Биопрепараты, используемые для диагностики

96
Стерильной  петлей  взять  небольшое  количество  исследуемой  чистой 
культуры и растворить в капле физраствора, то же самое проделать и с 
каплей диагностической сыворотки. При соответствии диагностической 
сыворотки исследуемой чистой культуре минут через 5 появляются хло-
пья, а жидкость начинает просветляться. В капле с физраствором будет 
равномерная муть. В случае образования хлопьев и в контроле — резуль-
таты не учитываются, — произошла спонтанная агглютинация.
Реакции гемагглютинации:
РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) используется для опреде-
ления титра АТ, в качестве АГ используется эритроцитарный диагности-
кум (бактериальный, вирусный — содержит взвесь сенсибилизирующих 
эритроцитов с возбудителем). РПГА основана на том, что эритроциты, 
если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобре-
тают способность агглютинировать при взаимодействии с антителами 
к адсорбированному антигену.
РТГА (реакция торможения гемагглютинации) используется для опре-
деления титра антител в сыворотке крови и для установления родовой 
принадлежности  АГ.  Специфические  противовирусные  антитела, 
взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают 
способности  агглютинировать  эритроциты,  т.е.  тормозят  реакцию 
гемагглютинации.
Реакция  иммунофлюоресценции  используется  для  ускоренной  диа-
гностики  (экспресс-диагностики)  возбудителя,  в  качестве  АТ  берут 
диагностическую люминисцентную сыворотку. Реакция основана на 
том, что иммунные сыворотки, к которым химическим путем присо-
единены  флюорохромы,  при  взаимодействии  с  соответствующими 
антигенами образуют комплекс АГ-АТ, который светится в люминис-
центный микроскоп.
Реакции преципитации (РП)
Свойства преципитинов и преципитиногенов, участвующих в реакции 
преципитации: растворимые, высокомолекулярные, прозрачные, находится 
в оптимальных соотношениях. Реакции очень чувствительные.
Механизм реакции: 
1 — фаза специфическая: образование комплекса антиген — антитело;
2 — фаза неспецифическая: образование ясно видимого осадка или по-
мутнение на границе двух прозрачных сред.
Виды реакции преципитации:
Осадочная реакция преципитации Кана используется для определения 
наличия АТ в сыворотке крови больного сифилисом; АГ — неспеци-
z
z
z
z

97
фический, выпадает белый осадок (в течение 30 сек. или 3 мин.), если 
в сыворотке присутствуют АТ к сифилису.
Реакция кольцепреципитации. Используется для определения малого 
количества АГ в материале или для определения АТ в сыворотке крови 
больного (диагностика сибирской язвы). В реакции разводят антиген.
Титр реакции — это наибольшее разведение антигена, которое дает ви-
димую полосу преципитата.
Реакции преципитации в геле или агаре. Используются для определения 
антигенов, антител и токсигенности, а также для определения классов 
иммуноглобулинов в реакции Манчини.
При постановке реакции преципитации в агаре в зонах оптимальных со-
отношений происходит диффузия АТ и АГ и на месте их встречи образуются 
мутные полосы — дуги преципитата.
Реакция преципитации в капилляре.
Используется  для  экспресс-диагностики  вирусных  инфекций  (бешен-
ства). В узкий капилляр вводится преципитирующая сыворотка и материал 
больного, если есть АГ, то на границе 2 сред образуется преципитат.
Токсины — продукты метаболизма, выделяющиеся во внешнюю среду в 
результате жизнедеятельности микроорганизма (экзотоксины). Эндотоксины 
— выделяет микроорганизм при гибели или разрушении.
Реакция нейтрализации токсина антитоксином проводится на животных. 
Первой группе животных вводят токсин и антитоксин, второй — токсин. 
Через некоторое время вторая группа животных погибает, первая остается 
жизнеспособной, т.к. произошла реакция нейтрализации токсина антиток-
сином.
С  практической  целью  реакция  нейтрализации  используется  для  тит-
рования антитоксических сывороток. Если антиген и антитело находятся в 
эквивалентных состояниях, то выпадают хлопья — флокулянт, произошла 
реакция флокуляции.
Лизис — растворение  антигена  в  присутствии  комплемента  и  антител 
(лизинов).
Комплемент — комплекс белков сыворотки крови, состоит из 9 фракций 
и 11 белков.
Существует 2 пути активации комплемента:
1 — классический, при образовании комплекса антиген — антитело.
2 — альтернативный, происходит без образования комплекса антиген 
— антитело, активация комплемента идет за счет липополисахаридов грам-
отрицательных бактерий.
Виды лизиса: гемолиз, цитолиз, бактериолизис.
z
z
z

98
Реакция  связывания  комплемента  (РСК).  Используется  для  иден-
тификации  антигена  и  определения  титра  антител  в  сыворотке  крови 
больного. В основе лежит 2 феномена: бактериолизис и гемолиз. Ме-
ханизм РСК: 1 — фаза специфическая: образование комплекса антиген 
— антитело; 2 — фаза неспецифическая: задержка гемолиза (образо-
вание осадка).
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Используется для идентификации микроорганизмов и определения титра 
антител. Иммуноферментные методы в силу своей безопасности и высокой 
чувствительности являются достаточно широко применяемыми. Кроме того, 
реагенты,  к  которым  присоединен  фермент,  обычно  весьма  стабильны  и 
допускают длительное хранение.
Чаще используют пероксидазу и фосфатазу, которые при добавлении к 
реагирующим  компонентам  соответствующего  субстрата  образуют  окра-
шенные продукты. В случае определения антител антигены иммобилизуют 
на поверхности лунок пластиковых панелей. К ним добавляют исследуемую 
сыворотку. Связывание антител с антигеном дает образование иммунного 
комплекса.  В  следующую  фазу  реакции  на  образовавшийся  иммунный 
комплекс наносятся меченные ферментом вторые антитела (анти-антитела). 
Далее, после промывки, добавляют раствор субстрата, который, вступая в 
реакцию с ферментом, дает окрашивание. Интенсивность окрашивания будет 
зависеть от количества ферментной метки (чем больше свяжется меченых 
антител,  тем  ярче  окрашивание).  Результаты  учитывают  фотометрически 
или визуально. В данной реакции можно использовать как меченые антитела 
для идентификации антигенов, так и меченные антигены для определения 
антител в сыворотке крови (рис. 11). 
Радиоиммунологические методы (РИА)
В качестве метки чаще применяют радионуклиды йода (I
125
). Для опреде-
ления антигенов обычно используют классический радиоиммунологический 
анализ (РИА). Метод основан на уменьшении связывания антителами радио-
активно меченного антигена за счет добавления немеченого антигена. Содер-
жание последнего определяют по степени уменьшения такого связывания. 
При положительной реакции уровень радиоактивности опытных образцов 
более чем в 2 раза превышает уровень радиоактивности контрольных. Метод 
позволяет выявлять очень низкие концентрации антигена (до 10
-12
 г/мл) и 
антител (рис. 12). Может быть использован для диагностики практически 
любого  инфекционного  заболевания,  а  также  таких  низкомолекулярных 
белков, как, например, гормоны.

99

жүктеу/скачать 1.61 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: