Гистоморфологические методы

Электронная микроскопия. 
Электронная микроскопия – метод морфологического исследования объ-
ектов с помощью потока электронов, позволяющих изучить структуру этих 
объектов на макромолекулярном и субклеточном уровнях.
После выпуска первой промышленной модели просвечивающего (транс-
миссионного) электронного микроскопа ЭМ прошла большой путь развития и 
позволила перейти на качественно новый уровень изучения материи. ЭМ нашла 
широкое применение в морфологии, микробиологии, вирусологии, биохимии, 
онкологии, медицинской генетике, иммунологии. Благодаря ЭМ раскрыта суб-
микроскопическая структура клеток, открыт ряд неизвестных ранее клеточных 
органелл, таких как лизосомы, рибосомы, эндоплазматический ретикулум, мик-
ротрубочки, цитоскелет, структуры, специфичные для отдельных видов клеток. 
ЭМ позволила понять многие тонкие механизмы развития болезней, в том чис-
ле на ранних этапах их возникновения, еще до появления чёткой клинической 
симптоматики.
ЭМ все шире применяется для ранней диагностики заболеваний, а также 
для выявления этиологии информационных процессов. Её используют в онко-
логии для определения гистогенеза опухолей, что имеет важное значение в ле-
чении и прогнозе онкологического заболевания. В нефрологии с помощью ЭМ 
исследования материала, полученного при пункционной биопсии, позволяют 
выявить ранее морфологические изменения структур почек, диагностировать 
форму гломерулонефрита и т.п. При ЭМ пунктатов печени удается провести 
дифференциальную диагностику гепатитов, гепатозов и других заболеваний 
печени, определить активность процесса и нередко его этиологию.
Использование ЭМ в сочетании с другими методами, например, с автора-
диографией, гистохимическими, иммунологическими, обусловило появление 
электронной авторадиографии, электронной гистохимии, иммунной электрон-
ной микроскопии (электронной иммуноморфологии) и др. Это позволило зна-
чительно расширить информацию, получаемую с помощью ЭМ, наблюдать 
структурное выражение течения биохимических процессов в клетке, что, в 
свою очередь, подтвердило один из основных методологических принципов со-
временной биологии – диалектическое единство структуры и функции. 
55

ЭМ требует специальной подготовки объектов изучения, от которой в 
значительной мере зависят возможности метода. В соответствии с целями ис-
следования методика такой подготовки может быть различной. Однако непре-
менным условием для любых электронно-микроскопических исследований яв-
ляется фиксация тканей или микробов с максимальным сохранением их при-
жизненного строения. Существуют два принципиально различных способа 
фиксации: химический и физический, каждый из которых имеет различные ва-
рианты.
В ЭМ, как правило, используют химическую фиксацию с помощью фик-
саторов, обладающих стабилизирующими свойствами. Универсального для 
любых тканей фиксатора не существует, поэтому в зависимости от задачи кон-
кретного исследования применяют соответствующие фиксаторы. При выборе 
химических фиксаторов исходят из их способности коагулировать белки (спир-
ты, ацетон, некоторые кислоты, соли тяжелых металлов и др.) или стабилизи-
ровать липиды и гели (четырехокись осмия, глутаровый альдегид, формалин и 
др.). 
С помощью этого метода можно обнаружить собственно вирус. Концен-
трация возбудителя, как правило, в материале от больных незначительна, по-
этому поиск вируса затруднен и требует предварительного его осаждения с по-
мощью высокоскоростного центрифугирования с последующим негативным 
контрастированием. Кроме того, ЭМ не позволяет типировать вирусы, так как у 
многих из них нет морфологических различий внутри семейства. Например, 
вирусы простого герпеса, цитомегалии или опоясывающего герпеса морфоло-
гически практически неотличимы. 
Одним из вариантов ЭМ, используемым в диагностических целях, являет-
ся иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), при которой применяются спе-
цифические антитела к вирусам. В результате взаимодействия антител с виру-
сами образуются комплексы, которые после негативного контрастирования 
легче обнаруживаются. ИЭМ несколько более чувствительна, чем ЭМ. 
Для исследования тканей пародонта в электронной микроскопии приме-
няли специальную обработку материала: для электронно-микроскопического 
изучения материал фиксировали в растворе 2% глютарового альдегида на фос-
фатном буфере Миллонига (рH 7,2-7,4) в течение 2 часов, отмывали в трех пор-
56

циях того же буфера. Постфиксацию проводили в 1% растворе четырехокиси 
осмия (приготовленном на фосфатном буфере Миллонига, рН 7,2-7,4) – 1 час. 
Обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и абсолютном ацетоне. За-
ливку проводили в эпон-812 по общепринятой методике. Ультратонкие срезы 
получали на ультрамикротоме LKB-III (LKB, Швеция), контрастировали 2% 
водным раствором уранилацетата и раствором цитрата свинца по Рейнольдсу. 
Ультратонкие срезы изучали и фотографировали в электронном микроскопе 
JEM-100 СХ (JEOL, Япония) (рис. 34-36).
Рис. 34. JENAVAL (К. Цейсс, Германия) 
Рис. 35. JEM-100 СХ (JEOL, Япония) 
57

Рис. 36. Ультрамикротом LKB-III (LKB, Швеция) 

жүктеу/скачать 1.82 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: