Катлинский, Сазыкин. Курс лекций по биотехнологии

 
81
Рис.22 
Инсулин,  полученный  этим  путем  является  человеческим  инсулином  по  своей 
структуре.  Применение  современных  методов  очистки  исключает  наличие  в 
инсулине эндотоксинов и пирогенных примесей. 
 
Контроль концентрации инсулина в крови человека 
 
1.  Определение концентрации глюкозы в крови человека 
2.  Применение метода радиоиммунного анализа (РИА). 
Остановимся  на  применении  радиоиммунного  анализа.  Для  его  проведения 
необходим специальный набор реагентов и счетчиков. 
Принцип радиоиммунного анализа (РИА) 
 Вначале инсулин метят радиоактивным иодом  I 
125.  
Затем  берут  определенное  количество  антител  к  инсулину  в  определенном 
объеме сыворотки и добавляют их к пробе крови (предварительно разведенной), 
в  которой  содержится  немеченый  (нерадиоактивный)  инсулин  из  организма 
человека.  Комплекс  антигена  (АГ)  инсулин+  антитело  (АТ)  выпадает  в  осадок. 
Затем в эту же пробирку добавляют инсулин меченный радиоактивным иодом. В 
этом случае, оставшиеся после реакции с нерадиоактивным инсулином, антитела 
реагируют  уже    с  радиоактивным  инсулином  и  образующийся  комплекс  также 
выпадает  в  осадок.  Полученный  таким  образом  общий  осадок  отделяют  от 

 
82
реакционной  смеси  и  определяют  в  нем  радиоактивность.  Закономерность 
получается такая: чем меньше инсулина в крови человека, тем больше свяжется 
меченого  инсулина  с  антителами  (так  как  останется  больше  не 
прореагировавших 
антител) 
и 
соответственно 
тем 
больше 
будет 
радиоактивность. Этот метод позволяет определить инсулин в концентрации 10 
-
9 
 -10 
-12
  грамм  на  миллилитр  (г/мл).  Этот  метод  позволяет  определить  меченый 
инсулин независимо от любых примесей, которые могли бы исказить результат 
анализа. 
  Что необходимо иметь для проведения такого анализа? 
В специальном наборе должны быть  
-антитела  к  инсулину  (эти  антитела  находятся  в  сыворотке  лабораторных 
животных), 
- проба крови с инсулином от испытуемого, 
-  оборудование  для  отделения  осадка  в  котором  можно  измерить 
радиоактивность, 
- счетчик ГСБ-1. 
 
Если в целом представить
 
себе схему этого анализа, то она выглядит следующим 
образом: 
 

жүктеу/скачать 2.51 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: