Методические указания Улан-Удэ Издательство фгоу впо бгсха 2007 удк
жүктеу/скачать 0.72 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Рис. 1.
- Рис. 3
- Показатель O. Tricuspis O. Skrjabini O. Suis
- Методики диагностики оллуланоза свиней
ОЛЛУЛАНОЗ СВИНЕЙ ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ Оллуланоз свиней - заболевание, вызываемое моноксенными нематодами Ollulanus tricuspis, сем. Ollulanidae. Гельминты паразитируют в просвете и в толще слизистой оболочки желудка, в выводных протоках желез желудка, а также в двенадцатиперстной кишке. Наиболее часто гельминты регистрируются у взрослых свиней, вызывая гипертрофический гастрит, эрозии и повреждения слизистой оболочки. Первые случаи спонтанного оллуланоза наблюдаются у поросят в двухмесячном возрасте, однако экспериментально легко вызывается заболевание и в более раннем возрасте (28-30 дней). Экономический ущерб от оллуланоза складывается из снижения среднесуточных приростов поросят, молочности маток, рождения от больных маток поросят с низкой живой массой. Поросята от этих маток хуже развиваются, а падеж среди них в два раза выше, чем у поросят, полученных от здоровых свиноматок [3-8]. Оллуланы обнаружены у домашних и диких кошек, лисиц, тигров, львов, домашних свиней в Европе, Азии, Америке, Австралии, Новой Зеландии, а у свиней они зарегистрированы только в Европе и Азии. Морфология нематод рода Ollulanus Leuckart, 1865 Оллуланы - мелкие (0,7-1,3 мм) нежные раздельнополые нематоды [19]. Тело свернуто в спираль или в кольцо. Кутикула тонко продольно и поперечно отчетливо исчерчена. Ротовая капсула небольшая, образованная нависающей кутикулой. Ротовая полость без зубов и других хитиновидных образований. Имеются крупные шейные сосочки на уровне пищевода (рис. 1-4). Самец. Бурса не разделена на лопасти. Антеро-вентральные и постеро-вентральные ребра самостоятельны, тонкие и длинные; антеро-латеральное ребро удлиненное, объединяется общим стволом с другими латеральными; дорзальное ребро утолщенное, подразделяется на дистальном конце на два нерасщепленных ствола; энтеродорзальное отходит от дорзального ствола примерно на уровне середины его длины. Спикулы короткие, равного размера, раздвоены на конце на острую и притуплённую ветви. Рулек отсутствует. Самка. Хвост притуплённый, оканчивается 3-4 короткими отростками, к которым могут присоединяться дополнительно 1-2 выроста. Вульва лежит на уровне задней части тела паразита. Вагина короткая. Матка и яичник одинарные, живородящие, яйца крупные, личинок 3-5 шт. 
Рис. 1. Самка оллулан 
Рис. 2. Хвостовой конец самки: А – анус, В – вульва Типичный вид: Ollulanus tricuspis Leuckart, 1865. В настоящее время описано четыре вида оллулан (таблица). Гельминты развиваются по эндоциклу [11, 21], т.е. все стадии развития протекают в одном хозяине. Яйца развиваются в матке самки. Здесь же вылупляются личинки, которые трижды линяют, после чего покидают тело самки, еще несколько раз линяют и превращаются в половозрелых особей. Заражение свиней происходит при поедании рвотных масс или желудков убитых (павших) животных. Полный цикл развития нематод Ollulanus suis от яйца до половозрелой стадии составляет 12-13 дней. Из яиц личинки формируются за сутки. В следующие сутки они дважды линяют. От яйца до формирования личинки третьей стадии проходит около трех суток. До появления половозрелых самок от личинки четвертой стадии требуется около 10 дней, а на 11-й день у самок формируются личинки. Эпизоотологические данные Заболевание распространяется при межхозяйственных перевозках свиней. Инвазированию способствует скученное содержание. Экстенсивность и интенсивность инвазии у животных возрастает до 2-2,5-леьнего возраста, а затем идет постепенно снижение. Стойкие очаги оллуланоза формируются в хозяйствах, где в одной группе содержатся свиньи разного возраста, особенно когда среди откормочного поголовья находятся выбракованные свиноматки и хряки. Интенсивность инвазии колеблется в очень больших пределах – от единичных до 100 тыс. и более экземпляров. Средняя интенсивность инвазии у взрослых свиней 1050-2900 экземпляров. Резкой разницы в инвазированности животных оллуланами в зависимости от сезона года не наблюдается. Среди оллулан во все сезоны года доминируют самки (53,5-63,3%), несколько меньше в процентном отношении самцов (18,9-26,8%) и еще меньше ювенильных форм (6,5-19,9%). Резких сезонных колебаний в соотношении полов и стадий развития не отмечается, хотя с конца зимы – начала весны несколько увеличивается процент личинок за счет снижения числа самцов. 
Рис. 3. Половая бурса оллулан Рис. 4. Хвостовой конец личинки самца Определения вида нематод рода Ollulanus: Ollulanidae, Strongylata
Патогенез Оллуланы механически повреждают ткани желудка. Местами их паразитирования являются слизистая оболочка, протоки желез, содержимое желудка и двенадцатиперстной кишки. Нематоды расселены в слизистой оболочке желудка неравномерно, имеются участки, сплошь пронизаны оллуланами. Особенно много таких колоний встречается в зоне желез дна желудка. На этих местах появляются эрозии и возникают воспалительные процессы. В начале заболевание характеризуется острым течением, затем переходит в хроническую форму и протекает в виде гипертрофического гастрита. Патологические изменения При спонтанном оллуланозе в желудке у свиней находится вязкая слизь с серовато-белыми сгустками. Слизистая оболочка мозговидно складчатая. Иногда складчатость приобретает сосочковидность с красными пятнышками на вершинах. Стенка желудка утолщена в 1,5-3 раза. Гистологически обнаруживают гипертрофический гастрит с формированием на месте локализации гельминтов гранулезного воспаления [8, 11]. Методики диагностики оллуланоза свиней Взятие проб Местами паразитирования оллулан у свиней являются все зоны желудка и двенадцатиперстной кишки. Однако нематоды локализуются в этих органах неравномерно. Поэтому при работе, когда требуется учитывать все экземпляры паразитов, пробы берут из всей поверхности слизистой оболочки, желудка и двенадцатиперстной кишки, а также их содержимое. Для определения благополучия хозяйства по оллуланозу достаточен материал из слизистой оболочки зоны желез дна желудка [3]. Оборудование и материал: нож, кишечные ножницы, кювета, пинцет, баночки с крышечкой объемом 10-500 мл, жидкость Барбагалло, ведро, приспособление для снятия слизистой оболочки желудка. Ход работы: у убитых или павших свиней желудок разрезают по малой кривизне от входа пищевода до пилоруса. Содержимое выливают в ведро, слизистую оболочку слегка промывают водой. Эту жидкость сливают в емкость с содержимым органа. Желудок выворачивают и кладут на приспособление для сбора слизистой оболочки. Соскобы с поверхности слизистой оболочки делают ножом, а материал собирают в кювету. Во время взятия проб учитывают следующие зоны – желез дна, кардиальных, пилорических желез, безжелезистой зоны, дивертикула и пилоруса. Пробы помещают в баночки и консервируют жидкостью Барбагалло. Двенадцатиперстную кишку разрезают ножницами продольно, содержимое помещают в отдельную посуду, затем кишку разворачивают, вытянув по длине, и ножом берут глубокие соскобы с поверхности слизистой оболочки. Пробы помещают в посуду и консервируют. Компрессорный метод обнаружения оллулан Применяется при исследовании на трихинеллез и полном гельминтологическом вскрытии мелких органов или животных [13]. Исследуемые объекты под микроскопом по-разному поглощают и отражают свет. Кроме того, происходит его преломление отдельными участками препарата. Эти свойства обуславливают разницу в амплитуде и фазе световых волн, а от этого зависит контрастность и четкость изображения. Вследствие особых свойств слизистой оболочки желудка (наличие кормовых масс, текучести) и оллулан (мелкие размеры, цвет близкий к тканям отдельных зон и участков слизистой оболочки) требуется несколько иная методика исследования. Исследование материала в проходящем свете приводит к ошибкам, так как обнаружить оллулан на фоне ткани бывает сложно. Часто бывают пропуски нематод, особенно при низкой интенсивности. Кроме этого, из-за наличия в тканях остатков корма, земли сдавливать материал до необходимой толщины невозможно. На этих участках свет не проходит, это затрудняет исследование и приводит к ошибкам. При сжатии слизистой оболочки желудка обычным компрессорием часть ткани и жидкость вытесняются за края стекол и попадают на предметный столик микроскопа. Это мешает и удлиняет проведение исследований. Поэтому следует использовать компрессорий, основание которого шире верхней пластины на 5-10 мм. В этом случае весь выдавливаемый субстрат концентрируется на площадке основания, свободной от верхней пластины [6].
Колбу помещают на магнитную мешалку или лабораторный встряхиватель, или в термостат. Степень переваривания определяют визуально. Время переваривания 25 и более минут. Оно зависит от многих факторов: температуры, скорости встряхивания или вращения, наличия кормовых остатков, наполняемости желудка в момент убоя. Работают на магнитной мешалке при малых или средних оборотах, так как при больших оборотах оллуланы разрушаются. Осаждение и сбор оллулан проводят в стаканах емкостью 1-2 л. В сосуд наливают теплую воду (35-39°С) и дают отстоять не менее 15 минут. Переваренный материал процеживают через сито и перемешивают с водой в стакане. После 15-20-минутного отстаивания верхний слой воды сливают, а осадок наливают в чашки Петри и просматривают под микроскопом МБС.
Оллуланы во внешней среде малоподвижны, а при комнатной температуре - неподвижны. Поэтому для искусственной стимуляции подвижности требуется создать для оллулан необычные условия - применять раздражающе средства. Методика разработана совместно с М. Ю. Паскальской и В. И. Офицеровым [ 22 ] . Сущность метода. Метод основан на том, что оллулан помещают в растворы химических веществ, которые вызывают раздражение нервных рецепторов кутикулы или же проникают в тело нематод. Оборудование: микроскоп МБС или МБИ, предметные стекла, чашки Петри, глазные пипетки, препаровальные иглы, измерительные пипетки от 1 до 10 мл, колбы емкостью 10-50 мл. Реактивы: диметилсульфоксид, диметилформамид, сернистый натрий. Ход определения. Готовят 0,5-1%-ный раствор сернистого натрия на физиологическом растворе; 50%-ный раствор диметилсульфоксида или диметилформамида. Жизнеспособность определяют индивидуально у каждого гельминта или же одновременно у оллулан нескольких экземпляров. В первом случае матрикс помещают в чашки Петри. С помощью микроскопа МБС и препаровальной иглы вылавливают одну оллулану, помещают в каплю одного из растворов (сернистого натрия, диметилсульфоксида или диметилформамида) и наблюдают под микроскопом в течение 3-5 минут. Во втором случае исследуемый материал помещают в чашку Петри и заливают тонким слоем раствора диметилформамида или диметилсульфоксида. Дифференцированно регистрируют живых и погибших самок, самцов, личинок.
Диметилсульфоксид и диметилформамид более удобны в работе и безопасны. Методика определения интенсивности инвазии Определение интенсивности инвазии при оллуланозе - очень трудоемкая работа, так как в большом матриксе приходится выбирать мелких гельминтов, которых может быть свыше 50 тыс. экземпляров. Порциальный метод в данном случае может дать большие ошибки, т.к. оллуланы в слизистой оболочке расположены очень неравномерно. Нет сомнения в том, что при проведении опытов, в которых учитывается каждый экземпляр оллулан, незаменимым является анализ всех тканей и содержимого желудка. В этом случае точность исследования превалирует над трудоемкостью. В практических условиях приходится проверять большое количество проб с достаточно высокой точностью. Это необходимо, например, при изучении сезонной и возрастной динамики, при сравнении инвазированности свиней двух ферм, хозяйств, при анализе патологических изменений и т.д. В этом случае может быть использовано исследование определенных зон с математической поправкой [7].
