J pineal Res Мелатонин как иммунорегулирующий агент
Monitoring intracellular melatonin levels in human prostate normal and cancer cells by HPLC
жүктеу/скачать 1.4 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Melatonin and doxorubicin synergistically induce cell apoptosis in human hepatoma cell lines.
- METHODS
- RESULTS
- CONCLUSION
Monitoring intracellular melatonin levels in human prostate normal and cancer cells by HPLC.Hevia D, Mayo JC, Quiros I, Gomez-Cordoves C, Sainz RM. Melatonin (N-acetyl-5-methoxytryptamine) is a potent endogenous antioxidant and free radical scavenger that has attracted much attention as a consequence of its multiple biological functions. In addition to other physiological properties, it has clear antiproliferative activity in several types of cancer cell. The concentration of melatonin necessary to inhibit cell growth is much higher than its blood physiological concentrations in some tumor types. For years its indolic nature has impeded proper monitoring, by molecular or immunological techniques, of its uptake by cancer cells. In this work we developed a simple, rapid, and validated analytical method for detection and quantification of MEL inside normal and cancer cells. For this purpose we performed high-performance liquid chromatographic analysis after liquid-liquid extraction of the indole from biological samples. The method was validated, and the correlation coefficient for amounts from 0.125 to 1.25 microg was higher than 0.999, with a range of recovery near 100%. Precision was evaluated as repeatability, and for intermediate precision, the relative standard deviation was less than 5%. The method was used to study the stability of the indole in solution and to determine intracellular melatonin concentrations in normal (PNT1A) and several cancer (LNCaP, DU-145, PC-3) prostate cell lines. Intracellular LOQ/LOD were 7.23/2.83, 23.17/9.07, 4.03/1.83, and 6.51/2.53 nmol L(-1), or 1.82/4.66, 0.56/1.45, 3.26/8.34, and 2.02/5.17 attogram in each cell in PNT1A, LNCaP, DU145, and PC-3 cells, respectively. Because there was no information about intracellular levels of melatonin inside normal or tumor prostate cells after treatment with the indole, nor a relationship between its antiproliferative activity and its intracellular concentration, this is the first time that, by using an analytical method combined with measurement of cellular volume by flow cytometry, the intracellular concentration of MEL has been estimated. Also, data obtained here explain why the antiproliferative properties of MEL vary in different cell types. This is, moreover, the first time that by increasing the intracellular concentration of melatonin, its antitumor properties have been promoted in prostate cancer cells. This process can be monitored by the method developed here. Мониторинг внутриклеточные уровни мелатонина в простате человека нормальных и раковых клеток с помощью ВЭЖХ. Hevia D , Майо JC , Кирос я , Гомес - Cordoves C , Сайнс RM . Мелатонин (N- ацетил-5- метокситриптамин ) является мощным эндогенным антиоксидантом и свободных радикалов , которая привлекла большое внимание как следствие ее многочисленных биологических функций. В дополнение к другим физиологических свойств , оно имеет четкую антипролиферативной активностью в нескольких типах раковых клеток . Концентрация мелатонина , необходимой для ингибирования роста клеток значительно выше, чем его крови физиологических концентрациях в некоторых типах опухолей . В течение многих лет его индола природа препятствует надлежащего мониторинга , с помощью молекулярных или иммунологических методов , его поглощением раковых клеток. В этой работе мы разработали простой , быстрый , и утвержденный аналитический метод для обнаружения и количественной оценки MEL внутри нормальных и раковых клеток. С этой целью мы провели высокопроизводительный анализ жидкостной хроматографии после экстракции жидкости жидкостью индола из биологических образцов. Способ была подтверждена , и коэффициент корреляции для количествах от 0,125 до 1,25 мкг была выше, чем 0,999 , с диапазоном восстановления около 100%. Точность была оценена как воспроизводимостью , так и для промежуточного точностью, относительное стандартное отклонение было менее 5% . Этот метод был использован для изучения