Lh system Лютеинизирующий гормон (ЛГ)



Дата25.06.2016
өлшемі271.47 Kb.
#157388
ADALTIS

Eclectica LH System

Лютеинизирующий гормон (ЛГ)

Кат.№ 1702000 Количество тестов: 100


Производитель:

Adaltis S.r.l.

Via Durini, 27

20122 Milano (Italy)

Tel. +39-0774-5791

Fax +39-0774-353085



www.adaltis.net
Производитель

Медицинское оборудование для

диагностики in vitro.

(применение для диагностики in

vitro)

Номер лота

Каталожный номер

Срок годности (использовать до)

Ограничение по

температуре (хранить при 2-

8ºС/2-25ºС)

Не замораживать

Количество тестов

Обратитесь к инструкции по

применению



Биологическая опасность

Опасный

Избегать воздействия прямых

солнечных лучей



Eclectica LH реагент

Eclectica LH Контроль 1

Eclectica LH Контроль 2

Промывающий раствор для

иммунохимии Eclectica



Системный промывающий

раствор Eclectica



Eclectica Субстрат

Eclectica Разделительный реагент

Eclectica Стоп-раствор

Eclectica Калибратор А

Eclectica Калибратор В

Eclectica Калибратор С

Eclectica Калибратор D

Eclectica Калибратор Е

Eclectica Калибратор F

1. Назначение

Тест-система Eclectica LH Reagent Kit разработана для количественного определения лютеинизирующего гормона (ЛГ, лютропин) в человеческой сыворотке, гепаринизированной плазме и моче на анализаторе Eclectica.


Данный метод может применяться без разбавления образцов, содержащих от 0,5 до 200 мМЕ/мл ЛГ. Первичная калибровка по Первому международному эталону WHO 1st IRP 68/40 для иммуноанализа гипофизарного ЛГ (1).

2. Справка


Лютеинизирующий гормон (ЛГ) является гликопротеиновым гормоном с молекулярным весом ~30,000 дальтон. Гормон представляет собой две неравных, нековалентно связанных, субъединицы (2). Альфа-субъединица ЛГ человека, содержащая 89 аминокислот, по своей структуре идентична альфа-цепям человеческого фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и тиреотропного гормона (ТТГ) и очень близка субъединице хорионического гонадотропина (ХГЧ), которая имеет три дополнительных аминокислотных остатка (3, 4). Аминокислотная последовательность бета-субъединицы ЛГ значительно отличается от бета-субъединиц ФСГ и ТТГ, но очень похожа на бета-субъединицу ХГЧ, которая содержит дополнительные 30 аминокислотных остатка на С-конце цепи (5). Ни одна из субъединиц не обладает самостоятельной активностью. Бета-субъединица контролирует связывание целой молекулы гормона со специфическими рецепторами целевых клеток, а альфа-субъединица затем активирует клеточный мессенджер, вероятно, аденилциклазу (6). Такая близкая структурная гомология между ЛГ и ХГЧ объясняет высокую степень перекрестной реактивности, обычно наблюдаемую при тестировании с использованием поликлональных антител.

ЛГ секретируется базофильными клетками передней доли гипофиза в ответ на рилизинг-фактор ЛГ (люлиберин, РГЛГ или Гн-РГ), который продуцируется гипоталамусом (6, 7). Обследование здоровых женщин показывает, что секреция ЛГ гипофизом представляет собой двухфазный процесс: постоянный основной уровень образования с периодическими импульсами приблизительно каждые два часа (8, 9, 10). Вместе с ФСГ, ЛГ отвечает за циклические изменения в яичниках в течение менструального цикла. Резкое повышение уровня ЛГ в середине цикла вызывает разрыв фолликула и освобождение зрелой яйцеклетки. Остатки ткани фолликула становятся функционирующим желтым телом, которое выделяет прогестерон и эстрадиол. Эти стероидные гормоны оказывают как отрицательное, так и положительное влияние по механизму обратной связи на гипофиз и гипоталамус, контролируя дальнейшую секрецию ЛГ (7).

С наступлением менопаузы, функция яичников и секреция эстрадиола ослабевают и полностью исчезают. Это ведет к заметному подъёму циркулирующих уровней ЛГ как результат прекращения действия по механизму отрицательной обратной связи эстрадиола на гипоталамус.

У мужчин, ЛГ способствует образованию тестостерона клетками Лейдига яичек. ЛГ также требуется вместе с ФСГ для поддержки сперматогенеза в семенных канальцах яичек. Тестикулярные стероидные гормоны контролируют циркулирующий уровень ЛГ по механизму отрицательной обратной связи на гипоталамус и на чувствительность гипофиза к Гн-РГ.

Дисфункция гипофиза, ведущая к гипопитуитаризму, даёт в результате низкие уровни циркулирующего Лг и приводит к бесплодию. Определение сывороточного ЛГ, после приёма Гн-РГ, полезно в оценке функционального состояния гипофиза (11, 12). Другим тестом динамической функции, требующим измерения ЛГ, является назначение эстрадиола аменорейным женщинам с целью предсказания отклика на терапию кломифеном (13).

Измерение ЛГ в моче является простым, неинвазивным методом, который даёт информацию о функции гипофиза (14).


3. Принцип метода


Для тестирования ЛГ на анализаторе Eclectica необходимы:

  1. Тест-система для определения лютеинизирующего гормона Eclectica: специфические реагенты тест-системы Eclectica LH Reagent Kit для выполнения тестирования и проверки калибровки.

  2. Тест-система для калибровки лютеинизирующего гормона: для стандартизации.

  3. Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica: для реакции общей химии.

  4. Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica: специфический промывающий раствор для иммунохимии.

  5. Системный промывающий раствор Eclectica для анализатора Eclectica.

В методике анализа Eclectica ЛГ используются два типа высокоспецифичных моноклональных антител в системе иммуноферментного анализа, который включает стадию магнитного твердофазного разделения. Все времена инкубации и объёмы реагентов определяются специфическим протоколом программного обеспечения.

Определенные количества флуоресцеин-конъюгированных моноклональных антител к ЛГ и моноклональных антител к ЛГ, конъюгированных со щелочной фосфатазой, добавляются к образцу, контролю, или стандарту. Реакционная смесь инкубируется при 37ºС. В процессе инкубации флуоресцеин-конъюгированные моноклональные антитела к ЛГ связываются с определенным сайтом молекулы ЛГ. Моноклональные антитела к ЛГ, конъюгированные со щелочной фосфатазой, связываются со вторым участком на молекуле ЛГ, образуя сэндвич.

В конце инкубационного периода анти-флуоресцеин, связанный с магнитными частицами, добавляется в избытке. Он быстро и специфично связывается с комплексом моноклональных антител с ЛГ и осаждается в магнитном поле. После удаления жидкой фазы и промывки твердой фазы, раствор ферментного субстрата, фенолфталеин-монофосфат, добавляется в инкубационную ячейку, и каждая ячейка инкубируется при 37ºС. После инкубации, ферментная реакция останавливается добавлением стоп-раствора, а интенсивность окраски измеряется фотометрически. Интенсивность окраски прямо пропорциональна, в рамках рабочего диапазона теста, концентрации ЛГ в образце. Концентрация ЛГ в образце пациента или контроле затем определяется методом интерполяции по сохраненной стандартной кривой.

4. Реагенты – подготовка и хранение


4.1 Тест-система Eclectica LH Reagent Kit Код 1702000

Не использовать компоненты тест-системы после окончания срока годности.

Тест-система Eclectica LH Reagent Kit содержит специфические реагенты для выполнения 100 тестов, и контроли для 5 проверок калибровки из каждого флакона. Реагенты хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Информация о номере лота, сроке годности и количестве тестов содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы Eclectica LH Reagent Kit. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.


  • 2 флакона Eclectica LH Реагент Код1702016

2 флакона, содержащие меченные флуоресцеином и бычьей щелочной фосфатазой мышиные моноклональные антитела к ЛГ в Трис буфере (> 1%) c овечьими, лошадиными, и бычьими белками с азидом натрия (< 0,1% w/w).

Реагент готов к применению и один флакон рассчитан на 50 тестов.

Хранить реагент при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Защищать от воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый реагент стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 2 недель при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7. Паспорт материала предоставляется по запросу.



  • 2 флакона Eclectica LH Контроль 1 Код 1702018

2 флакона, содержащие 1 мМЕ/мл человеческого гипофизарного ЛГ (1st IRP 68/40) в бычьей сыворотке с консервантом и азидом натрия (< 0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля.

Хранить контроль при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.


  • 2 флакона Eclectica LH Контроль 2 Код 1702019

2 флакона, содержащие 50 мМЕ/мл человеческого ЛГ (1st IRP 68/40) в бычьей сыворотке с консервантами и азидом натрия (< 0,1% w/w). Флакон содержит 1 мл готового к применению контроля.

Хранить контроль при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если контроль не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый контроль стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.

5. Необходимые реагенты, поставляемые отдельно


5.1 Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit Код 1702017

Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit содержит шесть флаконов, достаточных для построения 5 калибровочных кривых. Калибраторы ЛГ помечены от А до F и содержат приблизительно 0- 1- 3- 10- 50- 200 мМЕ/мл человеческого гипофизарного ЛГ в бычьей сыворотке с азидом натрия (< 0,1% w/w). Каждый флакон содержит 1 мл готового к применению калибратора. Точная концентрация каждого калибратора содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы для калибровки Лютеинизирующего гормона. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.

Необходимо, чтобы флаконы достигли комнатной температуры (18-25ºС) и перед применением содержимое флаконов следует осторожно перемешать.

Хранить калибраторы при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

В конце тестирования убрать флакон и хранить его закрытым при 2-8ºС, если калибратор не используется в последующие 24 часа или в тот же день.

Вскрытый калибратор стабилен в течение:

- 2 месяцев при хранении в закрытом флаконе при 2-8ºС,

- 1 недели при хранении в закрытом флаконе в анализаторе Eclectica с включенным охлаждением.

После использования закройте каждый флакон своей специфической крышкой.

Смотрите раздел 7.



5.2 Тест-система общих реагентов для иммунохимии Eclectica Код 1700010

На анализаторе Eclectica используются 3 общих реагента для всех иммуноанализов.

Каждый флакон содержит достаточный объём для выполнения 200 тестов при использования анализатора в стандартных условиях (2 еженедельных запуска и 10 ежедневных запусков).

Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке.

Необходимо, чтобы компоненты тест-системы общих реагентов для иммунохимии достигли комнатной температуры (18-25ºС) перед установкой на борт анализатора. Вскрытые общие реагенты стабильны в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Информация о номере лота, сроке годности и количество тестов для каждого общего реагента содержится на параметрической карте, которая входит в состав тест-системы общих реагентов для иммунохимии. Используйте считыватель параметрических карт для загрузки информации, содержащейся на карте в систему. Для получения дополнительной информации смотрите Руководство пользователя для анализатора Eclectica.



Реагент содержит овечью анти-флуоресцеиновую сыворотку, связанную с магнитными частицами (0,6% w/v), и белок бычьей сыворотки в буфере с консервантами, включая азид натрия (<0,1% w/w). Реагент готов к применению. Перед тестированием перемешать тщательно, но аккуратно, чтобы получилась равномерная суспензия магнитных частиц. Не использовать магнитную мешалку. Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Не замораживать. Смотрите раздел 7.

  • 1 флакон Eclectica Субстрат Код 1700002

Содержит фенолфталеин-монофосфат в качестве ферментного кофактора и консервант в буферном растворе. Содержит 2,2’-иминодиэтанол (> 10%). Реагент готов к применению. Хранить при температуре 2-8ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Избегать воздействия прямых солнечных лучей.

Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Внимание: реагент относится к классу опасности Xn: R 41 48/22, S 3 26 36/37/39 60.



Коды риска:

R 41 риск серьезного поврежде-

ния глаз.



R 48/22 опасный: опасно для

здоровья при длительном контакте и проглатывании.



Коды безопасности:

S 3 хранить в холодном месте.

S 26 в случае попадания в глаза,

сразу промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.



S 36/37/39 надевать спецодежду,

перчатки и защитные очки.



S 60 данный материал и его контейнер

следует утилизировать как опасные отходы.



  • 1 флакон Eclectica Стоп-раствор Код 1700003

Содержит хелатирующий агент и гидрооксид натрия (< 1% w/w) в буфере, рН >10. Реагент готов к применению. Хранить при температуре 2-25ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый Реагент стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Внимание: реагент относится к классу опасности Xi: R 36/38, S 23 26 37 60.

Смотрите раздел 7.0. Информацию о безопасном обращении с реагентом смотрите в паспорте безопасности.

Коды риска:

R 36/38 раздражает глаза и кожу.

Коды безопасности:

S 23 не вдыхать аэрозоль.

S 26 в случае попадания в глаза, сразу

промыть проточной водой и обратиться за медицинской помощью.



S 37 надевать защитные перчатки.

S 60 данный материал и его флакон

следует утилизировать как опасные отходы.



5.3 Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica Код 1700001Р4

Один флакон содержит 900 мл Трис буфера (> 1%) и консервант.

Раствор готов к применению. Хранить при температуре 2-25ºС до конца срока годности, указанного на этикетке. Вскрытый раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-8ºС или на борту анализатора Eclectica).

Смотрите раздел 7. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.



5.4 Системный промывающий раствор Eclectica Код 1750102Р4

Один флакон содержит 1600 мл готового к применению карбонатного буфера и антибактериальный консервант. Хранить при температуре 2-25ºС до срока годности, указанного на этикетке.

После вскрытия раствор стабилен в течение двух недель (при хранении при 2-25ºС или на борту анализатора Eclectica). Смотрите раздел 7.0. Паспорт безопасности предоставляется по запросу.

6. Необходимые материалы и оборудование

6.1 Предоставленные Реагенты для тестирования

Тест-система для определения Eclectica LH Reagent Kit.

Тест-система для калибровки Eclectica LH Calibration Kit.

Тест-система для иммунохимии Eclectica.

Промывающий раствор для иммунохимии Eclectica.

Системный промывающий раствор Eclectica.

Комплект растворов для промывки анализатора Eclectica (код 1700006 – информацию о составе и применении читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

6.2 Необходимое Оборудование/ принадлежности, поставляемые отдельно

Анализатор иммунохимический Eclectica.

Одноразовые блоки кювет.

Пробирки кат. № 18056 (дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).



7. Меры предосторожности и ограничения

Для in vitro диагностики.

Только квалифицированный лабораторный персонал должен использовать данный тест и проведение процедуры тестирования должно быть в соответствии со стандартом GLP (правила лабораторной практики).

Запрещается смешивать реагенты из разных лотов.

Все реагенты следует использовать на анализаторах, которые находятся в хорошем рабочем состоянии и тщательно очищены с помощью Eclectica комплекта растворов для промывки (код 1700006).

Дополнительную информацию об обслуживании и инструкциях по применению читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.



7.1 Меры безопасности

1. Не пипетировать реагенты ртом.



2. Не курить, не есть, и не использовать косметику в помещениях, где обрабатываются образцы пациентов или реагенты тест-систем.

3. Кожу порезов и других повреждений следует тщательно защищать соответствующей водостойкой повязкой.

4. Следует избегать самозаражения, попадания брызг на слизистые оболочки, или образования аэрозолей.

5. Следует надевать лабораторные перчатки при обработке образцов пациентов или удалении твердых или жидких отходов.

7.2 Предупреждение о потенциальной биологической опасности

Некоторые реагенты системы Eclectica содержат материал животного происхождения, даже если указано, что он получен от здоровых животных, рекомендуется обращаться с реагентами, следуя тем же мерам предосторожности, что и в работе с потенциально инфекционными образцами.

Некоторые реагенты, используемые в системе Eclectica, могут быть получены из пула сывороток крови человека. Каждая порция крови, использованная для создания пула сывороток, была проверена утвержденными методами FDA (Управление по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств) на отсутствие сифилиса, поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAG), вируса гепатита C (HCV) и антител против ВИЧ (HIV 1 + 2). Поскольку, никакой тест не может давать полной гарантии отсутствия вируса гепатита B, ВИЧ и другие инфекционных агентов, то указанные реагенты следует рассматривать как потенциально опасные и обращаться с ними, следуя тем же мерам предосторожности, что и при работе с образцами сыворотки или плазмы. Некоторые реагенты, такие как калибраторы и контроли, могут содержать материал тканей человеческого происхождения. В настоящее время, отсутствует стандартный тест на наличие ВИЧ в таком материале. Поэтому рекомендуется и такие реагенты рассматривать как потенциально опасные.

С такими материалами следует обращаться в соответствии с правилами лабораторной практики, как описано в документе CDC (Центр по контролю заболеваемости, Атланта, США): Универсальные меры предосторожности для предотвращения передачи вируса иммунодефицита человека, вируса гепатита B и других передающихся через кровь патогенов в учреждениях здравоохранения «MMWR» 37:377-387, 1999.



7.3 Опасные химические вещества - Предупреждение

Некоторые реагенты относятся к опасным химическим веществам, согласно классификатору. Для безопасной работы рекомендуется внимательно прочитать информацию в Паспорте безопасности.



7.4 Ограничения

Не использовать ЭДТА и цитрат натрия в качестве антикоагулянта, поскольку они ингибируют ферментативную реакцию. Помутнение, агрегация и выпадение осадка в любом из Eclectica реагентов указывает на возможное ухудшение их качества. Обратитесь за консультацией к вашему региональному дистрибьютору. Как и во всех анализах, на результаты данного теста могут повлиять факторы, присутствующие в образцах некоторых пациентов.

Как в любом иммуноанализе, на результаты могут повлиять факторы, присутствующие в сыворотке пациента. Хотя информация о реагентах была тщательно изучена для того, чтобы уменьшить влияние гетерофильных антител и неспецифических белковых связываний, возможная недостоверность одного образца не может быть исключена, как для всех «Сэндвич» систем.

Для диагностических целей, результат, полученный при данном тестировании всегда должен использоваться совместно с клинической картиной, анамнезом пациента и другими лабораторными исследованиями. Реагенты различных лотов нельзя смешивать вместе.

Применение реагентов, расходных материалов, и запасных частей, отличающихся от поставляемых уполномоченным дистрибьютором, может привести к неправильным результатам.

Следуйте инструкциям по применению, поскольку любая модификация может повлиять на результат.

Использование реагентов, расходных материалов или запасных частей, поставляемых не официальным дистрибьютором, может привести к получению неправильного результата.

Пациенты, получающие терапию моноклональными антителами (мышиными) для диагностических или терапевтических целей могут иметь антимышиные антитела (НАМА). Присутствие НАМА в образце может дать как ложно положительные (высокие), так и ложно отрицательные (низкие) значения при использовании системы с моноклональными антителами. Образцы, содержащие НАМА, не должны анализироваться на системе Eclectica.



8. Отбор образца и хранение

Следующие рекомендации для обработки и хранения образцов крови выпущены Национальным комитетом по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS – Doc. H18-A):

- Забор образцов крови проводить с соблюдением стандартных мер предосторожностей при отборе биологических жидкостей.

- В случае образцов сыворотки, обеспечить полную коагуляцию образцов перед центрифугированием:



Примечание: Центрифугирование образцов сыворотки до окончания коагуляции может привести к появлению фибрина. Чтобы избежать неверных результатов из-за присутствия фибрина, следует убедиться в том, что процесс коагуляции полностью завершен перед центрифугированием образцов. Некоторые образцы, в частности образцы пациентов, получающих терапию антикоагулянтами, могут потребовать более длительного времени для коагуляции.

- Пробирки следует хранить закрытыми в вертикальном положении.

- Не использовать образцы, которые находились при комнатной температуре более 8 часов

- Герметически запечатать и охладить образцы (2-8ºС), если раскапывание не выполнено в течение 8 часов.

- Заморозить образцы при температуре -20ºС или ниже, если тестирование не выполнено в течение 48 часов.

- Замораживать образцы только один раз, после размораживания, их следует тщательно перемешать.

Для осветления липемических образцов рекомендуется применение ультрацентрифуги. Гемолизированные образцы могут указывать на несоответствующую обработку образца перед доставкой его в лабораторию; по этой причине, результаты следует интерпретировать с осторожностью.

Требуемый объём: составляет 0,05 мл образца для каждого определения. Этот объём не включает в себя мертвый объём (неиспользуемый объём в пробирке с образцом) или дополнительный объём, требуемый для повторов или для выполнения других тестов для того же самого образца. Дополнительную информацию по определению минимального требуемого объёма читайте в разделе «Требования к объёму образца» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

Перед помещением образца на борт анализатора следует проверить образцы на отсутствие в них фибрина, частиц, и пузырьков воздуха.



8.1 Сыворотка

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку без добавок. Позволить крови свернуться при комнатной температуре (18-25ºС). Отцентрифугировать, и отделить сывороточную фракцию.



8.2 Плазма

Внести 5 мл венозной крови в стеклянную или пластиковую пробирку, содержащую гепарин в качестве антикоагулянта. Отцентрифугировать, и отделить плазменную фракцию.



Не использовать ЭДТА- или цитратную плазму.

8.3 Моча

Собрать однократную порцию мочи в подходящий контейнер без консерванта.

Предпочтительна первая утренняя порция мочи.

Для осветления мутных образцов рекомендуется центрифугирование или фильтрование (Ватман #1). Отобрать 5 мл образца и сохранить.

Образцы мочи стабильны при хранении при 2-8ºС в течение 3 дней. Более длительное хранение образцов мочи не рекомендуется, даже при –20ºС.

9. Процедура анализа

Руководство пользователя для анализатора Eclectica подробно описывает процедуру подготовки, установки, стандартизации, тестирования и контроля качества. Следует выполнять все стандартные процедуры обслуживания, как описано в Руководстве пользователя для получения оптимальных результатов анализа.



  • Тест-система для определения аналита, которая включает также контроли 1 и 2, идентифицируется по номеру лота, специфичного для данного реагента.

  • Каждый лот тест-систем можно загрузить только с помощью соответствующей параметрической карточки, входящей в состав реагентов.

  • Нельзя смешивать реагенты разных лотов.

  • Калибровка метода специфична для конкретного лота реагентов.

