Методическое пособие к малому практикуму по биохимии и молекулярной биологии

65 
Работа 3. Осаждение белков 
Материалы исследования и реактивы 
1. Альбумин яичный, 1 %-ный раствор. 
2. Сульфат аммония, насыщенный раствор. 
3. Сульфат аммония кристаллический. 
4. Трихлоруксусная кислота, 10 %-ный раствор. 
5. Свинец уксуснокислый, 5 %-ный раствор. 
6. Уксусная кислота, 1 и 10 %-ные растворы. 
7. Спирт этиловый. 
8. HNO
3
, концентрированная. 
9. Медь сернокислая, 2 %-ный раствор. 
10. Натр едкий, 10 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Стеклянные палочки. 
2. Фильтры бумажные. 
3. Воронки диаметром 3–5 см. 
4. Пробирки обыкновенные. 
5. Пипетки глазные. 
6. Спиртовки 
Работа 4. Определение изоэлектрической точки белка 
Материалы исследования и реактивы 
1. Желатина, 1 %-ный раствор. 
2. Спирт этиловый. 
3. Буферные системы с pH: 3,0; 4,0; 5,0; 6,0. 
Оборудование
1. Пипетки на 1 мл. 
2. Бюретки на 50 мл. 
3. Штативы с пробирками. 
4. Карандаш по стеклу. 
Работа 5. Количественное определение белка по Горналу 
Материалы исследования и реактивы 
1. Сыворотка крови. 
2. Стандартный раствор белка (альбумина): 1 г кристаллического белка раство-
ряют в 50 мл 0,9 %-ного раствора хлорида натрия. Полученный стандартный 
раствор белка содержит 20 мг белка в 1 мл. 
3. Биуретовый реактив: 0,5 г медного купороса и
0,6 г виннокислого калия-
натрия (сегнетовой соли) растворяют в 50 мл воды в мерной колбе на 100 мл 
при энергичном помешивании. К раствору постепенно добавляют 30 мл 
10 %-ного раствора NaOH (свободного от углекислого натрия), затем 0,2 г 
йодистого калия для предотвращения самопроизвольного восстановления. 
Раствор доводят водой до 100 мл и хранят в холодильнике в плотно закрытой 
полиэтиленовой или парафинированной посуде. 

66 
Оборудование
1. Фотоэлектроколориметр (кюветы с рабочей длиной 10 мм). 
2. Пипетки на 1; 2; 5 мл. 
3. Миллиметровая бумага. 
4. Штативы с пробирками. 
5. Карандаши по стеклу. 
Работа 6. Обессоливание белкового раствора при помощи гель-фильтрации на колон-
ке с Сефадексом G-25 
Материалы исследования и реактивы 
1. Хромат калия, 0,2%-ный раствор. 
2. Голубой декстран, 0,2%-ный раствор. 
3. Альбумин, 0,5%-ный раствор в 5%-ном растворе сульфата аммония. 
4. Свинец уксуснокислый, 5 %-ный раствор. 
5. Биуретовый реактив (см. раб. 5). 
Оборудование 
1. Хроматографическая колонка с Сефадексом G-25. 
2. Стаканы на 50 мл (2 шт). 
3. Градуированные пробирки (эппендорфы; 10 шт). 
4. Штатив для эппендорфов; 
5. Автоматические пипетки переменного объѐма на 200 мкл. 
Работа 7. Сложные белки 
Материалы исследования и реактивы 
1. Дрожжи. 
2. Молоко свежее. 
3. Слюна неразведенная. 
4.