стабильности индол в растворе и определить внутриклеточные концентрации мелатонина в нормальном ( PNT1A ) и несколько рака ( LNCaP , DU- 145 , ПК -3 ) линии простаты клеток . Внутриклеточного LOQ / LOD были 7.23/2.83 , 23.17/9.07 , 4.03/1.83 , 6.51/2.53 и нмоль L (-1) , или 1.82/4.66 , 0.56/1.45 , 3.26/8.34 , 2.02/5.17 и attogram в каждой ячейке в PNT1A , LNCaP , DU145 , и PC- 3 клетки , соответственно. Потому что не было никакой информации о том внутриклеточных уровней мелатонина внутри нормальных или опухолевых клеток предстательной железы после лечения с индол , ни отношения между его антипролиферативной активности и ее внутриклеточной концентрации , это первый случай, когда , с помощью аналитического метода в сочетании с измерением сотовой объем с помощью проточной цитометрии , внутриклеточной концентрации MEL была оценена . Кроме того, данные, полученные здесь объясняет, почему антипролиферативные свойства MEL варьировать в различных типах клеток . Это , кроме того , в первый раз , что при увеличении внутриклеточной концентрации мелатонина , его противоопухолевые свойства были повышены в клетках рака простаты . Этот процесс можно контролировать с помощью метода, разработанного здесь . World J Gastroenterol. 2010 Mar 28;16(12):1473-81. Melatonin and doxorubicin synergistically induce cell apoptosis in human hepatoma cell lines.Fan LL, Sun GP, Wei W, Wang ZG, Ge L, Fu WZ, Wang H. AIM:To investigate whether melatonin has synergistic effects with doxorubicin in the growth-inhibition and apoptosis-induction of human hepatoma cell lines HepG2 and Bel-7402. METHODS:The synergism of melatonin and doxorubicin inhibited the cell growth and induced cell apoptosis in human hepatoma cell lines HepG2 and Bel-7402. Cell viability was analyzed by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. Cell apoptosis was evaluated using TUNEL method and flow cytometry. Apoptosis-related protein Bax, Bcl-2 and caspase-3 expressions were measured by immunohistochemical staining. RESULTS:Treatment with melatonin (10(-8)-10(-5) mol/L) alone had a dose-related inhibitory effect on cell proliferation but no cytotoxic effect on hepatoma cell lines HepG2 and Bel-7402. Interestingly, when combined with doxorubicin, melatonin significantly increased the effects of cell growth inhibition and cell apoptosis. Furthermore, TUNEL staining and flow cytometry revealed that cooperative apoptosis induction was associated with decreased expression of Bcl-2 as well as increased expression of Bax and Caspase3. CONCLUSION:The synergism of melatonin and doxorubicin inhibits hepatoma cell growth and induces cell apoptosis. Мелатонин и доксорубицин синергически индуцируют апоптоз клеток в линиях гепатомы клеток человека . Вентилятор Л.Л., Солнце ГП , Вэй Вт, Ван З.Г., Ge L , Фу WZ , Ван Х. AIM: Для исследования , имеет ли мелатонин синергетический эффект с доксорубицина в росте - торможения и апоптоза - индукции линии клеток гепатомы человека HepG2 и Бел- 7402 . МЕТОДЫ : Синергизм мелатонина и доксорубицина ингибирует рост клеток и вызывает апоптоз клеток в линии клеток гепатомы человека HepG2 и Бел- 7402 . Жизнеспособность клеток анализировали с помощью 3 - ( 4,5-диметилтиазол- 2-ил) -2,5- дифенил- тетразолия бромид ( МТТ) . Апоптоз клеток оценивали с помощью метода TUNEL и проточной цитометрии . Апоптоз , связанных с белком Bax, Bcl -2 и каспазы- 3 выражения были измерены с помощью иммуногистохимического окрашивания . РЕЗУЛЬТАТЫ: Лечение с помощью мелатонина (10 (-8) -10 (-5) моль / л) в покое имела дозозависимое ингибирующее действие на пролиферацию клеток , но без цитотоксического эффекта на линии клеток гепатомы HepG2 и Bel- 7402 . Интересно, что в сочетании с доксорубицином , мелатонин значительно увеличилось эффекты ингибирования роста клеток и апоптоз клеток. Кроме того, TUNEL окрашивание и проточной цитометрии показал, что кооператив индукции апоптоза было связано со снижением экспрессии Bcl-2 , а также повышенной экспрессией Вах и каспазы3 . ЗАКЛЮЧЕНИЕ : Синергизм мелатонина и доксорубицина ингибирует рост клеток гепатомы и индуцирует апоптоз клеток. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2010 Feb;30(1):1-7. doi: 10.1007/s11596-010-0101-9. Epub 2010 Feb 14. жүктеу/скачать 1.4 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|