Таблица 16. Изучение ts и са фенотипа реассортантов между штаммами вируса гриппа А/WSN/33(Н1N1) И ХА А/Краснодар/101/35/59(Н2N2), унаследовавших единичные гены, кодирующие НА- и NA- белки ХА штамма А/Краснодар/101/35/59.
Исходные вирусы и реассортанты
|
Генотип реассортанта
|
Титр вируса
lg ЭИД50/0,2 мл
|
Фенотип
|
34°С
|
38°С
|
25°С
|
A/WSN/33
|
PB2
|
PB1
|
PA
|
HA
|
NP
|
NA
|
M
|
NS
|
6,5±0,5
|
6,25±0,4
|
1,0
|
|
А/Краснодар/101
/35/59
|
PB2
|
PB1
|
PA
|
HA
|
NP
|
NA
|
M
|
NS
|
6,0±0,5
|
<1,0
|
5,5±1,0
|
ts, ca
|
16
|
PB2
|
PB1
|
PA
|
HA
|
NP
|
NA
|
M
|
NS
|
6,0±0,5
|
6,0±0,5
|
1,0
|
|
17
|
PB2
|
PB1
|
PA
|
HA
|
NP
|
NA
|
M
|
NS
|
5,0±0,4
|
5,5±0,5
|
1,0
|
|
При анализе реассортантов видно, что они различаются по своим характеристикам. В этой связи появляется возможность распределения их в несколько групп. В группу I попадают реассортанты, сходные по своим характеристикам с вирусом дикого типа. В данную группу можно поместить одногенные реассортанты 1, 3, 4 (РВ2, NP) и полигенные реассортанты 8, 11. В группу II можно включить реассортанты, тождественные по характеристикам ХА вакцинному штамму: одногенные реассортанты 2, 6 (РВ1, NS), и полигенные реассортанты 7, 9, 10, 14, 15. Реассортанты с промежуточными характеристиками можно включить в группу III. Все исследованные реассортанты, входящие в эту группу, размножались в носовом эпителии мышей, однако с разной интенсивностью. Так, в частности, реассортанты, входящие в группу IIIa, активно размножались в назальном эпителии, в то время как входящие в группу IIIb размножались значительно хуже (М, РА). Перенос РВ1-гена или NS- гена ХА штамма в геном вируса А/WSN/33 приводил к значительному снижению репродукции соответствующих одногенных реассортантов при 38˚С, а также полному подавлению репродукции вируса в легких мышей и снижению летальности мышей сосунков. Обзор характеристик полигенных реассортантов показывает, что любое включение комбинации генов ХА-штамма – донора аттенуации, в состав которой входят РВ1- ген или NS-ген, вызывает повышение экспрессии как ts фенотипа, так и att фенотипа. Полученные результаты позволяют сделать вывод, что РВ1-ген и NS-ген ХА штамма А/Краснодар/101/35/59 содержат ключевые детерминанты, определяющие ts фенотип и att фенотип данного ХА штамма. В этом отношении штамм А/Краснодар/101/35/59 несколько отличается от хорошо изученных штаммов –доноров A/ Энн Арбор /6/60 и А/Ленинград/134/17/57, у которых детерминанты, определяющие ts фенотип и att фенотип связаны с генами, кодирующими белки РВ1 и РВ2.
ВЫВОДЫ.
-
Реассортанты, полученные при скрещивании ХА штамма А/Краснодар/101/35/59(H2N2) и эпидемических штаммов A/Кумамото/102/02(H3N2) и A/Берн/07/95(H1N1), обладают биологическими свойствами, необходимыми для реассортантов-кандидатов в живые гриппозные вакцины.
-
Анализ одногенных и полигенных реассортантов, полученных методами обратной генетики между ХА штаммом А/Краснодар/101/35/59(Н2N2) и вирулентным штаммом А/WSN/33(Н1N1), свидетельствует о том, что РВ1- ген и NS- ген ХА штамма содержит ключевые детерминанты, ответственные за ts фенотип и att фенотип данного штамма.
-
Анализ att фенотипа полигенных реассортантов свидетельствует о доминировании генов, содержащих детерминанты, ответственные за att фенотип в составе генома реассортантов. Этот факт позволит сделать вывод о безопасности применения живых гриппозных во время гриппозной эпидемии.
-
Полученные факты свидетельствуют об отсутствии мутаций, ответственных за формирование ts фенотипа, в генах ХА штамма А/Краснодар/101/35/59, кодирующих поверхностные белки HA и NA.
-
ХА штамм А/Краснодар/101/35/59(H2N2) можно рассматривать как перспективный штамм-донор для реассортантов-кандидатов в живые гриппозные вакцины.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
-
Terekhov A. Analysis of reassortants on the base of A/Krasnodar/101/35/59(H2N2) cold-adapted strain and H1N1 and H3N2 wild-type influenza virus strains / Terekhov A. // Young scientist workshop «Methods to study influenza virus». Berlin, Germany. – 2011. – P. 48-49.
-
Терехов А.В. Анализ реассортантов, полученных на основе ХА штамма вируса гриппа А/Краснодар / Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г. // V Международная школа молодых ученых по молекулярной генетике «Непостоянство генома». Звенигород. - 2012. – С. 64.
-
Терехов А.В. Получение холодоадаптированных (ХА) реассортантов-кандидатов в живые гриппозные вакцины на базе нового штамма-донора аттенуации А/Краснодар/101/35/59(H2N2) и выявление генетических детерминант, ответственных за его полезные биологические свойства, с помощью методов генной инженерии / Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г. // Первая всеросийская научная конференция молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века». Москва. – 2012.- С. 316-317.
-
Терехов А.В. Генетические основы аттенуации холодадаптированного штамма A(H2N2)/Краснодар/101/35/59 – донора для живых гриппозных вакцин / Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г., Коптяева И.Б., Лисовская К.В., Кост В.Ю. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. – 2013. - № 3 (70). – С. 70-77.
-
Терехов А.В. Изучение att-фенотипа реассортантов между вирулентным штаммом гриппа A(H1N1)/WSN/33 и вакцинным холодоадаптированным штаммом вируса гриппа A(H2N2)/Краснодар/101/35/59 / Терехов А.В., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г., Коптяева И.Б., Лисовская К.В., Кост В.Ю. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. – 2013. - № 5 (72). – С. 41-47.
-
Терехов А.В. Генетические основы аттенуации холодадаптированного штамма A/Краснодар/101/35/59(H2N2) / Терехов А.В., Кост В.Ю., Цфасман Т.М., Маркушин С.Г. // Материалы конференций молодых ученых. Научно- исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Российской академии медицинских наук, 2008-2013 гг. Москва. – 2013. – С. 260-272.
Достарыңызбен бөлісу: |
