О д е кс з д о ро в ь я н а зе мн ы Х жи в от ны Х том I общие положения Двадцать восьмое издание 2019 г. Кодекс
Менеджмент рисков для здоровья животных, связанных с эмбрионами
жүктеу/скачать 5.76 Mb. Pdf көрінісі
|
| Менеджмент рисков для здоровья животных, связанных с эмбрионами
Производство эмбрионов методом in vitro ведётся долгие годы. И хотя дополнительные этапы, которых требует клонирование, несколько усложняют эту технику, все риски, связанные с TNCS, были заранее идентифицированы в том, что касается ассистированных методов репродукции (см. Главу 4.9.). Анализ прикладной методологии TNCS позволяет классифицировать её элементы следующим порядком: 1) Овоциты (отобранные на бойне путём трансвагинальной пункции или с помощью лапаротомии) Основные риски связаны с состоянием здоровья животного, у которого отбирают яичники, и с качеством овоцитов. 2) Донорские клетки (клетки, отобранные у животного, селекционированного для клонирования – путём биопсии, отобранные на бойне или после смерти) В настоящее время не выявлено никаких новых особых рисков, связанных с клонированием TNCS. Предполагалось, что имеется риск, связанный с активацией эндогенных ретровирусов при использовании методики клеточной пересадки, но этот риск признан скорее теоретическим, нежели реальным. В некоторых экспериментальных техниках донорская клетка может быть подвергнута воздействию химических агентов для модификации её состава (например, воздействию ингибиторов клеточного цикла или модификаторов хроматина). 3) Постановка выращенных эмбрионов на культуру in vitro (техника, используемая для слияния донорского материала с материалом рецептора и для культивирования выращенных эмбрионов) 4) Риски, связанные с методом слияния донорских клеток с изъятыми овоцитами-рецепторами, и теми, что обусловлены условиями культуры. Помимо этого, оператор должен учитывать, что созревание клона зависит от породы, анатомии и физиологии суррогатной матери. 1. Овоциты Лаборатория или производитель должны составить подробное досье, касающееся яичников, в котором указать их происхождение, состояние здоровья животного, у которого они были отобраны, сведения о системных поражениях, наблюдаемых у него, и данные о стаде, из которого оно происходит. Эта информация чрезвычайно необходима, когда имеется риск перекрёстной контаминации тканей яичников из-за их смешения. Фолликулярные жидкости могут содержать различные возбудители болезней (напр., вирус вирусной диареи бовинных) и контаминировать слитую фолликулярную жидкость, полученную от здоровых животных. Помимо этого, выбор методики отбора овоцитов (аспирация или декупаж на транши фолликул яичников) определяет степень заражения крови и качество вносимого материала. Следует отбирать репрезентативную пробу для доказательства отсутствия зараженного биологического материала в каждой из смесей. Проводится созревания овоцитов, рассматриваемых в этом случае как комплекс овоцит-кумулюс (COC), после чего их помещают (в большинстве случаев) в культурную среду или в среду созревания. Особое внимание и меры предосторожности принимают, проводя селекцию и созревание овоцитов, взятых из смесей, отвечающих требованиям с точки зрения морфологии; также подвергают исследованию качество используемой культурной среды. Следует отказаться от использования сывороточных и протеиновых элементов, происходящих из неопределенных или непроверенных источников. Во избежание пролиферации оппортунистических бактерий может требоваться добавление в культурную среду подходящих и безопасных антибиотиков. Соблюдение санитарно-гигиенических мер и использование надлежащих методов дезинфекции чрезвычайно важно и обязательно в лабораториях, занимающихся оплодотворением in vitro. Следует добиваться правильного обращения с эмбрионами и соблюдения санитарных протоколов в процессе их созревания и посадки на маточную культуру. 2. Донорские клетки Для снижения рисков соблюдают следующие требования: – Донорские клетки отбирают у животного полагающимся порядком и ставят на культуру в надлежащих санитарно-гигиенических условиях согласно надлежащим лабораторным практикам. – В случае необходимости пересадка клеток, используемых для клонирования, должна документироваться, помимо чего на разных этапах процесса может требоваться отбор образцов на предмет присутствия хромосомных элементов клеточных линий. По возможности должна существовать процедура регулярного отбора клеток для определения морфологических или других характеристик. Глава 4.12. – Ядерная пересадка соматических клеток сельскохозяйственных животных и лошадей Кодекс здоровья наземных животных МЭБ 2019 г. 210 – Линии стволовых клеток (предназначенные для клонирования на последующих этапах) должны сохраняться в оптимальных условиях, позволяющих поддерживать их жизнеспособность. Отсутствие внешних агентов доказывают путём исследования на бактерии, грибы, микоплазмы и вирусы, для чего используют принятые тесты (см. Руководство Международного общества пересадки эмбрионов). 3. Техники клонирования или реконструкции Методику клонирования, требующую обращения к химическим веществам или другим реактивам, следует прописывать с особой тщательностью в том, что касается качества эмбрионов и общей эффективности. Слияние материала рецептора и донора химическими и физическими способами требует особого внимания и тщательности проведения. Следует разработать оптимальные способы предупреждения ранней гибели эмбрионов (на основе лабораторных протоколов или опубликованных рекомендаций). Если после реконструкции эмбрионов для их выращивания применяется клеточная ко-культура, следует провести исследование ко-культурных клеток. Образцы, взятые в каждой из партий, исследуют на предмет бактерий, грибов, микоплазм и вирусов. Эмбрионы ставят на культуру и отбирают в установленные сроки для их пересадки или криоконсервации для последующего использования. Для промывки и консервации эмбрионов используют международные стандартизированные способы (Практические кодексы Международного общества пересадки эмбрионов). Перед пересадкой следует удостовериться в соответствии качества эмбрионов требованиям Глав 4.8. и 4.9. Статья 4.12.6. жүктеу/скачать 5.76 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|