Химия растительного сырья

жүктеу/скачать 9.11 Mb.

бет	22/63
Дата	11.06.2016
өлшемі	9.11 Mb.
	#128250

1 ... 18 19 20 21 22 23 24 25 ... 63

Выводы

Проведенные исследования позволили оценить содержание ФКК в надземной части василька шероховатого, рекомендовав оптимальный срок сбора растения – фазу массового цветения для получения наибольшего количества данной группы БАВ.

Список литературы

Федорова А.А. Растительные ресурсы СССР : цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Asteraceae. Л., 1987. 326 с.
Каминский И.П., Кадырова Т.В., Краснов Е.А., Ивасенко С.А., Адекенов С.М. Сесквитерпеновые лактоны василька шероховатого (Centaurea scabiosa L.) // Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений: матер. II межд. науч. конф. Алматы, 2007. С. 194.
Алексеюк Н.В., Поздняков Е.Г. Изучение химического состава василька шероховатого // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. 1986. С. 12.
Запорожец О.А., Крушинская Е.А., Барвинченко В.Н. Спектрофотометрическое определение гидроксикоричной кислоты и ее производных в препаратах эхинацеи // Хим.-фармац. журнал. 2003. Т. 37. №12. С. 11–13.
Косман В.М., Зенкевич И.Г. Количественное экстрационно-спектрофотометрическое определение суммарного содержания гидроксикоричных кислот в присутствии флавоноидов в экстрактивных веществах некоторых лекарственных растений // Растительные ресурсы. 2001. №4. С.123–129.
Куркин В.А., Авдеева О.И., Авлеева Е.В., Мизина П.Г. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench // Растительные ресурсы. 1998. Т. 34, вып. 2. С. 81–85.

Потупило в редакицю 5 марта 2008 г.

После переработки 13 мая 2008 г.

УДК 581.192.2:582.757.2

Содержание флавоноидов в некоторых видах рода Euphorbia L.

© Е.А. Карпова^{^*}, Е.П. Храмова, Г.И. Высочина

Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, ул. Золотодолинская, 101, Новосибирск, 630090 (Россия) E-mail: karpova@csbg.nsc.ru

Определено содержание гликозидов и агликонов флавоноидов в надземной части растений 6 видов Euphorbia L. из секции Esula и 3 видов из секции Tulocarpa хроматоспектрофотометрическим методом. Содержание гликозидов составило 0,92–3,63% для видов секции Esula и 0,46–1,12% для видов секции Tulocarpa, агликонов – 0,04–0,34% и 0,04–0,45% соответственно. В надземной части растений интродуцированного вида E. polychroma гликозидов и агликонов флавоноидов 1,29 и 0,21% соответственно.

Изучена сезонная динамика содержания гликозидов кверцетина, кемпферола и неидентифицированного флавонолового агликона ( max 259, 362) в надземной части растений дикорастущего вида E. virgata и интродуцированного вида E. polychroma.

Ключевые слова: Euphorbia, флавоноиды, флавонолы, кверцетин, кемпферол.

Введение

Фитохимическое исследование видов рода Euphorbia L. представляет интерес в связи с наличием в них соединений с высокой биологической активностью, имеющих значительный потенциал для медицинского использования. В литературе имеются сведения о медицинском применении молочаев при более чем 30 заболеваниях [1]. При этом было показано, что биологическая активность, в частности противовоспалительное [2], антимикробное [3], фунгицидное [4], антилейкемическое [5, 6] и спазмолитическое действие [7], связана прежде всего с полифенольным комплексом [8, 9].

Актуальность исследования полифенольных соединений рода молочай определяется также возможностью их использования для решения проблем хемотаксономии рода и необходимостью включения химических признаков в систему анализа филогенетических связей [10].

На территории бывшего СССР известно около 200 видов молочаев [11]. В Сибири распространено около 30 видов, относящихся главным образом к 3 секциям крупнейшего подрода Северной Азии Esula Pers.: Esula Dumort., Tulocarpa (Raf.) Prokh. и Holophyllum (Prokh.) Prokh.

Перспективы применения фенольных соединений в хемотаксономии рода Euphorbia определяются наличием фенольных веществ различной природы – флавонов, флавонолов, флавононов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов [4]. В составе флавонолов найдены агликоны: кверцетин, кемпферол, мирицетин, рамнетин, изорамнетин и их 3-гликозиды: глюкозиды, рамнозиды, рутинозиды, глюкурониды, галактозиды [12–15], а также галлаты галактозидов кверцетина [16]. При этом сведения о фенольных соединениях сибирских видов крайне ограничены и касаются главным образом содержания суммарных фракций флавоноидов и кумаринов [17, 18].

Цель исследования – определение содержания флавоноидов в образцах видов Euphorbia, а также изучение изменчивости состава и содержания флавонолгликозидов.

В задачи исследования входило определение содержания флавоноидов в надземной части 10 видов рода Euphorbia – из секции Esula Dumort.: E. esula L., E. subcordata Ledeb., E. virgata Waldst. et Kit., E. chancoana Worosch., E. mandshurica Maxim., E. leoncroizatii (Hurusawa) Oudejans; из секции Tulocarpa (Raf.) Prokh.): E. lutescens Ledeb., E. soongarica Boiss., E. pachyrhiza Kar. et. Kir.; содержания флавоноидов в надземной части интродуцированного вида E. polychroma Kern.; исследование сезонной изменчивости состава флавонолгликозидов в надземной части растений дикорастущего вида E. virgata (Бердск, Новосибирская обл.) и интродуцированного – E. polychroma (территория ЦСБС СО РАН).

Экспериментальная часть

Хроматоспектрофотометрическим методом 19, с. 32–33 определяли содержание флавоноидов в надземной части растений 10 видов рода Euphorbia: E. polychroma (европейский вид [20, с. 364–365], интродуцированный в ЦСБС СО РАН, 2006 г.), E. esula (Алтайский край, Алтайский р-н, 1993 г.), E. subcordata (Восточный Казахстан, хр. Саур, 1998 г.), E. virgata (г. Бердск, Новосибирская обл., 2002 г.), E. chancoana (Приморский край, Ханкайский р-н, оз. Ханка, 2004 г.), E. mandshurica (Приморский край, Октябрьский р-н, 2004 г.), E. leoncroizatii (Приморский край, Ханкайский р-н, 2004 г.), E. lutescens (Респ. Алтай, Семинский перевал, 2003 г.), E. soongarica (Вост. Казахстан, Зайсанский р-н, 1998 г.), E. pachyrhiza (Вост. Казахстан, хр. Манрак, 1998 г.). Образцы для анализа были собраны в фазе плодоношения (из гербария лаборатории систематики и флорогенетики ЦСБС, за исключением E. virgata, E. lutescens и E. polychroma).

Содержание флавонолгликозидов в надземной части растений дикорастущего вида E. virgata (г. Бердск, Новосибирская обл.) и интродуцированного вида E. polychroma (территория ЦСБС СО РАН) определяли в различные фазы вегетации растений в 2006 г.

Точную навеску воздушно-сухого сырья (0,1–0,5 г) измельчали и исчерпывающе экстрагировали 70%-ным водным этанолом на кипящей водяной бане. Объединенные извлечения концентрировали под вакуумом до полного удаления спирта и освобождали от липофильных соединений хлороформом. Водный остаток использовали для определения содержания флавонолов.

Для двумерной хроматографии экстрактов на бумаге использовали системы: н-бутанол – уксусная кислота – вода (40 : 12 : 28) (БУВ) (первое направление) и дистиллированная вода (второе направление) [21, с. 41]. Гидролиз гликозидов проводили 2 N соляной кислотой в течение 2 ч на кипящей водяной бане. Для двумерной хроматографии гидролизатов на бумаге использовали системы: н-бутанол – уксусная кислота – вода (40 : 12 : 28) (БУВ) (первое направление) и уксусная кислота – муравьиная кислота – вода (10 : 2 : 3) (второе направление).

Оптическую плотность полученных элюатов определяли на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 365 нм (для гликозидов) и 370 нм (для агликонов). Для построения калибровочного графика использовали растворы рутина в 40% этаноле и кверцетина в 96% этаноле.

Для определения содержания флавонолгликозидов в образцах (отдельно гликозидов кверцетина, кемпферола и неидентифицированного компонента A) при изучении сезонной динамики E. virgata и E. polychroma проводили анализ агликонов, образующихся после кислотного гидролиза соответствующих гликозидов методом ВЭЖХ 22, 23.

Кислотный гидролиз: к 0,5 мл водно-этанольного растительного экстракта прибавляли 0,5 мл HCl (2 н) и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 ч. После охлаждения разбавленный экстракт пропускали через концентрирующий патрон Диапак С16 (ЗАО «БиоХимМак») для освобождения от примесей гидрофильной природы, затем агликоны смывали 96%-ным этанолом.

Анализ гидролизатов проводили на аналитической ВЭЖХ-системе, состоящей из жидкостного хроматографа “Agilent 1100” с УФ-спектрофотометрическим детектором и системы для сбора и обработки хроматографических данных (Германия). Разделение осуществляли на колонке Hypersil ODS размером 1252,0 мм с октадецилсиликагелем (С18) с диаметром частиц 3 мкм при градиентном режиме элюирования. В подвижной фазе содержание метанола в водном растворе ортофосфорной кислоты (0,1%) изменялось от 45 до 48% за 18 мин. Скорость потока элюента – 0,2 мл/мин. Объем вводимой пробы – 3 мкл. Температура колонки – 35 °C. Детектирование – при  360 нм. Перед использованием подвижную фазу фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Для приготовления подвижных фаз и экстракции применяли метанол (ос.ч.), ортофосфорную кислоту (ос.ч.), бидистиллированную деионизированную воду. Стандартные растворы готовили в концентрации 10 мкг/мл. Стандарты кверцетина, кемпферола – производства фирмы «Fluka».

Количественное определение индивидуальных компонентов проводили по методу внешнего стандарта как наиболее оптимальному для хроматографического анализа многокомпонентных смесей 22.

Суммарное содержание флавонолгликозидов (отдельно гликозидов кверцетина, кемпферола и компонента A) рассчитывали по содержанию агликонов, образующихся после кислотного гидролиза, применяя известные из литературных данных коэффициенты для пересчета концентрации агликона на концентрацию соответствующего гликозида: 2,504 – для кверцетина и 2,588 – для кемпферола 22, 23. Для расчета содержания гликозидов неидентифицированного агликона А использовали коэффициент пересчета для кверцетина.

Идентификацию веществ проводили по данным качественных реакций, УФ-спектроскопии [24], а также методом сравнения с достоверными образцами.

Компонент А выделяли методами хроматографии на колонке с силикагелем и препаративной хроматографии на бумаге. УФ-спектр, спектры с ионизирующими добавками и комплексообразователями сняты на спектрофотометре Specord UV VIS.

Изменчивость состава агликонов флавонолов надземной части растений дикорастущего вида E. virgata изучали в 2006 г. в фазах начала вегетации (29.05), бутонизации (06.06), цветения (21.06), плодоношения (08.07) и конца вегетации (10.09); интродуцированного вида E. polychroma – в фазах начала вегетации (29.05), цветения (06.06), плодоношения (15.08) и конца вегетации (22.09).