета, ФРГ от проф. А. Пюлера. Семена бобовых растений получены из коллекции ВИР (отделы кормовых и зернобобовых культур). Коллекция из 21 линии люцерны 1-3 степени инбридинга (полученные из сорта Омская 192 M. varia) предоставлена Э.В.Квасовой и В.К.Шумным (Институт цитологии и генетики СО РАН). Стерильные микровегетационные опыты проводили при выращивании растений на вермикулите с безазотной средой Красильникова-Кореняко (Фёдоров и др., 1986). Вегетационные опыты проводили при выращивании растений в сосудах с нестерильной почвой по стандартной методике (Проворов и др., 1989). Полевые мелкоделяночные опыты проводили с использованием стандартных методик рандомизации повторностей (Доспехов, 1972). Для статистической обработки данных использовали методы одно- или двухфакторного дисперсионного анализа, факторного анализа, корреляционного анализа, t-критерия Стьюдента, а также сравнения параметров экспериментально полученных распределений с нормальными (Лакин, 1990; Дубров и др., 1998). Маркирование плазмид транспозоном Tn5-mob и их последующую мобилизацию проводили с помощью нереплицирующегося в ризобиях вектора pSUP5011; штамм-донор транспозона S17-1 Escherichia coli получен из отдела генетики Билефельдского университета, ФРГ. Для культивирования ризобий и проведения конъюгации использовали твердую агаризованную среду 79 c добавлением антибиотиков, необходимых для отбора мутантов и рекомбинантов. Для моделирования популяционной динамики симбиоза использовали метод математической композиции, который позволяет использовать экспериментальные данные, полученные методами частной и популяционной генетики, для реконструкции интегральных процессов коэволюции микроорганизмов и растений. Созданные на основе моделей методики компьютерных экспериментов обеспечивают прогнозирование эволюции симбиоза, происходящей под действием различных форм отбора в сочетании с другими микроэволюционными факторами (мутагенез, перенос генов, генетический дрейф, миграция, популяционные волны), действующими в системах “хозяин-среда”. жүктеу/скачать 4.14 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|