Лабораторная работа по курсу «Общая биотехнология» культивирование микроорганизмов на средах с различными источниками питания
Калий играет существенную роль в углеводном обмене и синтезе клеточного вещества; Магний
жүктеу/скачать 256.99 Kb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Кальций
- 39 · 0,2 : 136 = 0,057; Вычисляем эквивалентное количество KСl: 74 · 0,057 : 39 = 0,1%.
| Калий играет существенную роль в углеводном обмене и синтезе клеточного
вещества; Магний входит в состав молекулы хлорофилла зеленых и пурпурных бактерий, а также является активатором ряда ферментов; Кальций необходим для роста некоторых бактерий; Железо входит в состав геминной группировки, которая является кофактором ряда ферментов, участвующих в аэробном дыхании микроорганизмов. Кроме того, микроорганизмам нужны микроэлементы, которые являются составной частью ферментных систем, регулирующих метаболизм микробной клетки. МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА Изучение влияния отдельных питательных элементов на жизнедеятельность микроорганизмов проводят методом высева в жидкие питательные среды. В качестве модели используют микроскопический гриб Aspergillus niger. Эксперимент включает 11 вариантов, из которых один является контрольным. В каждом из остальных вариантов исключается тот 5 или иной элемент или добавляется определенный микроэлемент. Рост гриба Aspergillus niger в различных вариантах покажет, как сказывается на его развитии отсутствие данного элемента. Варианты опыта: 1.Полная среда (контроль) (в%): сахароза 10; NH 4 NO 3 – 0,3; KH 2 PO 4 – 0,2; MgSO 4 – 0,05; FeSO 4 – 0,01. 2.Среда без углерода. Исключается сахароза (для сохранения осмотических свойств среды можно внести 5% NaCl) 3. Среда без азота. Исключается NH 4 NO 3 . 4. Среда без фосфора. Исключается KH 2 PO 4 , заменяется эквивалентным количеством KСl. 5. Среда без калия. Исключается KH 2 PO 4 , заменяется эквивалентным количеством MgCl 2 и FeCl 3 . 6. Среда без серы. В данном варианте MgSO 4 и FeSO 4 заменяются эквивалентным количеством MgCl 2 и FeCl 3 . 7. Среда без магния. MgSO 4 заменяется эквивалентным количеством Na 2 SO 4 . 8. Среда без железа. FeSO 4 заменяется эквивалентным количеством Na 2 SO 4 . 9 –11. Полная питательная среда с добавлением микроэлементов. В 9 варианте дополнительно вносят ZnSO 4 , в 10 - Mn SO 4 , в 11 – Н 3 ВО 3 (в количестве 0,01%). 6 Перед приготовлением питательной среды расчет эквивалентного % солей, которые нужно внести вместо исключенных рассчитывают следующим образом: Пример расчета для варианта № 4 (исключен фосфор): Исключается KH 2 PO 4 , заменяется эквивалентным количеством KСl. Мол.масса KH 2 PO 4 - 136; Мол.масса KСl – 74. KH 2 PO 4 нужно внести 0,2%.; Количество калия в среде 39 · 0,2 : 136 = 0,057; Вычисляем эквивалентное количество KСl: 74 · 0,057 : 39 = 0,1%. Для приготовления питательной среды используют 20% раствор сахарозы, 10% растворы солей и 1% растворы микроэлементов. Микроскопические грибы Aspergillus niger – аэробные микроорганизмы, поэтому при его культивировании используют тонкий слой среды. В стерильные колбы объемом 100 мл внести 30 мл питательной среды каждого варианта. Колбы подписать, указывая на них вид микроорганизма, вариант опыта, число и номер группы. В каждую колбу внести бактериальной петлей кусочек пленки мицелия Aspergillus niger. Посевы поставить в термостат и инкубировать при температуре 25-30ºС в течение 10-14 суток. При приготовлении питательной среды для каждого варианта рассчитать количество веществ, которое необходимо внести в 30 мл питательной среды в граммах, а затем в мл, с точностью до второго знака. Пример расчета: В среду необходимо внести 10% раствор сахарозы, следовательно на 100 мл – 10 г, а на 30 мл – 3 г. Сахароза дана в виде 20% раствора. Надо определить, в каком количестве мл этого раствора содержится 3 г сахарозы: жүктеу/скачать 256.99 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|