–нафтол, 1 % ный раствор в 70 %-ном растворе спирта. 
5. Фенолфталеин, 1 %-ный спиртовой раствор. 
6. Молибденовый реактив: 7,5 г молибдата аммония растворяют в 50 мл воды 
и прибавляют 50 мл концентрированной азотной кислоты. Полное растворе-
ние наступает после добавления HNO
3
. 
7. Уксусная кислота, концентрированная. 
8. NaOH, 30 %-ный и 10 %-ный растворы. 
9. СuSO
4
, 2 %-ный раствор. 
10. H
2
SO
4
, 5 %-ный раствор и концентрированная. 
11. HNO
3
, концентрированная. 
12. Серебро азотнокислое, 1 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Фильтры бумажные. 
2. Стеклянные палочки. 
3. Воронки диаметром 3–5 см. 
4. Водяная баня. 
5. Колбочки конические на 50–100 мл с обратным холодильником. 
6. Карандаши по стеклу. 
7. Индикаторная бумага. 
8. Фарфоровые ступки с пестиками. 

67 
Работа 8. Определение активности каталазы по Баху и Зубковой 
Материалы исследования и реактивы 
1. Кровь. 
2. Перекись водорода, 0,1 Н раствор. 
3. Перманганат калия, 0,1 Н раствор. 
4. Серная кислота, 10 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Колба коническая на 50 мл. 
2. Бюретки на 25 мл. 
3. Пипетки на 1; 10 мл. 
4. Водяная баня. 
Работа 9. Определение активности амилазы по Вольгемуту 
Материалы исследования и реактивы 
1. Слюна. 
2. Крахмал, 0,1 %-ный раствор. 
3. Раствор Люголя: 1 %-ный раствор йода в 2 %-ном растворе йодида калия. 
Оборудование 
1. Штатив с пробирками. 
2. Карандаш по стеклу. 
3. Термостат, t = 37 
о
С. 
4. Пипетки на 1; 2 мл. 
5. Бюретка на 50 мл. 
Работа 10. Определение активности аланинтрансаминазы (АлТ) методом
Райтмана–Френкеля 
Материалы исследования и реактивы 
1. Сыворотка (плазма) крови. 
2. Фосфатный буфер, 0,1 М, рН 7,4. 
3. Субстратный раствор: 29 мг 

-кетоглутаровой кислоты и 1,78 г DL-аланина 
растворяют в минимальном количестве 1 М раствора NaOH, затем доводят 
до 100 мл 0,1 М фосфатным буфером, рН 7,4. Хранят в холодильнике.
4. Раствор 2,4-динитрофенилгидразина: 20 мг 2,4-ДНФГ растворяют в 200 мл 
1 М раствора HCl при нагревании, доводят до 100 мл 1М раствором HCl. На 
следующий день фильтруют.
5. NaOH, 0,4 М раствор, свободный от карбонатов. 
6. Стандартный раствор пировиноградной кислоты (ПВК): 11 мг пирувата 
натрия растворяют в 10 мл воды, доводят водой до 100 мл. Хранят в холо-
дильнике. 
Оборудование 
1. Штатив с пробирками.
2. Пипетки на 0,1; 1; 5 мл. 
3. Термостат (t = 37 
о
С). 
5. ФЭК. 

68 
Работа 11. Исследование некоторых свойств ферментов 
Материалы исследования и реактивы 
1. Слюна. 
2. CuSO
4
, 2 %-ный раствор. 
3. Крахмал, 0,5 %-ный раствор (требует кипячения). 
4. Буферные растворы pH 5,0; 7,0; 9,0. 
5. NaOH, 10 %-ный раствор. 
6. Суспензия соевой муки, 2 %-ная. 
7. Фенолфталеин, 1 %-ный спиртовой раствор. 
8. NaCl, 2 %-ный раствор. 
9. Реактив Люголя (см. работу №11). 
10. Дрожжи. 
11. Al
2
O
3
, порошок. 
12. Мочевина, 1 % -ный раствор. 
13. Тиомочевина, 1 %-ный раствор. 
14. Сахароза, 1 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Штатив с пробирками. 
2. Предметные стекла. 
3. Ступки с пестиками. 
4. Карандаши по стеклу. 
5. Пипетки на 1 мл. 
6. Термостат (t=37 
о
С) 
7. Стеклянные палочки. 
8. Воронки диаметром 5 см. 
9. Фильтры бумажные. 
10. Бюретки на 50 мл. 
11. Скальпели. 
Работа 12. Витамины 
Материалы исследования и реактивы 
1. Тиамин, 5 %-ный раствор.
2. NaOH, 10 %-ный и 30 %-ный растворы. 
3. Рибофлавин, 0,025 %-ный раствор. 
4. Цинк металлический. 
5. Ацетон. 
6. Калий железосинеродистый, 5 %-ный раствор. 
7. Изобутиловый спирт. 
8. HCl концентрированная и 2 %-ный раствор. 
9. Дрожжи. 
10. Никотиновая кислота, 3%-ный раствор. 
11. Медь уксуснокислая, 5 %-ный раствор. 
12. 
Фенолфталеин, 1 %-ный спиртовой раствор. 
13. 2,6-дихлорфенол индофенол, 0,001 Н раствор. 
14. Высушенная ягода шиповника. 
15. Рыбий жир. 

69 
16. Серная кислота, концентрированная. 
17. Смесь анилина и концентрированной соляной кислоты (15:1). 
Оборудование 
1. Штатив с пробирками. 
2. Пипетки на 1; 5 мл. 
3. Ступка с пестиком. 
4. Воронка. 
5. Колбы мерные на 50 мл. 
6. Бюретки на 50 мл. 
7. Баня водяная. 
8. Флуориметр. 
9. Стеклянные палочки. 
10. Фильтры бумажные. 
11. Колбочки конические (или стаканы) для титрования. 
12. Спиртовки. 
Работа 13. Химическое строение и свойства углеводов 
Материал исследования и реактивы 
1. Глюкоза, 1 %-ный раствор. 
2. NaOH, 10 %-ный раствор. 
3. CuSO
4
, 2 %-ный раствор 
4. Фелингова жидкость. 
Готовят два раствора: А – 20,0 г CuSO
4
∙5Н
2
О в 500 мл воды; В – 100 г сегне-
товой соли и 75 г гидроксида натрия в 500 мл воды. Растворы хранят раз-
дельно. Перед употреблением смешивают равные объемы первого и второго 
раствора. 
5. Серная кислота, концентрированная. 
6. Фруктоза, 1 %-ный раствор 
7. Реактив Селиванова: 0,05 г резорцина растворяют в 100 мл раствора соляной 
кислоты (1:1). 
8. Арабиноза, 1 %-ный раствор. 
9. Орциновый реактив: 0,2 г орцина растворяют в 100 мл 30 %-ного раствора 
соляной кислоты и добавляют хлорид железа (0,1 г). Раствор хранят в темной 
склянке. 
10. Сахароза, 1 %-ный раствор. 
11. 

-нафтол, 1 %-ный раствор в 70 %-ном растворе этилового спирта. 
12. Крахмал, 1%-ный раствор. 
13. Мальтоза, 1%-ный раствор. 
Оборудование 
1. Спиртовки. 
2. Держатели для пробирок. 
Работа 14. Количественное определение глюкозы по Халтману 
Материал исследования и реактивы 
1. Трихлоруксусная кислота, 10 %-ный раствор 
2. Кровь. 

70 
3. Глюкоза, 200 мг %-ный раствор. 
4. о-толуидиновый реактив: 0,15 г тиомочевины растворяют в 94 мл ледяной 
уксусной кислоты и смешивают с 6 мл свежеперегнанного о-толуидина. Ре-
актив хранится несколько месяцев. 
Оборудование 
3. Штатив с сухими пробирками. 
4. Центрифуга с центрифужными пробирками. 
5. Фольга. 
6. Водяная баня. 
7. Пипетки на 1; 5 мл. 
8. ФЭК. 
9. Кюветы на 10 мм. 
Работа 15. Количественное определение глюкозы глюкозооксидазным методом 
Материал исследования и реактивы 
1. Кровь или другой исследуемый материал. 
2. NaCl, 0,9 %-ный раствор. 
3. ZnSO
4
, 5 %-ный раствор. 
4. NaOH, 1,2 %-ный раствор. 
5. Стандартный раствор глюкозы, 180 мг %-ный (10 ммоль в 0,2 %-ном раство-
ре бензойной кислоты). 
6. Энзимо-хромогенный реактив: в мерную колбу на 200 мл налить 60–80 мл 
0,2 М ацетатного (фосфатного) буферного раствора, рН 4,8, добавить 4 мг 
глюкозооксидазы (200 – 500 Е) и 2 мг пероксидазы (100 – 200 Е), растворить 
перемешиванием. Внести 2 мл 1 %-ного спиртового раствора о-толидина и 
довести объем до метки буфером. Хранить в холодильнике в темной склянке. 
Оборудование 
1. Штатив с пробирками. 
2. Пипетки на 0,1; 1; 5 мл. 
3. Мерные колбы на 100 и 200 мл. 
4. ФЭК. 
Работа 16. Анаэробное окисление углеводов 
Материал исследования и реактивы 
1. Дрожжи. 
2. Сыворотка молока. 
3. Глюкоза, 5 %-ный раствор. 
4. NaOH, 10 %-ный раствор. 
5. Реактив Люголя (см. работу №11). 
6. Реактив Уфельмана: готовят 2 %-ный раствор фенола и 5 %-ный раствор 
хлорного железа. Перед употреблением реактивы смешивают: на 1 мл рас-
твора фенола 1 каплю раствора железа. 
Оборудование 
1. Бродильные трубки. 
2. Ступки с пестиками. 
3. Термостат (t= 37ºС). 

71 
4. Фильтры бумажные. 
5. Воронки диаметром 3–5 см. 
6. Спиртовки. 
7. Держатели для пробирок. 
Работа 17. Аэробное окисление углеводов 
Материал исследования и реактивы. 
1. Дрожжи. 
2. Трихлоруксусная кислота, 20 %-ный раствор. 
3. Резорцин кристаллический. 
4. Янтарная кислота, кристаллическая. 
5. Окись алюминия. 
6. Н
2
SO
4
концентрированная. 
7. Цитрат натрия, кристаллический. 
Оборудование 
1. Штативы с пробирками. 
2. Скальпели. 
3. Флуориметр. 
4. Карандаш по стеклу. 
5. Фильтры бумажные. 
6. Воронки с диаметром 3–5 см. 
7. Ступки с пестиками. 
8. Спиртовки. 
9. Держателя для пробирок. 
Работа 18. Химические свойства и обмен липидов 
Материал исследования и реактивы 
1. Сухой яичный желток, 1 %-ная суспензия: желтки куриных яиц размазывают 
на стекле и высушивают на воздухе при комнатной температуре. Сухой жел-
ток соскабливают скальпелем и растирают в ступке до порошка. 
2. Молибденовый реактив (см. работу № 6). 
3. Уксусный ангидрид. 
4. Молоко. 
5. Панкреатин, 5 %-ный раствор. 
6. Мозг животных. 
7. Гипс. 
8. Хлороформ. 
9. Серная кислота, концентрированная. 
10. Фенолфталеин, 1 %-ный спиртовой раствор. 
11. Карбонат натрия, 1 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Штативы с сухими пробирками. 
2. Ступка с пестиками. 
3. Шпатели. 
4. Пробки для пробирок. 
5. Термостат. 

72 
6. Предметные стекла. 
7. Скальпели. 
8. Фильтры бумажные. 
9. Воронки с диаметром 3–5 см. 
Работа 19. Количественное определение ДНК методом Шмидта – Таннгаузера 
Материалы исследования и реактивы 
1. Печень крысы. 
2. Натр едкий, 4 %-ный раствор. 
3. Натрий хлорид, насыщенный раствор в 20 %-ном растворе СН
3
СООН. 
4. Спирт этиловый. 
5. Трихлоруксусная кислота, 5 %-ный раствор. 
6. Индикаторная бумага, универсальная. 
7. Натр едкий, 30 %-ный раствор. 
8. Дистиллированная вода. 
9. Аммоний, молибденовокислый, 5 %-ный раствор в серной кислоте: 50 г мо-
либдата аммония растворяют в 500 мл дистиллированной воды и, если нуж-
но, фильтруют. Раствор переносят в мерную колбу на 1 л. В другой колбе к 
250 мл дистиллированной воды приливают 150 мл концентрированной кис-
лоты. Второй раствор соединяют с первым и после охлаждения доливают 
водой до метки.
10. Гидрохинон, 1 %-ный раствор. 
11. Карбонат – сульфитная смесь: отдельно растворяют 40 г безводного карбо-
ната натрия в 200 мл воды и 7,5 г сульфита натрия (Na
2
SO
3
·7H
2
O) в 50 мл 
воды. Первый сливают со вторым и получают карбонат-сульфитную смесь. 
12. Стандартный раствор однозамещѐнного фосфата калия: на аналитических 
весах отвешивают 0,4393 г химически чистого КН
2
РО
4
и растворяют его в 
дистиллированной воде в мерной колбе на 100 мл. Перед употреблением ос-
новной раствор фосфорнокислого однозамещѐнного калия разводят в мер-
ной колбе в 200 раз. В 1 мл рабочего стандартного раствора содержится 
0,005 мг фосфора (5 мкг). 
Оборудование 
1. Водяная баня. 
2. Стеклянные палочки. 
3. Пипетки на 1; 2; 10 мл. 
4. Баня со льдом. 
5. Центрифужные пробирки. 
6. Центрифуга. 
7. Колбы Кьельдаля на 25–50 мл. 
8. Конические колбы на 50 мл. 
9. Мерные колбы на 25 мл. 
10. Пробирки градуированные на 10 мл. 
11. ФЭК (кюветы с рабочей длиной 10 мл).
12. Весы центрифужные. 
13. Миллиметровая бумага. 
14. Карандаши по стеклу. 

73 
Работа 20. Количественное определение ДНК методом Дише 
Материалы исследования и реактивы 
1. Селезенка крысы. 
2. Натрий хлорид, 5 %-ный раствор, содержащий 0,3 % трехзамещенного цит-
рата натрия. 
3. Кварцевый песок. 
4. Натр едкий, 0,4 %-ный раствор. 
5. Стандартный раствор ДНК в 0,05 Н растворе NaOH (800 мкг/мл). 
6. Реактив Дише: 1 г дифениламина растворяют в 100 мл ледяной уксусной 
кислоты и добавляют 2,75 мл концентрированной серной кислоты. Реактив 
готовят перед употреблением. 
7. Хлорная кислота, 10 %-ный раствор. 
Оборудование 
1. Ступки с пестиками. 
2. Центрифужные пробирки. 
3. Центрифуга. 
4. Весы центрифужные. 
5. Химические стаканы на 100 мл. 
6. Палочки деревянные. 
7. Пробирки обыкновенные. 
8. Пробки корковые. 
9. Водяная баня. 
10. ФЭК (кюветы с рабочей длиной 10 мл). 
11. Миллиметровая бумага. 
12. Карандаши по стеклу. 
Работа 21. Спектрофотометрическое определение суммарного содержания 
нуклеиновых кислот по А.С. Спирину 
Материалы исследования и реактивы 
1. ДН-протеид, выделенный из селезенки (щелочной раствор, см. работу №8). 
2. Хлорная кислота, 5 %-ный и 10 %-ный растворы. 
Оборудование 
1. Пробки с обратным холодильником. 
2. Градуированные пробирки. 
3. Фильтры бумажные. 
4. Стеклянные палочки. 
5. Водяная баня, t = 100
о
С. 
6. Спектрофотометр. 
7. Воронки диаметром 3–5 см. 

74 

жүктеу/скачать 1.21 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: