Issn 305-9397. Ғылым және білім. 2022. №1-1 (66) issn 2305-9397
Ауыл шаруашылығы ғылымдары
жүктеу/скачать 7.12 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- ISSN 2305-9397. Ғылым және білім. 2022. № 3-3 (68)____ _
| ______ ____________Ауыл шаруашылығы ғылымдары
164 среде. Восемь культур были проверены на наличие возбудителя бактериального ожога Erwinia amylovora методом ПЦР. Для выделения ДНК из чистых культур использовали два способа. В первом случае использовали реагент PrepMan™ Ultra Sample Preparation Reagent. Чистота ДНК определена при помощи микроспектрофотометра NanoDrop-2000. Норма для чистоты нуклеиновых кислот Е260/280 составляет порядка 1,8. Чистота выделенных ДНК показана на рисунке 2. Рисунок 2 – Чистота и концентрация ДНК, выделенная методом PrepMan Ultra Чистота и концентрация выделенных ДНК при использовании метода кипячения представлена на рисунке 3. Рисунок 3 – Чистота и концентрация ДНК, выделенная методом кипячения Результаты исследования показали, что при выделении реагентом Prempan Ultra концентрация ДНК в образцах варьировала от 83,6 нг/мкл до 235,6 нг/мкл, чистота Е260/280 от 1,66 до 1,87. Тогда как, при выделении кипячением показатели концентрации ДНК составляли от 6,1 нг/мкл до 11,4 нг/мкл при чистоте Е260/280 от 1,56 до 2,19. В результате исследовании, выявлено что метод выделения реагентом PrepMan™ Ultra является более эффективным и качественным по сравнению с методом кипячения. Постановка ПЦР. Для подбора оптимального метода постановки ПЦР из описанных трех методов, использовали 3 пробы культуры Erwinia аmylovora. Исследовали сорта №1 Апорт, №2 Восход, №3 Синап Алматинский. В результате ПЦР анализа возбудитель был подтвержден с использованием всех трех описанных специфических пар праймеров в образцах №1 и №3, в образце №2 наработки ПЦР продукта не выявлено (рисунок 4). ISSN 2305-9397. Ғылым және білім. 2022. № 3-3 (68)____ _ 165 Рисунок 4 – Электрофореограмма результатов ПЦР с использованием 3-х специфи-ческих пар праймеров G1/G2, FER1/rgER2 и PEANT1/PEANT2 для образцов №1-3 По данным рисунка 4 видно, что с использованием праймеров G1/G2 в пробах №1,№3 образовался ПЦР продукт размером 187 п.о., который соответствует данным описанным Taylor et al. 2001. С использованием праймеров FER1/rgER2 и PEANT1/PEANT2 нарабатывается продукт размером 458 п.о., и 391 п.о соответственно. Полученные данные согласно описанным методам ПЦР, подтверждают наличие возбудителя Erwinia аmylovora. Таким образом, в последующих исследованиях для идентификации возбудителя бактериального ожога был выбран оптимальный метод ПЦР описанный Stöger et al. 2006. Данным методом были исследованы все образцы, которые в питательной среде образовалась культура, схожая по морфологии возбудителя бактериального ожога (8 проб). В результате молекулярного анализа бактериальная культура из образцов №1 Апорт, №2 Восход, №3 Синап Алматинский, №4 Максат, №5 Голден Делишес, №6 Конфетное, №7 Пинова, №8 Пинк Леди образовал ПЦР продукта размером 391 п.о. у образцов №1, №2, и №7 (рисунок 5). Рисунок 5 – Электрофореограмма результатов ПЦР с использованием специфических пар праймеров для образцов №№1-8 Выводы. В результате обследования яблоневых насаждений основной промышленной зоны садоводства (Туркестанской, Жамбылской, Алматинской областей) в 2021-2022 гг. среди 69 районированных, перспективных и интродуцированных сортов яблони выделены 20 наиболее подверженные поражению бактериальным ожогом, где распространение болезни составило 29 – 57%, со степенью развития – 11,0 – 25,3%, соответственно. В результате бактериологического анализа отобранных образцов, было выделено 17 изолятов бактерий с сортов: Айдаред, Апорт, Голден Делишес, Грени Смит, Максат, Восход, Старкримсон, Фуджи, Пинова, Пинкледи, Рашида, Конфетное, Синап Алматинский, Ред Топаз, Гала, Дельжонс, Вилтон Стар, которые по морфологическим и культуральным признакам были схожи с Erwinia amylovora, возбудителя бактериального ожога. В результате микрокопирования под световым микроскопом подтверждено, что бактериальные колонии, полученные из чистой культуры по морфологии похожи на E. аmylovora. В результате молекулярной идентификации возбудителя бактериального ожога методом ПЦР на основе геномной ДНК установлено, что из 8 образцов бактериальных культур, три культуры (сортов Апорт, Синап Алматинский, Пинова) были идентифицированы как фитопатогенные бактерии Erwinia amylovora. |