59(H2N2) 03. 02. 02 вирусология

жүктеу/скачать 0.54 Mb.

бет	3/4
Дата	01.07.2016
өлшемі	0.54 Mb.
	#169429
түрі	Автореферат

1 2 3 4

Таблица 13. Размножение одногенных реассортантов между штаммами вируса гриппа A/WSN/33(H1N1) И ХА А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) в респираторном тракте мышей при интраназальном введении.

Исходные вирусы и реассортанты	Генотип реассортанта								Титр вируса в носоглотке мышей (lg ЭИД₅₀/ 1.0 g)	Титр вируса в легких мышей (lg ЭИД₅₀/ 1.0 g)	Фенотип
A/WSN/33	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	5,5±0,50	5,16±0,56
А/Краснодар/101 /35/59	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,5±0,50	<1,0	att
1	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	5,0±0,25	4,5±0,81
2	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,40±0,14	2,0±0,70	att
3	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,5±1,0	3,5±0,91	att(+/-)
4	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,5±0,81	5,0±0,50
5	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,6±0,62	3,5±0,40	att(+/-)
6	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,0±0,70	<1,0	att

Как и ожидалось, все одногенные реассортанты реплицировались в назальной полости мышей. Однако было обнаружено, что степень размножения одногенных реассортантов в легочной ткани мышей значительно колебалась. Одногенные реассортанты, содержащие единичные гены из генома вакцинного штамма, кодирующие белки PB2 и NP, размножались в легких мышей с такой же интенсивностью, как и вирулентный штамм A/WSN/33. Реассортанты, содержащие единичные PB1-ген или NS-ген от ХА вакцинного штамма, значительно снизили либо полностью утратили способность размножаться в легких мышей.

Дополнительное включение генов ХА штамма в геном вирулентного штамма в большинстве случаев приводило к более выраженному проявлению аттенуационного фенотипа. Во всех изученных комбинациях генов из геномов вакцинного и вирулентного штамма просматривается доминирование PB1 и NS-генов, полученных от ХА вакцинного штамма А/Краснодар/101/35/59 в отношении att фенотипа (табл. 14).

Таблица 14. Размножение полигенных реассортантов между штаммами вируса гриппа А/WSN/33(H1N1) и А/Краснодар/101/35/59(Н2N2) в респираторном тракте мышей при интраназальном введении.

Исходные вирусы и реассортанты	Генотип реассортанта								Титр вируса в носоглотке мышей (lg ЭИД₅₀/ 1.0 g)	Титр вируса в легких мышей (lg ЭИД₅₀/ 1.0 g)	Фенотип
A/WSN/33	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,5±0,40	5,5±0,40
А/Краснодар/101 /35/59	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,5±0,70	<1,0	att
7	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,0±0,40	2,0±0,40	att
8	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	5,0±0,61	6,0±0,40
9	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	5,0±1,22	2,0±1,10	att
10	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,5±0,40	<1,0	att
11	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4,25±0,53	4,75±0,24
12	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,5±0,65	<1,0	att
13	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,75±0,32	<1,0	att
14	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,75±0,93	<1,0	att
15	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3,25±0,53	<1,0	att

Вместе с тем, одногенные реассортанты с включением РА-гена и М-гена от ХА штамма обладали сниженной способностью к размножению в легких мышей по сравнению с вирулентным штаммом, что указывало на то, что эти реассортанты были частично аттенуированы. Мы можем предположить, что эта частичная аттенуация может объясняться либо наличием экстрагенной супрессии, либо эффектом констелляции генов.

Известно, что штамм A/WSN/33 обладает нейровирулентостью для мышей [Schulman, Palese, 1977; Sugiura, Ueda, 1979]. В этой связи представляло интерес исследовать нейровирулентность полученных нами одногенных и полигенных реассортантов. Предварительные эксперименты показали, что штамм А/Краснодар/101/35/59 не вызывал гибель мышей-сосунков при интрацеребральном заражении.

Таблица 15. Изучение нейровирулентности одногенных и полигенных реассортантов между штаммами вируса гриппа A/WSN/33(H1N1) И ХА А/Краснодар/101/35/59(Н2N2).

Исходные вирусы и реассортанты	Генотип реассортанта								Нейровирулентность для мышей сосунков
A/WSN/33	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	11/13
А/Краснодар/101/35/59	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/9
1	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	11/11
2	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/10
3	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	2/10
4	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	6/9
5	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	4/10
6	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/8
7	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/11
8	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	9/9
9	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	3/13
10	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/8
11	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/9
12	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	2/10
13	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	11/13
14	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	0/9
15	PB2	PB1	PA	HA	NP	NA	M	NS	11/11

Как видно из таблицы 15, включение генов ХА штамма в геном штамма A/WSN/33 сопровождалось различными эффектами. Включение PB1 гена или NS гена в геном штамма А/WSN/33 приводило либо к полной потере нейровирулентости, либо к её существенному снижению. Реассортанты с включением PB2-гена или NP-гена от ХА штамма обладали значительно более высокой вирулентостью.

В целом, при изучении нейровирулентности реассортантов для мышей-сосунков аттенуационный фенотип был более выражен, поскольку наблюдался у большего количества реассортантов.

В определенной степени ts и са фенотип мог быть обусловлен мутациями в генах, кодирующих «поверхностные» белки вириона: гемагглютинин и нейраминидазу. Чтобы выяснить этот вопрос, нами были получены реассортанты между штаммом A/WSN/33 и ХА штаммом, которые включали единичные гены, кодирующие HA и NA-гены от ХА штамма. Как видно из таблицы 16, оба реассортанта по ts и са фенотипу не отличались от вирулентного штамма A/WSN/33.

жүктеу/скачать 0.54 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 2 3 4