Обоснование метода. Экспериментально на 330 пробах установлено, что оллуланы в разных зонах желудка и двенадцатиперстной кишки расположены крайне неравномерно. Количество оллулан в содержимом желудка составило 33,3±5,4%, в слизистой оболочке зоны желез дна 61,9±4,9%, в зоне кардиальных желез 2,1±0,2%, в зоне пилорических желез 2,1±0,6%, в безжелезистой зоне 0,2±0,06%, в зоне дивертикула 0,2±0,08%, в зоне пилоруса 0,1±0,04%, в двенадцатиперстной кишке 0,1±0,01%. Расчеты статистически достоверно показали, что в содержимом и зоне желез дна желудка локализуется 95,29±0,85% оллулан, а в остальных зонах - 4,71±0,83%. Ход определения. Для исследования берут по две пробы из желудка - содержимое и слизистую оболочку желез дна. Подсчитывают всех оллулан. Полученное число увеличивают на 4,7%. Методика инвазирования оллуланами поросят Поросят инвазируют при изучении биологии оллулан, патогенеза, испытании антгельминтиков, определении ущерба и т.д. Для опытов берут поросят из благополучных по оллуланозу хозяйств или выращенных в условиях, исключающих инвазирование оллуланами, т.е. изолированно от свиней старших возрастов. Оборудование: нож, кишечные ножницы, кювета, пинцет, банки или колбы емкостью 500 мл, приспособление для взятия слизистой оболочки желудка, весы, колбочки на 50 мл, разновесы, микроскоп МБС, чашки Петри, магнитная мешалка, встряхиватель, пипетки 1-10 мл, холодильник, препаровальные иглы, глазная пипетка, шприц, резиновая груша, ситечко, стаканы 1-2 л. Реактивы: соляная кислота, пепсин. Ход работы. Экспериментально установлено, что одинаково успешно можно инвазировать поросят оллуланами, взятыми как из слизистой оболочки, так и содержимого желудка свиней. В качестве доноров лучше использовать свиноматок 2-2,5-летнего возраста. Группу свиноматок, предназначенных для убоя и взятия от них материала для искусственного воспроизведения оллуланоза, выдерживают 5-10 часов на голодной диете. Водопой не ограничивают. Желудок вскрывают ранее описанным способом сразу же после нутровки туши. Содержимое желудка и соскобы слизистой оболочки собирают в одну посуду. От каждого животного пробу помещают в отдельную емкость. Пробу взвешивают. Затем определяют количество оллулан в материале. Для этого от каждой свиньи берут в отдельные три колбы одинаковые навески пробы (от 3 до 10 г). Методом переваривания определяют среднее количество оллулан в одной пробе, а затем делают пересчет и узнают число оллулан во всем материале. Инвазируют свиней оллуланами в день убоя донора, только в крайнем случае - на следующий день. Материал хранят в холодильнике при 4-5°С. Поросят до инвазирования выдерживают 5-6 часов на голодной диете. Материал перемешивают с молоком и задают индивидуально при небольшой (3-5 голов) группе поросят. Инвазирование поросят повторяют не менее 2-3 раз с интервалами 2-3 дня. В зависимости от целей работы одному животному в возрасте 30-35 дней задают до 10 тыс. экземпляров оллулан, однако лучше они приживаются при даче от 1 до 2 тыс. экземпляров.
Через 5-7 дней животных убивают и берут по две пробы из одного желудка - содержимое и соскобы слизистой оболочки. В этот же день проводят исследования на наличие оллулан и определяют их жизнеспособность. Содержимое исследуют методом последовательного промывания, а слизистую оболочку - методом переваривания в искусственном желудочном соке. Жизнеспособность определяют с помощью диметилсульфоксида или диметилформамида. Учет результатов. Для учета берут только тех свиней, у которых обнаружены оллуланы. Свободных животных от этих нематод из опыта исключают. Жизнеспособность оллулан определяют дифференцированно в содержимом и в слизистой оболочке желудка, а также ведут учет в отдельности погибших и живых самок, самцов и личинок. При определении жизнеспособности учитывают не менее 100 самцов, самок и их личинок в содержимом и отдельно в слизистой оболочке желудка. Вычисляют экстенс-, интенсэффективность, нематодоцидную и лярвоцидную эффективность. жүктеу/скачать 0.72 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|