Методичні рекомендації для самостійної роботи студентів при підготовці до практичного заняття
жүктеу/скачать 0.56 Mb.
|
| Тема: Коринебактерии дифтерии. Бордетеллы коклюша. Микобактерии туберкулеза. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия: 2а. Среднее: усвоить основные биологические свойства патогенных для человека коринебактерий, бордетелл, микобактерий. Ориентироваться в выборе методов лабораторной диагностики этих заболеваний, знать основные методы специфической профилактики и лечения. 2б. Конкретная: 1). Распознавать морфологию и дифференциюваты биологические свойства возбудителей дифтерии, коклюша, туберкулеза. 2). Овладеть методиками микробиологической диагностики заболеваний. 3). Предложить методы специфической терапии и профилактики дифтерии, коклюша, туберкулеза. 3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы. 3.1. Определение понятий "патогенность" и "вирулентность". 3.2. Факторы вирулентности бактерий. 3.3. Характеристика токсинов бактерий. 3.4. Периоды развития инфекционных болезней. 3.5. Определение факторов вирулентности бактерий. 3.6. Выявление включений (зерен волютина) с помощью микроскопических методов исследования (Нейссера, Леффлера). 3.7. Микроскопический метод выявления кислотоустойчивых микроорганизмов (метод Циля-Нильсена). 3.8. Источники, механизмы и пути передачи инфекции. 3.9. Роль факторов внешней среды и социальных условий в возникновении болезни. 4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению. 4.1.Таксономическое положения коринебактерий. 4.2.Морфология, тинкториальные и культуральные особенности возбудителя дифтерии. 4.3.Биовары и их биологические свойства. 4.4.Епидемиология и патогенез дифтерии. Факторы патогенности дифтерийных палочек. Значение в развитии заболевания. 4.5.Противодифтерийний иммунитет. Значение вакцинации в профилактике болезни. 4.6.Методы лабораторной диагностики дифтерии. Значение проб на токсигенность возбудителя дифтерии. 4.7. Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии. 4.8.Таксономическое положения бордетелл. 4.9. Биологические свойства возбудителя коклюша. 5.0.Епидемиология и патогенез коклюша. Особенности течения болезни. 5.1.Методы микробиологической диагностики и профилактики коклюша. 5.2. Таксономическое положение коринебактерий. 5.3.Морфологични и биологические свойства возбудителя туберкулеза. 5.4.Лабораторные методы диагностики туберкулеза. 5.5.Препараты для лечения и специфической профилактики туберкулеза. 5. Содержание темы. Граф логической структуры содержания: Дифтерия Острое инфекционное заболевание, вызываемое токсигенными коринебактертями дифтерии, передается воздушно-капельно путем; характеризуется местным фибринозным воспалением преимущественно слизистых оболочек рото- и носоглотки, а также явлениями общей интоксикации, поражением сердечно-сосудистой, нервной и выделительной системы. Биологические особенности возбудителей дифтерии Морфология: Гр. + Палочки. Используют сложный метод окраски по Нейссеру и простой по Леффлеру. Характерно наличие на концах зерен волютина, которые окрашиваются более интенсивно или в другой цвет (явление метахромазией). Возбудители расположены под углом друг к другу. Характерно, явление полиморфизма. Растет в аэробных условиях на сывороточных средах Ру (свернута лошадиная сыворотка), Леффлера (сыворотка с 1/3 сахарного бульона), используются сывороточный и кровянй телуритовий агар, среда Клауберга и др. По культуральным и биохимическим свойствам выделяют 4 биовара: gravis, mitis, intermedius, belfanti. Токсигенность связанная с продукцией экзотоксина Явление ,, фаговой конверсии "Попадание в бактериальную клетку умеренного бактериофага, который привносит в геном" tox + ген. "Клетка начинает продуцировать экзотоксин. Определение токсигенности дифтерийной палочки в опытах ,, in vitro "Используются реакции прецепитации в геле. Антитоксин способен диффундировать в гель, при наличии в геле дифтерийного экзотоксина, который производится при росте бактерий, образуется линия преципитации. Иммунитет. После болезни возникает антитоксическое иммунитет, хотя возможны повторные случаи заболевания. Микробиологическая диагностика дифтерии имеет решающее значение, при этом особое внимание уделяется изучению морфологических, культуральных, биохимических свойств, определению биоваров и токсигенности дифтерийной палочки. Особенно важное значение приобретает дифференциация дифтерийной палочки от непатогенных коринебактерий. Специфическая профилактика Используют дифтерийный анатоксин при введении, которого формируется антитоксическое иммунитет. Экстренная профилактика и лечение противодифтерийной сывороткой Коклюш (син .: коклюш) - острая инфекционная болезнь, характеризующаяся катаральным воспалением дыхательных путей и приступами спазматического кашля. Биологические особенности возбудителя коклюша . Возбудитель коклюша- небольшие ГР- овоидной формы палочки. Спор не образуют, капсулы есть только у B. pertussis, а жгутики - только в B. bronchiseptica. Бордетеллы - суровые аэробы, требовательны к условиям выращивания. Культивируют их на среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с кровью) или на казеино-угольном агаре (КУА). Колонии всех видов гладкие, напоминающие капельки ртути. На кровяном агаре колонии окружены зонами гемолиза. Биохимические свойства бордетелл очень слабы. Они не разлагаются белки и углеводы, не восстанавливают нитраты, но выделяют каталазу. Токсигенность. Выделяет термолабильный белковый токсин Экология. Источником инфекции - больной человек, который выделяет возбудитель в течение 25-45 дней болезни. Наиболее опасны больные стертыми и субклиническими формами и неопознанные бактерионосители. Механизм передачи - воздушно-капельный. Резистентность Попадая в окружающую среду, бордетеллы быстро погибают от воздействия прямых солнечных лучей и высушивания. Кипячения вызывает их гибель в первые секунды. Низкие температуры они также переносят плохо. Дезинфицирующие растворы достаточно быстро инактивируют их. Заболевания у человека. Инкубационный период длится 5-9 дней. Течение болезни делят на три периода: катаральный (2 недели), спазматический или судорожный (4-6 недель) и завершения (2-3 недели). Иммунитет. После перенесения болезни возникает стойкий и длительный иммунитет. Профилактика и лечение применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную (АКДС) вакцину. Первая прививка делается в возрасте 3 месяцев, ревакцинацию - через 1,5-2 года. Лечение проводят протикоклюшним иммуноглобулином и антибиотиками, из которых наиболее эффективны левомицитин, эритромицин, ампициллин и тетрациклин. Туберкулез - инфекционное заболевание, вызванное микобактериями туберкулеза и характеризующееся развитием гранулем в пораженных тканях, полиморфизмом клинических признаков - интоксикационным и / или локальными синдромами. В зависимости от локализации поражений выделяют туберкулез легких, кожи, лимфатических узлов, мозговых оболочек, костей и суставов, органов мочеполовой системы и брюшной полости. Туберкулин Р. Кох в 1890. достал из туберкулезных микобактерий туберкулин. Есть несколько препаратов туберкулина. Старый туберкулин Коха - АТК (Alttuberculin Koch) это фильтрат 5-6 недельной культуры микобактерий в глицериновом бульоне, сгущенном до 1/10 первоначального объема. Новый туберкулин Коха - высушенные микобактерии туберкулеза, растертые в 50% глицерине до образования гомогенной массы. Туберкулин с микобактерий бычьего вида содержит протеины, жирные кислоты, липиды, нейтральные жиры, кристаллический алкоголь. Кроме того, есть препараты туберкулина, свободного от балластных веществ, - PPD (Purified Protein Derivative) и PT (Purificatum Tuberculinum). ППД выпускают в двух формах: сухой очищенный туберкулин по 50000 ТО в ампуле и ППД в стандартном разведении в ампулах по 3 мл. В 0,1 мл раствора содержится одна доза (2 ТО). БЦЖ, полученная А. Кальмет и Герена из ослабленного многолетним пересевом штамма M. bovis. Применяется для активной иммунизации против туберкулеза. Проба Манту. Туберкулиновой пробы Манту является специфическим диагностическим тестом. Его используют для определения инфицированности населения туберкулезом, массового обследования на туберкулез детей и подростков, отбора лиц, которым нужно проводить ревакцинацию, проверить ее эффективность, а также с целью диагностики туберкулеза и определения активности процесса. Для постановки пробы используют туберкулин. Возбудитель туберкулеза Micibacterium tuberculosis Micobacterium bovis Морфология Форма Гр + палочки По Цилю-Нильсену - рубиново-красные (кислото-, щелоче-, спиртоустойчивые) на голубом фоне Спора - Капсула - Подвижность - КУЛЬТИВИРОВАНИЕ Питательные среды Картофельно-глицериновое среду Среды Петрова, Петраньяни, Левенштейна-Йенсена, Школьникова, Сотона Условия Растут медленно - 30 суток Аэробные Культуральные свойства Жидкая среда - образуют толстую морщинистую пленку На плотной среде - R-формы колоний РЕЗИСТЕНТНОСТЬ Устойчивые во внешней среде, в молочных продуктах. Погибают при автоклавировании и под действием УФ-лучей. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Открытая форма туберкулеза: Микроскопический (окраска по Цилю-Нильсену, метод флотации для большей вероятности обнаружения) Бактериологический Биологический (заражение морских свинок при туберкулезе мочеполовой системы) Закрытая форма туберкулеза: Аллергические пробы с туберкулином (Коха, Кальметта, Пирке, Манту) Серологический (РСК) Метод окраски по Цилю-Нильсену. 1. На фиксированный мазок над пламенем горелки накладывают фильтровальную бумажку, наливают на него фуксин Циля и красят трижды подогревая к появлению паров (но не доводя до кипения) после чего препарат с красителем оставляют на 1-2 минуты для охлаждения, сливают краску, снимают бумажку. Промывают водой. 2. Препарат обесцвечивают 5% серной или соляной кислотой до появления желтоватого оттенка (10-30 сек) и несколько раз промывают водой. 3. Дополнительно красят мазок метиленовой синькой Леффлера, промывают водой, высушивают и исследуют под микроскопом. Микроскопическая картина: на общем синем (голубом) фоне кислотоустойчивые бактерии выглядят рубиново-красными. Структура микробиологической диагностики коклюша: - Материал для исследования: слизь из носоглотки и гортани, яки получают метод: «кашлевых пластинок», мокроту, кровь. - Бактериоскопическое исследование: приготовление мазков - препаратов, окраска по методу Грама. - Бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных питательных сред (КУА, Борде-Жангу, кровяной МПА) - изучение подозрительных колоний; мазок, окраска по Грамму; пересев на скошенный агар; посев на углеводный ряд Гисса, среду с тирозином, среду с мочевиной; одновременно проводят РА на стекле со специфической сывороткой. - Серологическое исследование: -РПГА, РСК, РА с сывороткой больного, Структура лабораторной диагностики дифтерии - Материал для исследования: выделение слизистой оболочки зева, носа, конъюнктивы глаза, наружных половых органов; - Бактериоскопическое исследование - приготовление мазков, окраска по Леффлеру, Нейссеру. - Бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных сред (среды Ру, среда Леффлера, среда Клауберга) - Через 8-12 часов инкубации готовят мазки, при отрицательном результате микроскопическое исследование повторяют через 18-24 часа; - Через 24-48 часов изучают колонии, выросшие и подозрительные пересевают на сывороточные среды; - Чистые культуры засевают на «пестрый ряд» Гиса, среду с цистеином и мочевиной; - Биологический метод исследования. -внутрикожное или подкожное введение материала морским свинкам. - Серологическое исследование. - РА или РНГА - Одновременно проводят реакцию РА на стекле со специфической противодифтерийной сывороткой; Методы микробиологической диагностики туберкулеза. Бактериоскопический Бактериологический Биологический Серологический Аллергические пробы
б) Метод микрокультур Посев на цитратной-кровь, на 3-7дней. ↓ Микроскопия (окраска по Цилю-Нильсену) После предыдущей обработки Н2SО4 и отмывания физ. раствором заражают морскую свинку ↓ Макро- и микроскопия органов животного. Материал: сыворотка больного а) РСК б) Реакция непрямой гемагглютинации(РНГА) а) Реакция Моро; б) Реакция Пирке; в) РеакцияМанту. Перечень профилактических и лечебных средств. АД-м-анатоксин (токсин дифтерийный очищенный, адсорбированный с уменьшенным содержанием антигена, жидкий) АДС-анатоксин (токсин дифтерийно-столбнячный очищенный, адсорбированный жидкий) АДС-м анатоксин (токсин дифтерийно-столбнячный очищенный, адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов, жидкий) АКДС-адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина. Тетракок (комбинированная вакцина для профилактики дифтерии коклюша, столбняка и полиомиелита). Сыворотка противодифтерийная, лошадиная, очищенная концентрированная, жидкая. 6. Практические работы, которые выполняются на занятии. I этап. Промикроскопировать демонстрационные препараты из коринебактерий, бордетелл, микобактерий окрашенных по методу Грама, Нейссера, Леффлера, Циля-Нильсена. II этап. Ознакомиться с питательными средами, которые используют для культивирования коринебактерий, микобактерий, бордетелл. III этап. Ознакомиться с методом изучения токсигенности коринебактерий. IV этап. Изучить биопрепараты, используемые для профилактики и специфического лечения дифтерии, коклюша, туберкулеза. V этап. Зарисовать возбудителей и записать методы диагностики, определения токсигенности, микробиологическую диагностику дифтерии, коклюша, туберкулеза. 7. Рекомендованная литература. Седьмой. Основная В.П. Широбоков и пел. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, Новая Книга, Винница, 2011. С. 441-452. К.Д. Пяткина, Ю.С. Кривошиин. - Микробиология. - М., 1992 (рус.), С. 240-243, 286-292 К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - М., 1980 (рус.), С. 301-305, 335-341 А.И. Коротяев, С.А. Бабич. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - Санкт-Петербург. - 2002 (рус.), С. 406-412 И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.Е. Шевелева, - Практическая микробиология. - Харьков, 1999. (рус.), С. 274-279 Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям Под ред.И.Л.Дикого - Харьков, 2004 (рус.), С. 433-440 О.И.Климнюк, И.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков. Практическая микробиология. - Тернополь, 2004 (рус.), С. 257-264 Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рус.) С.171-175 М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед. микробиологии М., 1973 (рус.) с.262-264, 276-283 Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1986. (рус.) С.154-160 7б. Дополнительная Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. проф. К. Палий. - М., 2004. с. 64 8. Материалы для самоконтроля: Тесты: 1. В мазках из материала, взятого от больного с подозрением на дифтерию обнаружены желтые палочки с синими зернами на концах. Какой способ окрашивания использован в данном случае? A Нейссера B Леффлера C Циля- Нильсена D Козловского E Романовского 2. У больного ребенка с подозрением на дифтерию было взято на исследование содержание пораженной слизистой оболочки зева. Приготовленный и окрашенный мазок. При микроскопии обнаружены желтые палочки с темно-синими утолщениями на концах. Структурный элемент микробной клетки определяется в выявленных микроорганизмов? A Зерна волютина B Плазмиды C Капсула D Споры E Жгутики 3. В мазке из налета на миндалинах больного с подозрением на дифтерию выявлено палочки синего цвета с утолщениями на полюсах. Какой метод окраски мазков были использованы? A Леффлера. B Бурри. C Гинса. D Грама. E Нейссера. 4. В связи со случаем дифтерии возникла необходимость провести профилактические прививки в студенческой группе. Препарат следует использовать для создания искусственного активного иммунитета? A дифтерийный анатоксин B антидифтерийную сыворотку C Специфический иммуноглобулин D Вакцина АКДС E Вакцина с убитых бактерий 5. В закрытом коллективе возникла необходимость проверить состояние иммунитета против дифтерии, чтобы обосновать необходимость вакцинации. Какие исследования следует провести с этой целью? A Установить титр антитоксина в РНГА B Проверить членов коллектива на носительство палочки дифтерии C Установить уровень антител против дифтерийной палочки D Проверить медицинскую документацию по вакцинации E Проверить состояние иммунитета от дифтерийной палочки 6. От больного ребенка с подозрением на дифтерию выделено Коринебактерии дифтерии. Какое исследование необходимо провести, чтобы убедиться, что данный микроб является возбудителем дифтерии у этого ребенка? A Проверить токсигенность микроба B Провести окрашивание по методу Бурри - Гинса C Выполнить посев на кровяной агар D Заразить кролика E Провести реакцию агглютинации 7. При обследовании больного ребенка, в которой отмечалось повышение температуры до 38 ° С, боль при глотании, отек лица, адинамия, серо-белые пленки на миндалинах, врач заподозрил дифтерию. Какими микробиологическими методами можно подтвердить диагноз? A Микроскопическим + бактериологическим. B Микроскопическим + аллергологическим C Микроскопическим + серологическим D Аллергологическим + серологическим E Биологическим + серологическим 8. У больного в течении 10 дней имеет место повышенная температура, приступы характерного кашля. Врач назначил посев слизи из носоглотки на среду КУА. Какой микроорганизмы предполагается обнаружить? A Палочку коклюша B палочки iнфлюенцы C Лiстерiю D стафилококки E Клебсiелу 10. Для профилактики детских инфекций у детей используют ассоциированную вакцину АКДС. Укажите тип протикоклюшной вакцины, которая входит в ее состав. A Убитая B атенуированная C Химическая D анатоксин E Генно-инженерная 11. В детскую поликлинику обратилась мать с больным ребенком, у которого наблюдался «Лающий» кашель. Инфекционист поставил диагноз "коклюш". Какой материал для исследования надо взять у ребенка для подтверждения диагноза? A Слизь с задней стенки горла B Кровь C Мочу D Фекалии E Рвотные массы 12. При изучении мокроты, взятой от больного с подозрением на туберкулез, изготовили мазок-препарат и покрасили его по Цилю-Нильсену. Какая микроскопическая картина подтверждает диагноз? A Тонкие бактерии красного цвета B Микроорганизмы с ядром рубиново-красного цвета и голубой цитоплазмой C Красного цвета микроорганизмы с биполярным закраской D Палочковидные микроорганизмы в виде цепочек, фиолетового цвета E Коковидные микроорганизмы красного цвета 13. Больному туберкулезом, в анамнезе которого была открыта легочная форма заболевания, проведения микроскопическое исследование мокроты с целью выявления возбудителя. Какой метод окраски целесообразно использовать при этом? A Метод Циля-Нильсена B Метод Грама C Метод Бурри-Гинса D Метод Романовского-Гимза E Метод Нейссера 13. После введения вакцины БЦЖ младенцам иммунитет к туберкулезу длится до тех пор, пока в организме есть живые бактерии вакцинного штамма. Как наиболее правильно назвать такой вид иммунитета? A Нестерильный B Гуморальный C Типоспецифический D Врожденный E Перекрестный Автор: доцент Кордон Ю.В Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов фармацевтического факультета (специальность - фармация) при подготовке к практическому занятию № 21 1. Тема занятия: Патогенные спирохеты. Трепонемы. Боррелии и лептоспир. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний. 2. Цель занятия: 2а. Общая: Освоить методы лабораторной диагностики сифилиса, лептоспироза и борелиозив. 2б. Конкретная: изучить морфологию и биологические свойства трепонем, лептоспир и боррелий, изучить методы микробиологической диагностики сифилиса, лептоспироза и возвратного тифа, разобрать вопросы специфической и неспецифической профилактики заболеваний.
3.1. Знать таксономическое положение и особенности ультраструктуры спирохет. 3.2. Знать методы окраски спирохет. 3.3. Знать принципы постановки и учета результатов РСК, РНГА. 4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению. 1. Морфология, культуральные свойства и антигенная структура трепонем. 2. Особенности патогенеза сифилиса. 3. Микробиологическая диагностика сифилиса. 4. Морфология и биологические свойства лептоспир. 5. Патогенез лептоспироза 6. Лабораторная диагностика и профилактика лептоспироза. 7. Морфология и биологические свойства боррелий. 8. Патогенез эпидемического возвратного тифа. 9. Лабораторная диагностика и профилактика эпидемического возвратного тифа. 10. Возбудитель эндемического возвратного тифа, патогенез, лабораторная диагностика, профилактика заболевания.
Treponema pallidum - тонкие микроорганизмы спиралевидной формы с 12-14 равномерными завитками. Характерны все виды движения, движения плавные, медленные ("висящая капля"). Под влиянием неблагоприятных факторов (антибиотикотерапия) в организме человека могут образовывать цисты, зернистые формы и L-формы Особенности культивирования. НЕ культивируются или плохо культивируются на искусственных питательных средах. Растет очень медленно. При культивировании теряют типичную АГ структуру и патогенность. Культивируют in vivo при экспериментальном заражении кроликов в яичко (тканевые трепонемы - штамм Nicols). Используют для постановки РИБТ и создание диагностикумов. Факторы патогенности: Эндотоксин. Перекрестно-реагирующие антигены. Источник инфекции - больной человек. Особенно заразны больные первичный и вторичный сифилис (первые 3-5 лет после инфицирования) Механизмы передачи: Контактный - половой контакт или реже непосредственный контакт (сифилис акушеров). Парентерально. Вертикальный (инфицирование плода через плаценту - врожденный сифилис) Инкубационный период при половом контакте 2-10 недель (в среднем 3-4 недели) Патогенез сифилиса Первичный сифилис Триада: шанкр, лимфангит, лимфаденит - первичный сифилис (продолжительность 1,5-2 мес) Вторичный сифилис - генерализация процесса. Клинически - кожная сыпь, поражение внутренних органов и периферической нервной системы. Рецидивирующее течение. Продолжительность до 2-4 лет. Третичный сифилис (поздний) наступает после длительного бессимптомного течения. Появление очагов специфического продуктивного воспаления во внутренних органах (сифилитические гуммы). Поражается аорта, печень, ЦНС, кости, хрящевые ткани Врожденный сифилис - нет проявлений первичного сифилиса; поражаются внутренние органы и кости Иммунитет. Нестерильный. Напряженный. Преимущественно клеточный. Возможны случаи суперинфекции (при повторном заражении фоне заболевания не образуется шанкр, но более ярко проявляются клинические симптомы той стадии, на которой произошло заражение) Лабораторная диагностика зависит от стадии заболевания: При раннем серонегативном сифилисе (первые 2 недели заболевания) - микроскопический метод Все остальные стадии - серологический метод Микроскопический метод Материал для исследования: соскоб с шанкра, пунктат лимфатических узлов, жидкость из элементов сыпи. - Нативная микроскопия - РИФ
- Окраска по Романовскому-Гимзе, контрастности по Бури, серебрения Морозовым Серологический метод Осадочные неспецифические серореакции (микропреципитации) для выявления реагинов с помощью кардиолипинового Ач - реакции Кана, Закса-Витебского, цитохолева, Реакция Вассермана (RW) - специфическая - РСК с тремя антигенами: кардиолипиновым Аг, Аг культуральных трепонем и Аг тканевых трепонем РНИФ, РИБТ - высокоспецифичны (положительные даже в первые недели заболевания) - используют для диагностики врожденного сифилиса, поздних стадий и скрытых форм
Культивирование. Лептоспиры - хемоорганотрофы, облигатные аэробы, растут при температуре 28-29 ° С в жидких и полужидких питательных средах. Рост обнаруживают при просмотре капли среды в темном поле: среда не мутнеет. Антигенная структура. Патогенных лептоспир входят 19 серогруппы и более 200 сероваров. Токсинообразование. Лептоспиры не продуцирующие экзотоксин. Токсичные вещества есть только у живых лептоспир, которые паразитируют в организме человека и животных. Резистентность. В воде лептоспир выживают 5-10 суток, в почве -2 суток. В пищевых продуктах (молоко, сливочное масло, хлеб и др.) Жизнеспособность лептоспир не превышает нескольких часов. Лептоспиры долго хранятся при низкой температуре, очень чувствительны к высыханию, действию кислот, при температуре 56ºС погибают через 30 мин. Патогенность для животных. В очагах лептоспироза наибольшее эпидемиологическое значение имеют хомяки, мыши, крысы и др., которые выделяют лептоспир во внешнюю среду с мочой и испражнениями. Патогенез. Лептоспирозом человек заражается через воду, инфицированную больными животными или носителями лептоспир (купание, питье воды, выполнения различных работ в водоемах), при уходе за больным скотом. Инкубационный период - 5-6 суток. Желтуха бывает примерно у 10% больных. Большое значение в патогенезе лептоспироза имеет состояние бактериемии, которая развивается с первых дней заболевания. Под воздействием токсических веществ, образующихся в результате распада лептоспир, развиваются паренхиматозное и жировое перерождение печени, возникают очаговые кровоизлияния в селезенке и явления геморрагического нефрита. Иммунитет. После перенесенного заболевания возникает стойкий специфический иммунитет, механизм которого связан с наличием антител. Лабораторная диагностика включает прямую бактериоскопию в темном поле раздавленной капли цитратной крови, спинномозговой жидкости, мочи, взвеси органов трупов и выделения гемо- и уринокультуры. Следующим этапом исследования является проведение реакции микроагглютинации с сывороткой крови больного или выздоравливающего и живой культурой эталонных штаммов лептоспир различных серогрупп. Применяют РСК и биологическую пробу - заражение молодой морских свинок кровью больного (3-5 мл внутрибрюшинно). Через 2-3 суток после заражения исследуют экссудат брюшной полости морской свинки на наличие лептоспир (микроскопия в темном поле и посева на питательные среды). Биологическая проба является самым ранним методом лабораторной диагностики лептоспироза. Лечение. Больным лептоспирозом назначают пенициллин, тетрациклин, противолептоспирозный глобулин и дезинтоксикационные средства (глюкоза, препараты крови). Профилактика. Следует не допускать контактов людей с зараженной водой (запрет купания, использование для питья и бытовых нужд некипяченой воды и др.). Для ликвидации природных очагов лептоспироза применяют осушения болот и другие мелиоративные мероприятия. В сельских очагах лептоспироза осуществляющих оздоровление животных. Среди населения ведут санитарно-просветительную работу, упорядочивают места для забора воды, купание людей и животных и тому подобное. Лептоспирозная вакцина - взвесью убитых нагреванием лептоспир нескольких серологических групп. Выделяют эпидемический возвратный тиф, передаваемой вшами, и эндемический, при котором переносчиками являются клещи. Возбудители возвратного тифа - боррелии (Воrrelia) отличаются от трепонем наличием крупных пологих неравномерных завитков, количество которых колеблется от 6 до 10. Эпидемический возвратный тиф вызывается В. recurrentis. Возбудителем эндемического (клещевого) возвратного тифа могут быть различные виды патогенных боррелий - В. duttoni, В. persica, В. саucasica и др. Морфология. Боррелии эпидемического возвратного тифа - тонкие спиралевидные микроорганизмы длиной 8-18 мкм и шириной 0,3-0,6 мкм, имеют 3-8 завитков; конце боррелий заостренные. Боррелии эпидемического возвратного тифа подвижные, грамотрицательные, окрашиваются по методу Романовского - Гимза в сине-фиолетовый цвет. Культивирования. Возбудитель выращивают в анаэробных условиях на питательных средах с рН 7,2-7,4, содержащих сыворотку крови, кусочки тканей или органов, и в куриных эмбрионах. Резистентность. При комнатной температуре в жидких средах (в запаянных стеклянных трубках) возбудитель возвратного тифа хранится 14 суток, при замораживании - 8, при температуре 0 ° С - 3 суток. От действия температуры 45-48 ° С возбудитель погибает в течение 30 мин. Патогенность для животных. В естественных условиях животные на возвратный тиф не болеют. Патогенез. Источник инфекции - больной эпидемическим возвратным тифом человек, переносчик платяная вошь. При кровососании боррелии попадают в кишечник вши, размножаются они в гемолимфе. Через 5-12 суток вошь при укусе может инфицировать человека. В организм человека боррелии проникают в результате втирания гемолимфы раздавленных вшей. Эпидемический возвратный тиф чаще всего возникает в зимнее время года. Возбудитель возвратного тифа размножается в тканях лимфоидно-макрофагальной системы. К концу инкубационного периода он проникает в большом количестве в кровь, где под влиянием ее бактерицидных веществ частично погибает. Эндотоксина, образующегося обусловливает поражение центральной нервной системы, развитие токсикоза, лихорадки, функциональных нарушений, дистрофии органов и тканей. Эндотоксина поражает кровеносную систему, способствует развитию инфарктов и некрозов в селезенке и печени. Размножение новой разновидности боррелий приводит очередные приступы заболевания, количество которых колеблется от 3 до 5. Иммунитет нестойкий и непродолжителен. Лабораторная диагностика. Для выявления возбудителя заболевания исследуют толстую каплю и мазки крови, взятые во время приступа (окраска по методу Романовского - Гимза, фуксином, по Бурри). Капли крови изучают в темном поле для определения подвижности боррелий. В период апирексии боррелий определяют методом обогащения крови больного. В период апирексии можно ставить серологическую пробу. Для дифференциации эпидемического и эндемического возвратного тифа используют биологический метод: морской свинке вводят 3-5 мл крови больного; при наличии эпидемического возвратного тифа животное не заболеет. Лечение заключается в назначении антибиотиков - пенициллина, левомицетина, эритромицина, полусинтетических препаратов тетрациклина. Профилактика. Повышение материального и культурного уровня жизни населения, своевременная диагностика заболевания, госпитализация больных, медицинское наблюдение за очагами. Возбудитель эндемического возвратного тифа. Морфология. Боррелии эндемического возвратного тифа похожи на возбудителей эпидемического возвратного тифа. Культивирование проводят в среде, состоит из нагретой до 56-58 ° С сыворотки крови кролика и одинакового объема изотонического раствора натрия хлорида с кусочками свернувшегося белка куриного яйца. Антигенная структура. Известно несколько вариантов боррелий, патогенных для человека и животных. Дифференциация их по серологическими свойствами и морфологическими признаками невозможна; более результативный в этом отношении биологический метод. Резистентность. В возбудителей эндемического возвратного тифа резистентность почти такая же, как и в боррелий эпидемического возвратного. Патогенность для животных. В природных условиях, возбудители эндемического возвратного тифа паразитируют в организме диких грызунов и насекомоядных, от которых они попадают в организм клещей. Патогенез заболевания у человека. По патогенезу и клинической картиной заболевания похоже на эпидемический возвратный тиф. Случается заболеваемость эндемический возвратный тиф в Средней Азии, Закавказье, на Северном Кавказе, в Казахстане, Херсонской области. Чаще всего возникает в теплое время года, преимущественно весной. Клещи паразитируют на грызунах, которые становятся источником инфекции. Проникновение боррелий в яйцеводы и яйца клещей предопределяет возможность трансовариальной передачи возбудителя. Зараженность клеща сохраняется в течение всей его жизни (более 10 лет). Человек заражается при укусе клеща. На месте укуса образуется папула (первичный аффект). Заболевание характеризуется приступами лихорадки продолжительностью 1-2 суток; количество приступов может быть 5-7-9 и более, продолжительность ремиссий - от нескольких часов до 6-8 суток. Иммунитет. У населения эндемичных районов иммунитет возникает в раннем детстве, о чем свидетельствует обнаружение антител в сыворотке крови местных жителей. Болеют главным образом приезжие. Лабораторная диагностика. Делают бактериоскопию толстой капли и мазков крови для выявления боррелий. Лечение. Больным назначают ампициллин, левомицетин, полусинтетические препараты тетдациклину. Профилактика заключается в осуществлении мер по уничтожению клещей и грызунов, ранней диагностике заболевания, госпитализации больных и соблюдении личной профилактики (защита людей от нападения клещей).
Граф логической структуры микробиологической диагностики сифилиса. 1. Микроскопия (нативный и фиксированный материал) - Нативная микроскопия - РИФ
- Окраска по Романовскому-Гимзе, контрастности по Бури, серебрения Морозовым 2. Серологическая диагностика - Иммуноферментный анализ (ИФА) - Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) - Реакция Вассермана - Осадочные реакции (Кана и Закса-Витебского) - Реакции иммобилизации бледной трепонемы (РИБТ) - Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) 3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Материал для исследования: спинномозговая жидкость. Кровь. Моча. Вода. Первый этап - микроскопическое исследование (нативный препарат для микроскопии в темном поле) Предварительный ответ. - Посев материала на водно-сывороточную питательную среду. - Заражение кроликов или морских свинок. - Реакция агглютинации - лизиса с сывороткой крови. - Второй этап. - Изготовление препаратов из посевов на питательной среде для микроскопии в темном поле - Реакция агглютинации - лизиса выделенной культуры с диагностическими сыворотками. - Микроскопическое и бактериологическое исследование материала от зараженных лабораторных животных. - Заключительный ответ.
- Материал для исследования: кровь. - 1 этап - мазок; окрашенный фуксином. - Препарат "толстая капля" окрашен по Романовскому - Гимзе - Биопроба - заражение морских свинок. - 2 этап - мазок из крови морской свинки окрашенный фуксином - Препарат "толстая капля" окрашен по Романовскому - Гимзе - Заключительный ответ 6. Практические работы, которые выполняются на занятии 1. Изучить морфологию трепонем в демонстрационных препаратах окрашенных по Романовскому-Гимза, Бурри и Морозову. 2. Учесть результаты реакции Вассермана с исследуемой сывороткой. Для выполнения реакции Вассермана получают сыворотку крови, инактивируют на водяной нагреватели при 56ºС 30 мин и разливают в 4 пробирки. Используется в реакции Вассермана: 1) специфический антиген, который содержит антигены возбудителя - разрушены ультразвуком трепонемы; 2) неспецифический антиген - липоидный экстракт из бычьего сердца с лецитином и холестерином - кардиолипидний антиген; 3) неспецифический антиген - спиртовой экстракт липоидов с мышц сердца быка с холестерином.
Примечание: Г гемолиза не существует; + Г гемолиз; + Положительный результат; - Отрицательный результат. Учет результатов проводится после наступления гемолиза во всех контролях. У 50% больных реакция становится + после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса 75-90% положительных реакций. После лечения реакция Вассермана отрицательная. 3. Изучить морфологию лептоспир в демонстрационных препаратах, окрашенных серебрением по Морозову. В поле зрения видно: темно-коричневые нитевидные микроорганизмы в виде букв S или C, с вторичными завитками на желтом фоне. Нарисовать препарат. На рисунке обозначить: лептоспир. 4. Изучить морфологию боррелий в препаратах «толстая капля» окрашенных по Романовскому - Гимзе. В поле зрения видно: боррелии - тонкие, длинные, извилистые нити с неравномерными завитками и заостренными концами, окрашенные в сине-фиолетовый цвет, расположены внеклеточно. Величина их в несколько раз превышает диаметр лейкоцитов. Нарисовать: эритроциты, лейкоциты и боррелии. На рисунке обозначить: боррелии. 5. Поставить реакцию коагглютинации на стекле с материалом от больного лептоспирозом и антителами, которые адсорбированные на стафилококковые. На предметное стекло пипеткой наносят каплю исследуемого материала и каплю Со-диагностикума. Бактериологической петлей смешивают компоненты реакции. Через три минуты учитывают результат. Положительный результат - просветления жидкости с образованием белых хлопьев. Учет проводят на темном фоне. 6. Учесть результаты РСК с целью выявления специфических антител к лептоспир в сыворотке больного.
7. Ознакомиться с биопрепаратами, которые применяют для профилактики лептоспироза. Убитая поливалентная вакцина, которую вводят двукратно с интервалом в 7 дней. Ревакцинация проводится через год – однократно. 7. Рекомендованная литература. 7а. Основная К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.358-363 А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос) с.483-485.488-490. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос) с.297-309 Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004 (рос) с.446-455 Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.224-229 М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед.микробиологии. М.1973 (рос) с.249-298 Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.171-177
1. Что можно сказать о специфической профилактике сифилиса? А. Не разработана. В. Живая вакцина. С. Убитая вакцина. Д. Химиопрофилактика. Е. Иммунная сыворотка
А. В первый (первичная сифилома). В. В инкубационный. С. Во второй (генерализованный). Д. В третий (Гуммозный) Е. В четвертый (нейросифилис) 3. Возвратный тиф характеризуется периодическими приступами и периодами ремиссии. Какой материал надо брать от больного для диагностики во время ремиссии? А. Мочу. В. Кровь. С. Сыворотку крови. Д. Стул. Е. Мазок из зева 4. Лептоспиры достаточно требовательны относительно культивирования. Они аэробные и требуют специальных питательных сред. Какие вещества необходимы для их роста и размножения? А. Углеводы. В. Спирты. С. Сыворотка крови. Д. Крохмал. Е. Кровь. 5. Во время приступа возвратного тифа у больного повышается температура до 40° С. Чем обусловлена такая реакция организма? А. Действием экзотоксина. В. Действием эндотоксина. С. Действием антигенов. Д. Продуктами разрушения клеток. Е. воспалительной реакции. Автор: ассистент Гончар О.О. Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов фармацевтического факультета (специальность – фармация) при подготовке к практическому занятию №22 1.Тема занятия: Грибы рода Candida, плесневые грибы, дерматомицеты. Морфология, биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний. 2. Цель занятия: 2а. Общая: Усвоить морфологические особенности условно-патогенных грибов. 2б. Конкретная: Уметь промикроскопировать патологический материал и оценить результаты серологических реакций с целью диагностики заболеваний вызванных кандидами, плесневыми грибами и дерматомицетами.
3. Методы исследования морфологии грибов. 4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению. 1. Морфология, тинкториальные особенности грибов рода Candida 2. Микробиологическая диагностика кандидозов. 3. Профилактика и принципы лечения заболеваний, вызванных кандидами. 4. Биологические свойства возбудителей трихофитии 5. Биологические свойства возбудителей микроспории 6. Биологические свойства возбудителей епидермофитии. 7. Общая характеристика инфекционного процесса вызванного патогенными дерматомицетами. 8. Биологические свойства грибов рода Mucor. 9. Биологические свойства грибов рода Penicillum. 10. Биологические свойства грибов рода Aspergillus. 11. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызванных грибами. 5. Содержание темы Кандидоз - оппортунистическое инфекционное заболевание кожи, слизистых оболочек и внутренних органов. Встречается повсеместно, чаще всего, как осложнение после многих инфекционных заболеваний, при иммунодефицитных состояниях. Грибы рода Candida (кандида) вызывают поверхностный, инвазивный и другие формы кандидоза (кандидомикоза). Насчитывается около 200 видов грибов рода Candida. Ведущее значение в развитии кандидоза имеет С. albicans, затем следуют С. glabrata, С. tropicali и С. parapsilosis.
жүктеу/скачать 0.56 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||