  • Для каждого нового лота реагентов определяется основная калибровочная кривая (референсная кривая), которую получают при выполнении серии тестов на различных анализаторах.

  • Данные контролей (в единицах OD и концентрации), рассчитанные по референсной кривой, хранятся на параметрической карточке, поставляемой в упаковке тест-системы, и эти данные представляют «целевые» значения.

  • Данные закодированного лота загружаются в анализатор Eclectica при считывании информации с параметрической карточки.

  • Данные контролей 1 и 2, в единицах сигнала, полученные экспериментально, сравниваются с соответствующим «ожидаемым сигналом».

  • Достоверность калибровочной таблицы оценивается в отношении группы параметров качества и, в случае, когда результаты принимаются, таблица будет загружена в память, связанную с лотом реагентов.

9.1 Рекомендуемый интервал уточнения кривой: 4 недели.

Примечание: Проверка калибровки (посредством Контроля 1 и Контроля 2) необходима по истечении 4 недель, при загрузке нового лота специфических реагентов или тест-системы общего назначения, при замене некоторых компонентов системы, или когда измеренная концентрация контрольной сыворотки не соответствует спецификации.

9.2 Время первого результата: 51 минута.

10. Контроль качества

Каждой лаборатории рекомендуется регулярно использовать материалы контроля качества и установить свои собственные контрольные диапазоны.

Необходимо проводить измерение многоуровневых контролей при каждом тестировании ЛГ. Значения ЛГ, полученные для контрольных материалов, не должны часто выходить за границы контрольных диапазонов, установленных в каждой лаборатории. Если эти контрольные значения регулярно попадают за границы установленных контрольных диапазонов, то следует проверить правильность работы прибора (смотрите раздел «Устранение неисправностей» в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica).

11. Расчеты и результаты

Значения образца рассчитываются программой пользователя Eclectica, используя референсную калибровочную кривую и измерение контролей, во время тестирования. Программа анализатора Eclectica подтверждает, что хранящаяся эталонная кривая соответствует специфическим критериям анализа.

В дополнение к имеющейся действительной референсной кривой, измеряемые контроли должны быть в пределах, установленных программой для результатов образцов, чтобы быть распечатанными анализатором Eclectica.

12. Ожидаемые значения

Заявленные ожидаемые результаты по ЛГ были ранее определены с использованием SR1 LH. Результаты были подтверждены применением тест-системы Eclectica LH при анализе 56 образцов.



12.1 Значения сыворотки

Основываясь на проведённых исследованиях образцов сыворотки от здоровых взрослых людей, были получены следующие диапазоны значений ЛГ, и они показаны в следующей таблице:






Значение ЛГ (мМЕ/мл)

Категория

n

Медиана

Диапазон*

Мужчины

199

3,1

0,8 – 8,3

Женщины










- фолликулярная фаза

165

4,5

1,4 – 15,3

- Пик середины цикла

17

37

19,9 – 60,6

- Лютеиновая фаза

153

3,9

0,8 – 13,4

Женщины в постменопаузе

100

31,6

11,8 – 60,5

* 2,5 и 97,5 процентили

Нормальные значения ЛГ получены по 17 индивидуальным менструальным циклам здоровых женщин.

Эти значения являются только ориентировочными и могут отличаться от других опубликованных значений, как результат различий в методах и в обследованном населении. Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные контрольные диапазоны.

Значения сывороточного ЛГ в течение менструального цикла показаны на рис. 1.


Рис. 1


12.2 Значения мочи

Основываясь на исследованиях, проведенных на образцах мочи от здоровых взрослых людей, были получены следующие диапазоны значений ЛГ, и они показаны в следующей таблице.






Значение ЛГ (мМЕ/мл)

Категория

n

Медиана

Диапазон*

Мужчины

69

1,8

<0,5 – 10,2

Женщины










- фолликулярная фаза

83

2,5

<0,5 – 11,5

- Пик середины цикла

15

37,4

11,5 – 61,6

- Лютеиновая фаза

80

3,4

<0,5 – 16,1

Женщины в постменопаузе

53

15,8

17,1=

(*) 2,5 и 97,5 процентили; (=) максимальное значение

Нормальные значения мочевого ЛГ получены по 15 индивидуальным менструальным циклам здоровых женщин.

Эти значения являются только ориентировочными и могут отличаться от других опубликованных значений, как результат различий в методах и в обследованном населении. Каждой лаборатории рекомендуется установить свои собственные контрольные диапазоны.

Приведенные выше нормальные значения выражены в мМЕ/мл. Чтобы выразить значения как суточное выделение, следует умножить результат в мМЕ/мл на объём собранной суточной мочи в мл.

Значения мочевого ЛГ во время менструального цикла показаны на рис. 2.

Р
ис. 2



12.3 Факторы, связанные с повышенными значениями

Физиологические:

Постепенное повышение уровня ЛГ происходит с возрастом у мужчин и женщин. Более быстрый подъём до непрерывно высоких уровней отмечен у женщин в менопаузе.

Приём Гн-РГ, кломифена или HMG.

Патологические:

Недостаток функции яичников, как в случае преждевременной менопаузы, аменорея как результат недостаточности яичников, удаление одного или обоих яичников (с удалением или без удаления матки), агенезия яичников, например, синдром Тернера, редко, опухоль гипофиза или гипоталамуса.

Недостаток тестикулярной функции как при задержке полового созревания в результате первичной тестикулярной недостаточности, агенезия яичка, анорхия, недостаточность клеток Сертоли (аплазия зародышевой ткани яичка), дисгенезия семенных канальцев (например, синдром Клайнфелтера), орхиэктомия.

12.4 Факторы, связанные с пониженными значениями

Физиологические:

Период детства.

Прием препаратов тестостерона или эстрадиола (например, оральные контрацептивы).

Терапия, вызывающая нарушение регуляции гипоталамо-гипофизарной оси.



Патологические:

Гипофизарная недостаточность, как в случае синдрома Шихана, гипопитуитаризм; подавление функции гипофиза, иногда в результате секреции эстрогена или андрогена опухолями яичников или яичек.

Ановуляторные менструальные циклы.

Вторичная аменорея.



13. Технические характеристики

13.1 Диапазон калибровки

0,5 - 200 мМЕ/мл (ВОЗ 1st IRP 68/40).

Результаты теста Eclectica LH выражаются в единицах мМЕ/мл.

Коэффициент пересчета: мМЕ/мл = МЕ/л.

Эту альтернативную единицу измерения можно заранее запрограммировать в Eclectica анализаторе. Дополнительную информацию читайте в Руководстве пользователя для анализатора Eclectica.

13.2 Эффект прозоны

При концентрациях ЛГ до 1000 мМЕ/мл эффект прозоны не наблюдался.

13.3 Разбавление

Пять Образцов сыворотки, содержащие концентрации ЛГ в аналитическом диапазоне, были разбавлены в отношении 1:2, 1:4, 1:8 и 1:16 бычьей сывороткой, не содержащей ЛГ, затем проанализированы для определения линейности при разбавлении. Данное исследование выполнено на двух анализаторах с использованием двух лотов реагентов. Полученные результаты показаны в следующей таблице.



Фактор разбавления

n

% неразбавленного значения

SD

1:2

5

104,7

3,69

1:4

5

95,7

5,29

1:8

5

100,1

7,76

1:16

5

103,1

9,62

Общая




100,91

6,59

13.4 Воспроизводимость

Воспроизводимость теста Eclectica LH определена повторяющимся анализом образцов в четырех повторах в течение 20 дней, один анализ в день, всего 20 анализов и 80 повторов, используя два анализатора.

Полученные результаты показаны в следующей таблице.

Значения выражены в мМЕ/мл.



Образец

Среднее

SD

CV, %

Внутрисерийная

1

1,72

0,11

6,1

2

15,17

0,84

5,5

3

52,27

2,5

5

Межсерийная

1

1,72

0,16

9,4

2

15,17

0,83

5,5

3

52,27

1,75

3,4

Общая

1

1,72

0,19

11,2

2

15,17

1,18

7,8

3

52,27

3,13

6

13.5 Чувствительность

Предел чувствительности теста равен 0,5 мМЕ/мл, и определяется как концентрация ЛГ, эквивалентная средней оптической плотности нулевой пробы плюс два стандартных отклонения, основанных на 20 повторах образца с нулевым аналитом.



13.6 Специфичность

Перекрестная реактивность теста ЛГ была оценена измерением различимого ответа теста на разнообразные обладающие потенциальной перекрестной реактивностью аналиты. Полученные результаты показаны в следующей таблице.



Перекрестный реактант

Концентрация перекрестного реактанта

Измеренная концентрация ЛГ мМЕ/мл

% Перекрестной реактивности

hФСГ 2nd IRP 78/549

50 мМЕ/мл

<0,5

ND

125 мМЕ/мл

<0,5

ND

250 мМЕ/мл

<0,5

ND

500 мМЕ/мл

<0,5

ND

1000 мМЕ/мл

<0,5

ND

hТТГ 2nd IRP 80/558

50 мкМЕ/мл

<0,5

ND

125 мкМЕ/мл

<0,5

ND

500 мкМЕ/мл

<0,5

ND

800 мкМЕ/мл

<0,5

ND

ХГЧ 1st IRP 75/537

10 МЕ/мл

<0,5

ND




35 МЕ/мл

<0,5

ND




75 МЕ//мл

<0,5

ND




300 МЕ/мл

<0,5

ND




500 МЕ/мл

<0,5

ND

ND = Не Обнаружено

13.7 Сравнение метода

Метод Eclectica LH сравнивали с эталонным методом, используя SR1 LH.

