Методичні рекомендації для самостійної роботи студентів при підготовці до практичного заняття
жүктеу/скачать 0.56 Mb.
|
| МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я УКРАЇНИ
Вінницький національний медичний університет імені М.І.Пирогова
ЗАТВЕРДЖЕНО на методичній нараді кафедри ____мікробіології___ (назва кафедри)
проф. Г.К.Палій «_____»____________2015 р. МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ ДЛЯ САМОСТІЙНОЇ РОБОТИ СТУДЕНТІВ ПРИ ПІДГОТОВЦІ ДО ПРАКТИЧНОГО ЗАНЯТТЯ З_мікробіології з основами імунології_ (назва навчальної дисципліни)
(назва факультету) Вінниця – 2015
1. Уметь распознать патогенные кокки по морфологическим признакам в препаратах, изготовленных из патологического материала. 2. Уметь выбрать метод лабораторной диагностики заболеваний, вызванных патогенными кокками. 3. Уметь обосновать принципы этиотропной терапии стрептококковых, стафилококковых инфекций; гонореи, эпидемического цереброспинального менингита. 4. Предложить мероприятия по профилактике инфекций, вызванных патогенными кокками.
1. Морфологические особенности стафилококков, стрептококков, диплококков. 2. Ферменты патогенности бактерий. 3. Бактериальная капсула, функции. 4. Этапы бактериологического метода исследования. 5. Методы определения чувствительности к антибиотикам. 4.Основные теоретические вопросы, которые подлежат изучению.
Стафилококки(Staphylococcus). Морфология. Стафилококки имеют правильную круглую форму размером 0,5 - 1,5 мкм. В мазках размещаются в виде неправильных скоплений, которые напоминают гроздья винограда. Стафилококки грамм - позитивные бактерии, неподвижные, не образуют споры, отдельные виды в организме имеют нежную капсулу. Физиология. Стафилококки – факультативные анаэробы, лучше растут в аэробных условиях. На МПА колонии правильной круглой формы, выпуклые, непрозрачные, с гладкой, блестящей поверхностью, окрашенные в золотистый, палевый, белый, лимонно-желтый цвет в зависимости от цвета пигмента. На кровяном агаре колонии окружены зоной гемолиза. В МПБ вызывают помутнение и осадок на дне. Стафилококки культивируют на питательных средах с 7-10 % хлорида натрия. Стафилококки выделяют протеолитические и сахаролитические ферменты. Они разрежают желатин, вызывают створаживание молока, ферментируют ряд углеводов с выделением кислоты. Токсинообразование. Стафилококки, особенно Staphylococcus aureus, выделяют экзотоксины и много «ферментов агрессии», которые имеют важное значение в развитии стафилококковых инфекций. Описывают много вариантов гемотоксинов, лейкоцидинов, некротоксинов, летальный токсин. Лейкоцидины разрушают лейкоциты, макрофаги и др.клетки, а в небольших концентрациях угнетают фагоцитоз. Некротоксин вызывает некроз кожи, а летальный токсин при внутривенном введении вызывает практически моментальную смерть. Золотистые стафилококки продуцируют эксфолиатины, которые вызывают импетиго детей и пузырчатку новорожденных. Отдельные виды способны выделять энтеротоксины, которые специфически действуют на энтероциты кишечника, что приводит к возникновению пищевых токсикоинфекций и энтероколитов. В патогенном действии стафилококков важное значение отводится также ферментам агрессии: плазмокоагулазе, лецитиназе, фибриназе, ДНКазе, гиалуронидазе, протеиназе, липазе, желатиназе, фосфатазе и др. Их наличие является стабильным признаком отдельных видов, поэтому их определение имеет важное значение при дифференциации стафилококков. Важное значение в проявлении патогенности играет белок А, который способен реагировать с IgG. Комплекс белок А+IgG инактивирует комплемент, ухудшает фагоцитоз, вызывает повреждение фагоцитов. Род Staphylococcus включает 29 видов, но далеко не все они вызывают заболевания у человека. Основными видами являются S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus. Экология. Главными биотопами стафилококков в организме хазяина являются кожа, слизистые оболочки, кишечник. Они входят в состав нормальной микрофлоры тела человека. При возникновении стафилококковых инфекций могут поражаться различные органы и системы организма человека. При контакте с больными может формироваться резидентное стафилококковое бактерионосительство, когда постоянным их местом жительства становится слизистая оболочка полости носа. Такое носительство особенно опасно среди медицинского персонала больниц, поскольку носители могут стать источником внутригоспитальных инфекций. Стафилококки достаточно устойчивы в окружающей среде. При комнатной температуре они выживают на предметах ухода за больными в течение 1-2 месяцев. При кипячении погибают моментально, при 70-80 °С - через 30 мин. Раствор хлорамина (1 %) вызывает их гибель через 2-5 мин.
Иммунитет. Врожденной невосприимчивости к стафилококкам у людей нет, однако резистентность к ним довольно высокая. В результате перенесенной инфекции развивается антибактериальный и антитоксический иммунитет, но он кратковременный. Лабораторная диагностика. Материалом для исследования является кровь, гной, слизь, моча, промывные воды желудка, фекалии, остатки пищевых продуктов. Гной исследуют бактериоскопическим и бактериологическим методами, остальной материал – бактериологическим. Для определения источника инфекции,при вспышках стафилококковых инфекций в родильных домах и хирургических стационарах проводят фаготипирование выделенных штаммов с помощью стандартного международного набора стафилококковых бактериофагов. Обязательно определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам с целью назначения рационального антибактериального лечения. Профилактика и лечение. Предупреждение возникновения и распространения стафилококковых инфекций направлено на обнаружение и лечение носителей золотистого стафилококка особенно среди персонала родильных домов, хирургических и детских отделений больниц. Необходимо четко придерживаться санитарного режима работы, стерилизации, систематически проводить дезинфекцию. При лечении острых стафилококковых инфекций назначают антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны, местно используют антисептики (мирамистин, декасан). Выбор препарата зависит от результатов определения чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. Для лечения тяжелых стафилококковых инфекций используют иммунологические препараты: стафилококковый иммуноглобулин, гипериммунную плазму. Для лечения хронических инфекций используют аутовакцины. Стрептококки относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus. Основные виды, которые вызывают заболевания человека S.pyogenes, S.pneumoniae, S.mitis, S.agalactiae. Семейство также включает род Enterococcus, к которому относятся условно-патогенные виды, населяющие ЖКТ, и при определенных условиях вызывают гнойно-воспалительные процессы в органах брюшной полости, как правило, в ассоциации с другими микроорганизмами. Наиболее распространённые виды: E.faecalis, E.faecium, E.durans. Морфология стрептококков: Грамм (+) кокки сферической, овальной или ланцетовидной формы (S.pneumoniae), размерами 0,5-2 мкм, неподвижные, не образуют спор. Патогенные представители образуют капсулу (S.pneumoniae, S.pyogenes) в организме человека и животных. В мазках-препаратах располагаются попарно, в виде коротких или длинных цепочек. Культуральные свойства: факультативные анаэробы, оптимальная температура культивирования 370C, требовательны к составу питательных сред. Культивируют в бульоне с глюкозой (S.pyogenes образует придонно-пристеночный рост), на кровяном агаре. В зависимости от типа гемолизинов, которые синтезируются стрептококками различают альфа-гемолиттические (неполный гемолиз), бета-гемолитические (полный гемолиз), гамма-гемолитические (отсутствие гемолиза при аэробных условиях). Для дифференциации альфа-гемолитических стрептококков и энтерококков используют желчный бульон, в котором культивируются только представители рода Enterococcus. На плотных питательных средах стрептококки образуют, как правило, S – формы колоний. Кроме классификации по гемолитическим свойствам стрептококки также классифицируют по антигенному строению (по Ленсфилд). В зависимости от строения С-полисахарида стрептококки делят на серогруппы (А-V); внутри группы различают серотипы на основании строения типоспецифических антигенов (М, T,R,Р). S.pyogenes содержит в составе клеточной стенки перекрестно-реагирующие антигены, которые сходны по строению с тканями щитовидной железы, кожи, почек, соединительной тканью сердечных клапанов. Резистентность: стрептококки малочувствительны к низким температурам, высушиванию, чувствительные к высоким температурам, большинству дезинфектантов в рабочих концентрациях. Факторами патогенности бета-гемолитического стрептококка являются поверхностный протективный белок М, капсула, ферменты патогенности ( С5а-пептидаза, гиалуронидаза, стрептокиназа (фибринолизин), ДНК-аза (стрептодорназа), аминопептидаза) и экзотоксины (0 и S – стрептолизины, эритрогенин (скарлатинозный токсин), кардиогепатотоксин). Большое значение в патогенезе стрептококковых инфекций играют перекрестно-реагирующие антигены, суперантигены, аллергены. Эпидемиология и патогенез: источником инфекции является больной человек и бактерионоситель. Пути заражения – контактный и аэрогенный. Стрептококки вызывают гнойно-воспалительные заболевания различной локализации, скарлатину, рожу, ревматизм. Иммунитет: нестойкий, типоспецифический – для большинства стрептококковых инфекций; стойкий, антитоксический – после перенесенной скарлатины. Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются гной, раневое содержимое, экссудат, слизь из носоглотки, налет с миндалин, кровь, ликвор, мокрота. Используют бактериоскопический и бактериологический методы. Для диагностики хронических и аутоиммунных инфекций для исследования берут кровь с целью обнаружения антистрептококковых антител. Профилактика и лечение: профилактику проводят неспецифическими методами; для профилактики пневмококковой инфекции используют пневмококковую вакцину, содержащую капсульный полисахарид. Для лечения назначают антибиотики согласно результатам антибитикограммы. Для профилактики ревматизма при частых ангинах профилактически назначают бета-лактамные антибиотики (пенициллины).
Эпидемиология. Источник инфекции - больные люди, бактерионосители. Механизм передачи - аэрогенный, путь - воздушно-капельный. Заболевание носит сезонный характер, увеличиваясь в осенне-зимний период. Менингококковая инфекция клинически протекает в локализованной форме (менингококконоситель, острый назофарингит) или в генерализованной форме (менингококцемия, менингит, менингоэнцефалит). Эпидемический цереброспинальный менингит характеризуется высокой температурой, головной болью, рвотой, судорогами, ригидностью мышц затылка. Без специфического лечения летальность до 85%. Постинфекционный иммунитет стойкий, длительный, напряженный. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции. Материал для исследования - спинномозговая жидкость, слизь из носоглотки, кровь. Проводят бактериоскопическое исследование спинномозговой жидкости, бактериологическое исследование с последующей идентификацией выделенной чистой культуры менингококка. Выявление в сыворотке больного специфических антител в реакциях РНГА, ИФА проводят с целью диагностики носительства патогенного менингококка. Используют также молекулярно-генетические исследования в ПЦР для выявления менингококковой ДНК в ликворе. Профилактируются заболевания введением вакцины "Меннинго-А+С" по эпидпоказаниям. Лечение проводят антибиотиками пенициллинового ряда (бензилпенициллин, ампициллин, оксациллин) или рифампицином. Гононкокк. Гонококки - неподвижные аспорогенные грамотрицательные диплококки размером 1,0-1,25 мкм, образующие капсулу. Клетки гонококка имеют несколько удлиняющуюся форму, которая напоминает форму боба или кофейного зерна. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зеленым и др.). В гнойном экссудате при гонорее расположены преимущественно в цитоплазме нейтрофилов - явление незавершенного фагоцитоза. Под действием пенициллина образуются L-формы. Культивируются на кровяном, сывороточном, асцитном агаре и среде КДС-1 (казеиново-дрожжевое сывороточное). Колонии или мутные бесцветные, или прозрачные в виде капель росы. Расщепляют только глюкозу до кислоты. Содержат соматический и капсульный антигены. Выделяют 16 серотипов. К факторам патогенности относятся: пили, капсула, эндотоксин, белки поверхностной мембраны. Малоустойчивы во внешней среде. Чувствительны к действию антисептиков и дезинфектантов. Источник инфекции - больной человек. Механизм передачи - контактный, путь - половой. К гонококкам очень высокая восприимчивость. Проявляется гонококковая инфекция в виде воспаления слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивит глаз (бленнорея). Характеризуется заболевание выделением гноя из уретры, резью при мочеиспускании. Нелеченная гонорея переходит в хроническую бессимптомную форму. Нелеченная бленнорея ведет к слепоте. Иммунитет отсутствует, регистрируются повторные заболевания (реинфекция). Лабораторная диагностика острой гонореи состоит в бактериоскопическом бактериологическом исследовании гнойных выделений из уретры, определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. Диагностика хронической гонореи осуществляется серологическим методом (выявление антител в сыворотке крови в реакциях РСК (Борде-Жангу), РНГА, ИФА). Профилактика неспецифическая: выявление источника инфекции, лечение больных, санитарно-просветительная работа, направленная на пропоганду здорового образа жизни. Для профилактики бленнореи новорожденным в глаза капают нитрат серебра или препарат изготовленный на основе отечественного антисептика декаметоксина. Лечение проводят антибиотиками пенициллинового ряда (острая форма) или применяют иммунотерапию (хроническая форма).
- на агаре Чистовича колонии S.aureus окружены зоной помутнения с радужным венчиком вследствие расщепления лецитина ферментом лецитевителазой; - на кровяном агаре колонии окружены прозрачной зоной гемолиза. 6.4. Изучить рост стрептококков на питательных средах (кровяной агар, глюкозный МПБ) и выявить тип гемолиза стрептококковой культуры. 6.5. Учесть результаты опыта фаготипирования культуры стафилококка, определить фаготип. Результат оценивают по наличию пятна лизиса (негативные колонии фага) в определенном секторе с номером соответствующего фага. 6.6 Определить чувствительность клинического штамма стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков. Результаты антибиотикограммы внести в протокол. Критерии чувствительности: зона задержки роста 20 мм и больше – культура чувствительна к антибиотику; умеренно-чувствительна – диаметр зоны – 15-20 мм; устойчива – диаметр зоны до 15 мм. 6.7. Провести учет РСК с сывороткой крови больного гонореей. Результаты внести в протокол. Серологическую диагностику гонореи осуществляют, в основном, при ее хроническом течении. РСК Борде-Жангу имеет важное значение при особо осложненных формах гонореи (гоносепсис, метрит, артрит и т.д.). РСК оценивают по четырехплюсовой системе: резко положительная, полная задержка гемолиза (++++); положительная - надосадочная жидкость бледно-розового цвета, незначительный осадок эритроцитов (+++); реакция на два и один плюс - переставляется; полный гемолиз, жидкость красная и прозрачная "лаковая кровь" - РСК отрицательная (-). 7.Рекомендованная литература. 7а. Основная: В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. – Микробиология. – М. 1983 (рус.). – с.253 – 266. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев – Медицинская микробиология и вирусология. – Санкт-Петербург, 2002 (рус.). – с. 330-341. И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. – Микробиология. – Харьков, 1999 (рус.). – с. 214-220. В.И. Покровский. – Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). – с. 183-206. Л.П. Борисов. – Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М. 1984 (рус.). – с. 131-141, 152-153. М.Н Лебедева. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М. 1973 (рус.). с. 158-176. Ю.С. Кривошеин. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М. 1986 (рус.). – с. 86-92. 7б.Дополнительная: Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146. 8.Материалы для самоконтроля. Тесты лицензионного экзамена Крок-1 1. Больному поставлен диагноз "гонорея" на основании изучения окрашенных мазков из гноя уретры. Как называется использованный метод диагностики? A Бактериоскопический B Бактериологический C Аллергический D Биологический E Серологический 2. В окрашенных мазках, приготовленных из гноя, обнаружены грамположительные кокки, расположенные в виде неправильных скоплений: "Гроздьев винограда". С чем связано такое расположение стафилококков? A С техникой окрашивания B С техникой приготовления мазка C С делением бактерий в разных плоскостях D С влиянием на бактерии красителей E Локализацией гнойного процесса 3. В мазке, приготовленном из гноя больного с гнойно- воспалительным процессом костей выявлены грамположительные шаровидной формы бактерии, которые расположены в виде цепочек. Какие бактерии можно считать возбудителем заболевания? A Сарцины B Гонококки C Менингококки D Микрококки E Стрептококки 4. Работников аптеки необходимо проверить на носительство золотистого стафилококка. С этой целью были взяты мазки из носоглотки для бактериологического исследования. Какую питательную среду целесообразно использовать для его выделения? A Мясо- пептонный агар B Казеиново- угольный агар C Желточно-солевой агар D Сахарный бульон E Селенитовый бульон 5. В бактериологической лаборатории при микроскопии гнойного отделяемого из фурункула в окрашенных по Грамму мазках обнаружены грамположительные, шаровидной формы микроорганизмы в виде виноградной грозди. Какие это микроорганизмы?
6. При изучении мазков, приготовленных из гноя уретры больного, обнаружены грамотрицательные диплококки бобовидной формы, расположенные внутри лейкоцитов. Поставлен диагноз "острая гонорея". Какой метод лабораторной диагностики был использован?
7. У больного остеомиелитом в мазках из гноя выявили грамположительные микроорганизмы шаровидной формы, которые расположены в виде неправильных скоплений. Какие микроорганизмы могли вызывать это заболевание? A Staphylococcus aureus B Serratia marcescens C Salmonella typhimurium D Escherichia coli E Pseudomonas aeruginosa 8. У женщины после родов выделен патогенный стафилококк и определена его чувствительность к антибиотикам. Какой метод использован для этой цели? A Бактериоскопический метод B Метод "бумажных" дисков C Серологический метод D Биологический метод E Серологический метод 9. В инфекционную клинику повторно поступил больной с диагнозом "гонорея", недавно уже перенесший эту инфекцию и выписанный с диагнозом "практически здоров". Какая форма инфекционного процесса наблюдается у него?
10. Для диагностики менингита исследуют мазки из осадка спинномозговой жидкости, окрашенные по методу Грамма. Какие из обнаруженных признаков подтверждают диагноз менингококковой инфекции? A Грамотрицательные диплококки, размещенные в лейкоцитах и за их пределами B Грамположительные диплококки, размещенные в лейкоцитах C Грамотрицательные коккобактерии, размещенные в лейкоцитах D Ланцетовидные грамположительные диплококки E Диплококки, окруженные капсулой 11. При исследовании микропрепарата, изготовленного из мокроты больного пневмонией, выявлены грамположительные капсульные диплококки ланцетовидной формы. Какой это микроорганизм? A Стафилококк B Менингококк C Пневмококк D Гонококк E Энтерококк 12. В детском саду выявлена вспышка пищевой токсикоинфекции после употребления детьми кондитерских изделий. Среди большинства заболевших было выделено патогенные стафилококки. Каким методом можно выявить источник инфекции при стафилококковой пищевой токсикоинфекции? A Фаготипирование выделенной культуры B Реакция связывания комплемента (РЗК) C Реакция нейтрализации (РН) D Реакция иммунофлуоресценсии (РІФ) E Реакция преципитации (РП) 13. Младенцу через несколько дней после рождения поставлен диагноз "бленнорея". Какой препарат надо было использовать после рождения для профилактики данного заболевание?
14. Из рвотных масс ребенка с симптомами пищевого отравления, связанного с употреблением пирожных, выделен стафилококк. Какой фактор патогенности стафилококков вызывает синдром токсикоинфекции? A Энтеротоксин B Гемолизин C Ексфолиативный токсин D Гиалуронидаза E Протеин А 15. Работников аптеки необходимо проверить на носительство золотистого стафилококка. С этой целью были взяты мазки из носоглотки для бактериологического исследования. Какую питательную среду целесообразно использовать для его выделения? A Сахарный бульон B Казеиново- угольный агар C Мясо- пептонный агар D Желточно-солевой агар E Селенитовый бульон Автор доцент Вовк И.Н. Методическая разработка по подготовке к лабораторному занятию №17 для студентов фармацевтического факультета (клиническая фармация) Тема: Патогенные энтеробактерии. Эшерихии. Морфология и биологические свойства. Микробиологическая характеристика коли-энтеритов. Актуальность темы. Escherichia coli (кишечная палочка) была выделена 1885 детским врачом профессором К. эшерихий сначала из испражнений грудных детей, потом от взрослых. Это нормальный житель кишечнике человека, животных, рыб, насекомых, распространенный во внешней среде. После открытия кишечной палочки началось ее изучения в различных аспектах. Сначала E. coli рассматривали как сапрофит, что засименяе кишечник взрослых и детей. Затем было установлено, что она способна проникать в ткани и размножаться там, вызывая интоксикацию вплоть до летального исхода. В связи с этим впоследствии кишечную палочку стали считать условно-патогенным микробом. Затем стало возможным отделить банальную (обычную) кишечную палочку от патогенной. В наше время различают кишечные палочки: непатогенные, энтеропатогенную (ЭПКП), энтероинвазивные (ЭИКП), энтеротоксигенные (ЭТКП),енетерогеморагичну(ЭГКП). 1.Цель. 1.1.Общая: изу.ить основные биологические свойства кишечной пало.к и, ее роль в развитии патологических состояний взрослых и детей, лабораторную диагностику и профилактику. 1.2.Конкретная 1. изучить морфологию, культуральные и биохимические свойства кишечной палочки. 2. знать дифференциально-диагности.еские признаки энтеробактерий группы кишечной пало.ки
6. Освоить методы профилактики и лечения кишечных инфекций 2.Основные теоретические вопросы подлежащих изучению. 1.Общая характеристика семейства энтеробактерий. 2.Морфология, культуральные и биохимические свойства эшерихий.
4.Факторы патогенности эшерихий. 5.Диференциация условно-патогенных и патогенных эшерихий. 6.Значение кишечной палочки в патологии человека 7.Микробиологична диагностика эшерихиозов 8.Методы неспецифической и специфической профилактики 3. Содержание темы. Представители этого рода - обширная группа микроорганизмов, состоящие из близких по биологическим свойствам микроорганизмов. Объединяет лактозоположительные и лактозоотрицательные разновидности, в том числе и безгазовые. Природная среда обитания - толстый кишечник людей, млекопитающих, большинства птиц, многих пресмыкающихся, рыб, насекомых. С испражнениями они попадают в окружающую среду (почву, вода, овощи, фрукты), где легко приспосабливаются к новым условиям существования. Эшерихиозная инфекция характеризуется полиморфизмом клинической картины, связано не только с особенностями организма больного, но биологическими свойствами возбудителя. В этом плане особый интерес представляют генетические детерминанты - плазмиды, обладающие передача не только в пределах одного вида, но и среди других родов бактерий. Морфология. Эшерихии - мелкие и средние, подвижные и неподвижные, грамотрицательные, неспороносные палочки, порой имеют капсулу, хорошо растут на простых твердых и жидких питательных средах. Культуральные свойства. На твердой среде образуют выпуклые, средней величины, блестящие, круглые, прозрачные и непрозрачные колонии с ровными краями (S-, гладкая форма). В жидких средах растут диффузно или дают осадок или пленку на поверхности, кольцо на стене. На селективно-дифференциальных средах типа Эндо - красные с металлическим блеском, Левина - синие Плоскирева - красные. E. coli ферментируют углеводы с газообразованием, а не ферментируют адонит, инозит, не образуют сероводород на средах с FeCl3, а не утилизують цитирует, не имеют фенилаланиндезаминазнои активности, не продуцирующие уреазы, желатиназы, негативные в реакции Фогес-Проскауера, производят лизиндекарбоксилазу. Антигены. Антигенная структура кишечных палочек очень сложная. Описаны антигены В, R, K, (L, B, A), H, M, CFA / 1, f +, , и другие. Некоторые антигены - общие для эшерихий и сальмонелл (1-8, Х-ХIII), клебсиелл, шигелл, другие - специфические. По морфологическим, ферментными, культуральным свойствам патогенные и непатогенные эшерихии не дифференцируются. Поэтому чрезвычайно актуальным является поиск в материале патогенных эшерихий. Для этого используются ориентировочная реакция агглютинации. При ешерихиозний инфекции, наверное, больше патогенентичне значение имеет система защиты, связанная с К-антигенами и колицинами; факторы колонизации (адгезии), обусловленные фимбриями; наличие в эшерихий собственных агрессивных веществ - токсинов, гемолизинов, которые контролируются плазмиды Ent, Hly; факторы активной защиты, детерминированы R-плазмиды. Все детерминанты, которые контролируют определенные свойства эшерихий и их способность к внутриэпителиальному размножению, коррелируют с вирулентностью E. Coli и определенным патогенезом заболевания, поэтому их считают и факторами патогенности. Энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП), которые вызывают диарейные заболевания у взрослых и детей (холероподобные заболевания, «диарею путешественников»), при которой обезвоживание выраженное больше, чем при холере. Эти формы эшерихиоза чрезвычайно контагиозные, особенно распространенные в летний период. Пути передачи - вода, пищевые продукты. Распространение бактерий ограничено поверхностью слизистой оболочки тонкого кишечника, энтероциты НЕ инвазируются и структурно не поражаются. Об этом свидетельствует отсутствие воспалительной реакции в стенке кишечника и водянистый стул без примесей слизи и крови. Такой тип называется секреторным, в противовес инвазионному типу, при котором наблюдается деструкция кишечного эпителия. Cекреторная диарея возникает вследствие гиперсекреции Na и Cl и воды каемчатыми клетками крипт при ослаблении альтернативной функции тонкого кишечника - всасывание электролитов и воды реснитчатыми клетками слизистой оболочки. Ентеротоксигенность связана с 2 токсинами, неодинаковыми по своей устойчивостью к нагреванию - стабильный токсин (ST), низкомолекулярный, не имеет антигенных свойств и лабильный (LT), который по токсичными и антигенными свойствам близок к холерогену. Диареегенный эффект связан с повышением внутриклеточного уровня циклического аденозинмонофосфата. ST токсин не проникает в клетку, только действует на рецепторы енетероцитив, связанных с мембранной гуанилатциклазы. Усиление синтеза циклического гуанозинмонофосфата провоцирует гиперсекрецию воды и электролитов. Синтез его закодированный на плазмиде. Не выявлено биохимических различий между токсигенными и нетоксигенные штаммами. К этой группе относятся кишечные палочки О-8, В-15, В-25, В-73, В-115 В-128, В-138, В-139, В-142, В-148. Ентероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) вызывают эпителиальную инвазию, имеют антигенные связи с шигеллами. Они считаются возбудителями дизентериеподобные заболеваний. Подобно шигеллы ЭИКП проникают и размножаются в эпителиоцитах толстого кишечника, повреждают их и индуцируют воспаление и изъязвление слизистой оболочки. Инвазия начинается с пенетрации клеток кишечного эпителия. Внутри клеток бактерии продуцируют ферменты, которые лизируют стенку фагосом, вызывая повреждения эпителиоцитов и распространение инфекции. Наиболее известные кишечные палочки серотипов О-124: К-72, В-144. Энтеропатогенные кишечные палочки (ЭПКП) способны вызвать колиэнтерит у детей до 1-2-х лет. Поражают тонкий кишечник. В основе диарейного синдрома лежит сглаживания эпителиальных микроворсинок на фоне адгезии между бактериями и плазматической мембраной. Потеря адсорбирующих ворсинок в зоне адгезии приводит к диарее за счет нарушения электролитного баланса и мальабсорбции. Это микроорганизмы серотипов В-26, В-55, В-111. Лабораторная диагностика. Взятие материала для исследования. К началу этиотропного лечения у больных берут испражнения, рвотные массы, дуоденальное содержимое, кровь, мочу, навоз, спинномозговую жидкость, от трупов - кровь из сердца, содержание кишечника, кусочки легких, печени, селезенки, почек. При необходимости исследуют промывные воды желудка, остатки пищи, смывы с рук обслуживающего персонала, воздуха палат тощо.В отдельных случаях делают первичную микроскопию крови, мочи, ликвора, гнойных выделений, секретов слизистых оболочек в мазках, окрашенных по Граму. Выявление грамотрицательных палочек помогает бактериолог выбрать соответствующие питательные среды и следующие этапы лабораторной диагностики. Начальная бактериоскопия стула не производится. Бактериологическое исследование. Из последних порций испражнений тампоном берут часть фекалий в пробирку с транспортной средой (30% глицерина и 70% фосфатного буфера) или непосредственно у постели больного сеют на среду Эндо (Левина, Плоскирева, Асель-Либермана). При этом небольшое количество фекалий эмульгируют в 0,85% растворе хлорида натрия в соотношении 1: 10. Через несколько минут после оседания грубых остатков 1-2 капли жидкости вносят на поверхность среды и стеклянным шпателем растирают ее на небольшом участке. Оторвав шпатель от агара делают посев на остальную поверхность среды. Если возникает потребность посеять на вторую и третью чашки, материал наносят повторно. Кровь (10 мл) засевают во флакон с МПБ. Посев других материалов делают так же, как и испражнений. После инкубации в термостате при 37 0С в течение суток изучают характер роста на элективные-дифференциальных средах. На агаре Эндо колонии имеют дисковидные форму слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета. На среде Левина они окрашены в темно-синий цвет, а на средах Плоскирева и Асель-Либермана - в розовый. В состав последнего среды входит агар, лактоза (или сахароза) и индикатор Конго-красный. Среда с сахарозой используют для индикации тех энтеропатогенные эшерихий, которые ферментируют этот углевод. В связи с тем, что колонии патогенных и непатогенных кишечных палочек на указанных средах не отличаются, принадлежность выделенных культкр патогенных серогруппы определяют с помощью слайд-агглютинации с диагностическими поливалентными ОК-сыворотками, или адсорбированными О-сыворотками, содержащие антитела к определенным В-антигенов. Микробиологическая промышленность выпускает 5 наборов диагностических ОК-сывороток: ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД и ОКЕ. Основная поливалентная сыворотка ОКА содержит антитела к О- и К-антигенов более 20 главных серологических групп. Смесь ОК-сывороток готовят так, чтобы конечное разведение каждой из них было 1: 10. агглютинирует 10 лактозоположительных колоний. Материал из каждой колонии берут петлей так, чтобы часть ее осталась для дальнейшего пересиву.кщо одна из колоний дала положительную слайд-агглютинацию, ее остаток пересевают на среду Олькеницкого. Через 18-20 ч учитывают ферментацию лактозы и глюкозы (пожелтение и разрыв столбика и скошенной части агара), выделение Н2S (образование черного кольца на грани столбика и скошенной части). Выделенную культуру ориентировочно относят к определенной серогруппы. Для окончательной идентификации возбудителя необходимо поставить развернутую реакцию агглютинацию в пробирках для отдельного выявления его О- и К-антигенов. Диагностические агглютинирующие сыворотки разводят в двух рядах пробирок (в первом - О-сыворотку, во втором - К-сыворотку) до титра, указанного на этикетках ампул. Для определения О-антигена в каждую пробирку первого ряда вносят по 2 капли 2-х млрд суспензии выделенной культуры, прогретой в течение 2 ч при 100 0С. При кипячении иннактивируется К-антиген, локализуется поверхностно и задерживает агглютинацию О-антигена. Последний при прогреве не разрушается. Для выявления К-антигена в каждую пробирку второго ряда с разведенной в титра сывороткой вносят по 2 капли супсензии живой (не кипяченой культуры). Пробирку помещают в термостат при 37 0С на 18-20 ч. При положительной реакции развернутой агглютинации к титра (или, по крайней мере, до половины титра) делают окончательный вывод о выделении соответствующего серовару патогенных эшерихий. Отрицательная слайд-агглютинация 10 лактозоположительных колоний эшерихий дает право дать ответ об отсутствии энтеропатогенные кишечных палочек. Выделенную на среде Олькеницкого культуру, какая дала положительную развернутую реакцию агглютинации, сеют на среды Гисса для изучения ее сахаролитических, пептолитичних свойств и подвижности. После инкубации посевов в течение суток учитывают результаты. Патогенные эшерихии ферментируют лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит, сахарозу (отдельные штаммы), арабинозы, ксилозу, трегалозу, образуют индол, не выделяют H2S (некоторые штаммы образуют сероводород), не разлагаются инозит и мочевину, а не дезаминують фенилаланин, дают отрицательную реакцию Фогеса -Проскауера и не синтезируют ДНК-азу. Для выявления источника инфекции проводят фаго-и кальцинотипування выделенных культур. Идентификация диареегенних серотипов возможна также на основе выявления специфических маркеров. Культуры типа ЭТКП производят два вида токсинов: термостабильный обнаруживают на мышат-сосунков, термолабильный - на культурах Y1 надпочечников. Для быстрой идентификации ЭПКП используют реакцию коаглютинации на стекле выявления белка внешней мембраны. Адгезивные свойства эшерихий (ЕАКП) обнаруживают на культурах Hela и Hep-2. Самым быстрым и высокоспецифичным методом диагностики заболеваний, вызванных энтеропатогенными эшерихиями, является использование специфических ДНК-зондов. Они позволяют выявить гены плазмид, кодирующих патогенность кишечных палочек или синтез их цитотоксинах. Метод основан на том, что одноцепная молекула ДНК может гибридизироваться с комплементарной к ней второй ниткой ДНК. В большинстве патогенных эшерихий гены вирулентности локализованы в плазмидах. Итак зондом для выявления этих бактерий могут быть меченые последовательности, клонированные из таких плазмид. Серологическое исследование. Для серологической диагностики коли-инфекций более чувствительной и специфической является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Специфический антиген для этой реакции изготавливают путем сенсибилизации эритроцитов барана суспензией 48 ч агаровой культуры эшерихий, прогретой 2 часа при 100 0С. Достоверность серологической диагностики эшерихиоза возрастает при выявлении отдельных классов имуноглобулинов. Изменение повышенной концентрации IgM на IgG обусловлена острым инфекционным процессом. Обнаружение в сыворотке крови антител только класса IgG свидетельствует о бактерионосительстве. Лабораторная диагностика эшерихиоза основана на выделении возбудителя заболевания и последующей идентификации патогенных и непатогенных штаммов кишечной палочки с помощью диагностических ОК-сывороток в ориентированной и развернутой реакциях агглютинации. 4. Базовые навыки необходимые для усвоения темы. 4. 1. Морфология и тинкториальные свойства палочковидных бактерий. 4.2.Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий. 4.3.Дифференциально-диагностические среды Алгоритм навыков. 1.Материал для исследования: испражнения больного ребенка. 2.Посев на среду Эндо. 3.Характер и цвет колоний. 4.Мазок, окраска по Граму. 5.Реакция агглютинации на стекле с ОВ-сыворотками. 6.Пересев аглютинабельных колоний на скошенный МПА.
8.Развернутая реакция агглютинации. 9.Посев на "пестрый" ряд Гисса. 5. Практические работы, которые выполняются на занятии. 5.1. Изготовление мазков из культуры кишечной палочки, окраска по Граму, микроскопия. 5.2. Изучение состава и назначения дифференциально-диагностических сред. 5.3. Изучение колоний эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо, Плоскирева, Левина. Рекомендуемая литература Основные источники. 2. К.Д. Пяткина, Ю.С. Кривошеин Микробиология, М. 1980 (рус) 255-259,270-273 3. В.Д. Тимаков Микробиология. М. 1983 г. (рус) 273-279,286-288
5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология. Харк.224-227,232-236. 6. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харк +2002
8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. +1984 рус), 176-181
10. Ю.С. Кривошеин, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М. 1986. (рус), 97-98,107-109 Дополнительные источники 1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Общ. ред, проф. К. Палий, К, 2004,7-146 Автор:доц.СтуканО.К. Приложение1. При посеве испражнений больного брюшным тифом на среде Эндо выросли колонии, которые имеют разную окраску и размеры: одни - красные, крупные; другие - бесцветные, средних размеров. К каким по назначению питательных сред относится указанное в условии питательная среда? A Дифференциально – диагностическое B элективных C Специальное D Выборочное E Обогащение К инфекционной больницы поступил ребенок с подозрением на колiентерит. С испражнений выделено кишечную палочку. Как установить принадлежность палочки патогенных вариантов? A В реакции аглютинацiи с В сыворотками B На основании биохимических свойств C Путем фаготипирования D Микроскопию окрашенных мазков E По характеру роста на среде Эндо С испражнений больного ребенка 6-месячного возраста, которая находилась на искусственном кормлении, выделена культура кишечной палочки с антигенной структуре 0-111. Какой диагноз можно поставить? A Коли-энтерит B Гастро-энтерит C Холероподобные заболевания D Пищевое отравление E дизентериеподобные заболевания При бактериологическом исследовании испражнений четырехмесячного ребенка с симптомами острой кишечной инфекции на среде Эндо выросли в большом количестве красные колонии. Какие это могут быть микроорганизмы? A Эшерихии B Сальмонеллы C Стафилококки D Стрептококки E Шигеллы У мальчика 7 лет - холероподобный заболевания (рвота, профузное диарея). При посеве фекалий больного на среду Эндо выросли однотипные колонии: малинового цвета, с металлическим блеском. Микроорганизм является наиболее вероятным возбудителем заболевания? A энтеротоксигенные Escherichia coli B Salmonella enteritidis C Yersinia enterocolitica D Shigella sonnei E НАГ-вибрион У ребенка с острой кишечной инфекцией быстро развились признаки обезвоживания,появилась кровь в испражнениях. Педиатром был заподозрен кругу энтерит. Каким методом необходимо воспользоваться для диагностики энтерального эшерихиозу? A Бактериологическим B Серологическим D Аллергическим E Микроскопическим
A Смешанная инфекция B Вторичная инфекция C Носительство патогенных бактерий D суперинфекции E реинфекцию В клинику поступил ребенок с жалобами на боли в животе, стул жидкий с примесью крови. При посева испражнений на среду Эндо выросли малиново-красные с металлическим блеском колонии. Какие свойства нужно изучить для доказательства энтеропатогенносты кишечной палочки? A антигенный B морфологические C культуральные D биохимические E тинкториальные Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов фармацевтического факультета по подготовке к практическому занятию №18
2а. Общая: знать биологические свойства возбудителей особо-опасных инфекций, уметь выбрать и обосновать методы лабораторной диагностики чумы, сибирской язвы, предложить основне противоэпидемические мероприятия в очаге возникновения особо-опасных инфекций. 2б. Конкретная: 1.Уметь распознавать возбудителя чумы, сибирской язвы, холеры по морфологическим признакам. 2. Уметь правильно выбрать метод для предварительной и окончательной лабораторной диагностики особо-опасных зоонозов и холеры. 3. Предложить основные профилактические мероприятия в очаге чумы, сибирской язвы, холеры, знать показания к их внедрению; выбрать специфические и неспецифичные профилактические препараты, которые применяют при вспышке инфекции. 4. Уметь поставить реакцию термопреципитации по Асколи для проверки животноводческого сырья на предмет контаминации спорами возбудителя сибирской язвы.
Граф логической структуры содержания: Таксономия патогенных для человека вибрионов
жүктеу/скачать 0.56 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|