Исследование биол-кой активности штаммов бифидобактерий
жүктеу/скачать 37.5 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- W =( М 1 – М 2 )/ ( М 1 – М 0 )* 100;
- Биологическая активность штамма
- Антагонистическая активность
- Определение антибиотической активности
| Методы контроля качества сухого бакпрепарата»Бифидумбактерин». Исследование биол-кой активности штаммов бифидобактерий.
Для производства бакпрепарата бифидумбактерин применяют штамм В.bifidum, род Bifidobacterium. Штамм получают в лиофилизованном виде и хранят при тем-ре -18°С. 1.Морфологические св-ва штамма В.bifidum конт-ролируют путём просмотра мазков, окрашенных по Грамму. В мазках не должны быть мко, морфология которых отличается от морфологии бифидоб. 2. Ферментативную активность штамма оценивают по отсутствию способности разжижать желатин, образовывать газ и каталазу. 3. Контроль отношения штамма к желатину про-водят путём посева штамма в пробирки с питат. средой Блаурокка, содержащей 10% желатина. Инкубируют при тем-ре 38°С в теч.48 ч., после чего выдерживают в холодильнике в теч. суток. В пробирках не должно быть разжижжения желатина. 4.Контроль на отсутствие газообразования прово-дят путём посева штамма уколом в столбик спло-шной питат. среды Блаурокка. После инкубирования при 38°С в теч. (48-72)ч. По линии укола в среде не должно быть пузырьков газа и трещин. 5.Контроль на каталазу проводят путём внесения колоний бифидобак., выделенной после роста в полужидкой, питат. среде в 1-2 каплях 3% Н2О2 на предметном стекле. Вокруг колоний не должны образовываться пузырьки газа. 6. Растворимость, прозрачность, цветность.Препарат при добавлении 0.9% NaCl из расчёта 1мл на одну дозу, должен после перемешивания в теч. 5 мин образовывать непрозрачную гомогенную взвесь. 7. Показатель концентрации водородных ионов рН= 6.5±0.5ед. Для опр-ния 2.5г бакпрепарата разводят в 25мл 0.9%Na Cl –из расчёта 1мл на дозу препарата. 8. Массовая доля влаги не более3.5%. Чистый сухой бюкс предварительно высушивают в сушильном шкафу при тем-ре 105-110°С в теч. 1-1.5 ч с последующим охл-нием в эксикаторе. Охлаждённый бюкс вместе с крышкой вынимают из эксикатора и взвешивают. В бюкс отвешивают сухого бакпрепара-та. Открытый бюкс с навеской 0.2г и крышку по-мещают в нагретый до тем-ры (105±2°С) сушильный шкаф, где выдерживают при этой тем-ре 45-60 мин. Бюкс вынимают из сушильного шкафа, закрывают крышкой и переносят для охл-ния в эксикатор. После охл-ния до тем-ры 18-25°С бюкс взвешивают, и открыв крышку, ставят в сушильный шкаф для повторного высушивания на 30-40мин. По истеч. этого вр. бюкс закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Высушивание считают законченным, если разница между последовательными взвешиваниями составляет не более 0.0004г. Если разница оказывается большей, то высушивание в теч. 30-40 мин повторяют, Проводят 2 параллельных опр-ния, которые при заранее известной точности анализа исключают получение неверных результатов из-за случайного нарушения методики. СОДЕРЖАНИЕ ВЛАГИ (W, в %) рассч-ют по форму-ле:W=( М1 – М2 )/ ( М1 – М0 )* 100; где, М0 – масса пустого бюкса;М1 – масса бюкса с навеской бакпре-парата до высушивания, г; М2 – масса бюкса с навеской бакпрепарата после высушивания,г.
Для создания анаэробных условий, необходимых для роста бифидоб., 0.1 мл взвеси 18-часовой культуры B. seracium marcesens густой, соотв-щей 10ед. мутности засевают сплошным газоном на МПА (или агар Хоттингера) разлитой тонким слоем в крышку чашки Петри и доращивают в теч. 4ч. при 37°С. На дно чашки наливают питат среду и петлёй в 2мм по диаметру чашки непосредственно из флакона наносят полоской культуру B. Bifidum. Края чашки Петри закрывают стерильным резиновым обхватом ширина в 5см (для создания более анаэробных условий). Определение антибиотической активности, методом последовательных разведений по И А Красильникову , модифицированным для молочнокислых бактерий. В качестве тест-культур Е.coli, В.subtilis. в стерилизованное об. молоко вносят 1% куль-туры молочнокис. бактерий и выдерживают в теч. 18ч в термостате при тем-ре 37°С. Затем сгусток отфильтровывают через бумажный фильтр и сыворотку пропускают через мембранный фильтр. В стерильные маленькие пробирки разливают по 1мл стерильного гидролизованного молока разбавленного в 3 раза водой( рН=6). В первую пробирку с гидролизованным молоком вносят 1мл фильтрата, а затем из первой пробирки во вторую переносят 1мл смеси фильтрата с гидролизованным молоком и т. д. При этом получают последовательный ряд разведений фильтрата. Затем во все пробирки вносят по 1ед. петле 500млн. бактериальной взвеси тест-культуры, приготовленной путём разведения суточной культуры на мясо-пептонном бульоне. Контролем является пробирка, в которую вносят 1мл гидролизованного молока и 1 пет-лю тест-культуры. Пробирки с посевом выдер-живают 18ч. в термостате при тем-ре 37°С, просматривают визуально. Отмечают отсутствие или подавление роста тест культуры. Методы исследования жидких заквасок молочнокис. мко.В жидких заквасках анализируют показатели:
БГКП опр-ют посевом закваски в среду Кесс-лера, выдерживая при t 43-45оС в теч. 18-24 ч. Газ свидетельствует о возможной контаминации закваски бактериями гр кишечной палочки. Дрожжи и плесневые грибы опр-ют путем по-сева 1см3 закваски в чашки Петри на сусло-агар. Споровые бактерии опр-ют посевом 1см3 жидкой закваски в 20 см3 стерильного обезж. молока с добавлением парафина для создания анаэробных условии и без парафина для культивирования в аэробных условиях. Обе пробы термостатируют при 85оС в тече. 10 мин. Охлаждают и выдерживают при 30оС в теч. 2 су-ток. В случае контаминации молока анаэробными споровыми бактериями парафиновая пробка поднимается, молоко может пептонизироваться, при микроскопировании препаратов видны утолщенные палочки со спорами. жүктеу/скачать 37.5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|