Образцы сывороточного ЛГ анализировали двумя методами.

С помощью анализа линейной регрессии получены следующие результаты:

у = 0,83 х + 1,288

r2 = 0,944

x = эталонный метод SR1 LH

у = Eclectica LH

n = 56

14. Литература

1. Storring, P.L., Bangham, D.R., Cotes, P.M, Gaines, R.E. and Jeffcoate, S.L.: The International Reference Preparation of Human Pituitary Luteinizing Hormone for Immunoassay. Acta Endocrinologica (1978) 88: 250-259.

2. Pierce, J.G. and Parsons, T.F.: Glycoproteins Hormones: Structure and Function. Ann. Rev. Biochem. (1981) 50: 465-495.

3. Shome, B. and Parlow, A.F.: Human Follicle Stimulating Hormone (FSH): First Proposal for the Amino Acid Sequence of the Alpha Subunit and First Demonstration of its Identity with the Alpha Subunit of Human Luteinizing Hormone. J. Clin. Endocr. Metab. (1974) 39: 199-202.

4. Sairam, M.R. and Choh Hao Li: Human Pituitary Thyrotrophin: Isolation and Chemical Characterisation of its Subunits. Biochem. Biophys. Res. Comm. (1973) 51 (2): 336-342.

5. Daughaday, W.H.: The Adenohypophysis, in “Textbook of Endocrinology”, ed. R.H. Williams, W.B. Saunders Co. (1981) 80-86.

6. Harris, G.W. and Naftolin, F.: The Hypothalamus and Control of Ovulation. Brit. Med. Bull. (1970) 26: 3-9.

7. Knobil, E.: The Neuroendocrine Control of the Menstrual Cycle. Rec. Prog. Horm. Res. (1980) 36: 53-88.

8. Santen, C.J. and Bardin, R.W.: Episodic Luteinizing Hormone Secretion in Man: Pulse Analysis, Clinical Interpretation, Physiological Mechanisms. J. Clin. Invest. (1973) 52: 2617-2628.

9. Backstrom, C.T., McNeilly, A.S., Leask, R.M. and Baird, D.T.: Pulsatile Secretion of LH, FSH, Prolactin, Estradiol and Progesterone During the Human Menstrual Cycle. J. Clin. Endocrinology (1982) 17: 29-42.

10. Reame, N., Sauder, S.E., Kelch, R.P. and Marshall, J.C.: Pulsatile Gonadotrophin Secretion During the Human Menstrual Cycle: Evidence for Altered Frequency of Gonadotrophin-Releasing Hormone Secretion. J. Clin. Endocr. Metab. (1984) 59: 328-337.

11. Besser, G.M., McNeilly, A.S., Anderson, D.C., Marshall, J.C., Harsoulis, P., Hall, R., Ormston, B.J., L Alexander, L. and Collins, W.P.: Hormonal Responses to Synthetic Luteinizing Hormone and Follicle Stimulating Hormone-Releasing Hormone in Man. Brit. Med. J. (1972) 3: 267-271.

12. Judd, S.J.: The Neuroendocrinology of Reproduction in “Clinical Reproductive Endocrinology”, ed. R.P. Shearman, Churchill Livingstone (1985) 7-37.

13. Shaw, R.W., Butt, W.R., London, D.R., and Marshall, J.C.: The Oestrogen Provocation Test: A Method of Assessing the Hypothalamic-Pituitary Axis in Patients with Amenorrhoea. J. Clin. Endocrinology. (1975) 4: 267-276.

14. Hansen, J.W. and Ross, G.T.: A new method simplifying collection of serial specimens for gonadotropin determinations. J. Clin. Endocr. Metab. (1975) 41: 241 - 244.

15. Kinders, R.J., Hass, G.M., Interference in immunoassay by human anti-mouse antibodies. Eur. J. Cancer. 26 (5):647, 1990.



16. Boscato, L.M., Stuart, M.C., Incidence and specificity of interference in two-site immunoassays. Clin. Chem. 32 (8):1491, 1986.



Достарыңызбен бөлісу:




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет