Микробиология, вирусология и иммунология



Pdf көрінісі
бет65/197
Дата02.01.2022
өлшемі1.61 Mb.
#453700
1   ...   61   62   63   64   65   66   67   68   ...   197
MB uchebnoe posobie

Иммуноферментный анализ. Иммуноферментные методы в силу своей 
безопасности  и  высокой  чувствительности  являются  достаточно  широко 
применяемыми.  Кроме  того,  реагенты,  к  которым  присоединен  фермент, 
обычно весьма стабильны и допускают длительное хранение (рис. 11).


45
а 
 
 
Антиген            Антитело кроличьей                 Светящийся комплекс  
                       сыворотки, меченное                     антиген — антитело 
                             флюорохромом 
б 
 
Антиген         Антитело кроличьей       Антитело против          Светящийся комплекс 
                      иммунной сыворотки      кроличьего глобулина     антиген — антитело, 
                               (глобулин)                 (антиглобулин)         меченное флюорохромом 
Рис. 10. Метод иммунофлюоресценции (по Кунсу): а — прямой; б — непрямой
Чаще используют пероксидазу и фосфатазу, которые при добавлении к ре-
агирующим компонентам соответствующего субстрата образуют окрашенные 
продукты. В случае определения антител антигены иммобилизуют на поверх-
ности лунок пластиковых панелей, к ним добавляют исследуемую сыворотку. 
Связывание антител с антигеном дает образование иммунного комплекса. В 
следующую фазу реакции на образовавшийся иммунный комплекс наносятся 
меченые ферментом вторые антитела (анти-антитела). Далее, после промывки, 
добавляют раствор субстрата, который, вступая в реакцию с ферментом, дает 
окрашивание. Интенсивность окрашивания будет зависеть от количества фер-
ментной метки (чем больше свяжется меченых антител, тем ярче окрашивание). 
Результаты  учитывают  фотометрически  или  визуально.  В  данной  реакции 
можно использовать как меченые антитела для идентификации антигенов, так 
и меченые антигены для определения антител в сыворотке крови. 
   
 
 
А 
 
 
 
б 
 
 
2  
3  



 

    8       9              10  11 
 1 
1
Рис. 11. Использование иммуноферментного метода для обнаружения антигенов 
(а) и антител (б). 1 — поверхность твердой фазы; 2 — специфические антитела; 3 
—  антиген  (исследуемый  материал); 4—5 — специфические  к  данному  антигену 
антитела, меченные ферментом; 6 — субстрат для фермента; 7 — специфический 
антиген; 8 — исследуемая сыворотка (антитела); 9—10 — антивидовая сыворотка, 
содержащая антитела к человеческому иммуноглобулину и меченная ферментом


46
В  настоящее  время  выпускается  большое  количество  разнообразных 
иммуноферментных диагностических наборов как для определения антител 
в сыворотке или других биологических жидкостях, так и для определения 
антигенов. В качестве последних могут выступать возбудители различных 
заболеваний  (микробы,  вирусы),  а  также  различные  белки,  определение 
содержания которых в крови или секретах представляет диагностический 
интерес (аутоантитела, факторы неспецифической защиты, гормоны, цито-
кины, белки и др.). Данный метод широко используется для диагностики 
аллергических заболеваний (определения концентрации IgЕ).


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   61   62   63   64   65   66   67   68   ...   197




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет