Омела белая Viscum album Mistletoe
жүктеу/скачать 2.26 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Взаимодействие стандартизированных омелы ( Viscum album ) извлекает с химиотерапевтическими препаратами в отношении цитостатической и цитотоксические эффекты in vitro
- Омелы и химиотерапевтических препаратов
- Культура клеток
- Распространение анализа
- Гибель клеток анализ
- Концентрации препарата в анализах
- Анализ данных
ConclusionsAqueous, fermented mistletoe extracts did not influence the cytostatic and cytotoxic activity of several common conventional chemotherapeutic drugs when applied in concentrations typical for clinical use. We could show this in breast, prostate, pancreatic and lung carcinoma cell lines. Although these in vitro data cannot directly be extrapolated to the complex in vivo conditions, they contribute to the knowledge regarding safety of cancer patients receiving mistletoe supported chemotherapy. Our in vitro results are in line with clinical experiences and trials that Iscador can be used concomitant with conventional oncological drugs without safety hazard by herb drug interactions. Взаимодействие стандартизированных омелы (Viscum album) извлекает с химиотерапевтическими препаратами в отношении цитостатической и цитотоксические эффекты in vitroУльрике Weissenstein, Маттиас Кунц, [...], и Стефан Баумгартнер ФонУчитывая важность комплементарной и альтернативной медицины (CAM) для больных раком, возрастает потребность узнать больше о возможных взаимодействий между CAM и противоопухолевых препаратов. Омела (Viscum album Л) относится к лекарственные травы, которые используются в качестве поддерживающей терапии в течение химиотерапии. В in vitro исследования, представленные здесь эффект стандартизированных препараты омелы на цитостатической и цитотоксическую активность несколько общих обычных химиотерапевтических препаратов исследовали с помощью различных клеточных линий рака. МетодыКарциномы молочной железы человека линии клеток HCC1937 и HCC1143 относились с доксорубицина гидрохлорид, аденокарциному поджелудочной железы клеточной линии па-ту-8902 с гемцитабин гидрохлорид, карцинома предстательной клеточной линии DU145 с доцетаксел и митоксантрон гидрохлорида и рака легких клеточной линии NCI-H460 лечили доцетаксел и цисплатин. Каждая доза соответствующих химиотерапевтический препарат в сочетании с Viscum album экстракт (ВАЭ) в клинически значимых концентрациях и пролиферации и апоптоза были измерены. РезультатыVAE не препятствовали химиотерапии индуцированных cytostasis и цитотоксичность в любом из наших экспериментальных параметров. При более высоких концентрациях VAE показали аддитивный ингибирующее действие. ВыводыНаши in vitro результаты показывают, что никакого риска безопасности путем травы лекарственные взаимодействия следует ожидать от экспозиции раковых клеток к химиопрепаратам и VAE одновременно. Ключевые слова: Омела (Viscum album Л.), Iscador, химиотерапия), лекарственные взаимодействия, Cytostasis, Цитотоксичность ФонОсновной цитотоксических механизм многих обычных противоопухолевых препаратов, основанных на повреждение ДНК и последующей индукции апоптоза. Рядом цитотоксических реакций раковые клетки могут также реагировать на блок клеточного цикла или задержки (cytostasis) [1]. Потому что химиотерапевтические препараты желательно действовать на быстро делящиеся клетки нормальные, терапевтические процедуры, в результате наиболее распространенные побочные эффекты, как миелосупрессии, выпадение волос, усталость, инфекция и др. В попытке уменьшить клинической токсичности химиотерапевтических препаратов, для укрепления иммунной системы и улучшения симптомов их болезни много больных раком использовать омелы в качестве дополнительной терапии в сочетании со стандартным схемам [2,3]. Омела (Viscum album) препараты содержат активные компоненты, как омела лектинов и viscotoxins и сообщаются посмотреть противоопухолевых свойств вызывая клеточного цикла задержки или ареста и индукции апоптоза [4-7], влияющих ангиогенеза опухоли [8,9] и усилению иммунных потенцирующее деятельности, которые могут способствовать хост-системы обороны против опухолей [10-13]. Молекулярные соединения омелы сообщили show in vitro ингибиторного потенциала на P-гликопротеина (P-gp), также известный как белка множественной лекарственной устойчивости 1 (MDR1) [14]. Анализ клинических исследований свидетельствует о том, что адъювантного лечения онкологических больных с омелы связан с лучшей выживаемости, снижение побочных эффектов традиционной терапии, и с повышением качества жизни [15-18]. В ранней стадией рака молочной железы пациентов частота рецидива или метастазов в течение 5 лет не был под влиянием дополнительных омелы терапии [19]. Онкологи, столкнувшись с решением своих пациентов, использование дополнительных методов лечения, иногда беспокоятся о возможных взаимодействиях лекарственных средств растительного происхождения с онкологические препараты, которые могли бы повлиять на эффективность стандартное лечение. Целью нашего исследования, поэтому было изучение возможных последствий клинически значимой дозы стандартизированных VAEs на цитостатической и цитотоксических эффективности нескольких стандартных химиотерапевтических агентов на различных клеточных линий рака in vitro. МетодыОмелы и химиотерапевтических препаратовВодный, ферментации препаратов омелы Iscador м spec. 5 мг (VAE-м, узла дерева Malus domesticaЛот 1109/2103/2, общая омелы лектин концентрации 287 нг/мл) и Iscador ку spec. 5 мг (VAE-ку, узла дерева Quercus robur и Q. petraeaЛот 1204/2221/4, общая омелы лектин концентрации 399 нг/мл) были получены из общества по изучению рака (Арлесхайм, Швейцария). Доксорубицин гидрохлорид, гемцитабин гидрохлорид, доцетаксел, и митоксантрон гидрохлорид были получены от Sigma-Aldrich Logistik GmbH (Букс, CH) и цисплатина с LuBio Science GmbH (Люцерн, Швейцария). Культура клетокКарциномы молочной железы человека линии клеток HCC1937 и HCC1143, аденокарциному поджелудочной железы клеточной линии па-ту-8902, карцинома предстательной клеточной линии DU145 и рака легких клеточной линии NCI-H460 были получены от DSMZ (немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур, Брауншвейг, Германия). HCC1937, HCC1143, DU145 и NCI-H460 клетки культивировали в RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 2 мм L-глютамина, и 1% пенициллин - Стрептомицин (Sigma-Aldrich). Па-ту-8902 клетки культивировали в Dulbecco's MEM высокого содержания глюкозы (Sigma-Aldrich) с добавлением 2 мм L-Глютамина, 1 мм Пируват натрия, 10% фетальной телячьей сыворотки и 1% пенициллин - Стрептомицин в увлажненной атмосфере с 5% CO2 в 37 градусов C. клеточных линий поддерживались в экспоненциальный рост, и клетки от subconfluent монослоев собирали трипсин-ЭДТА (Sigma-Aldrich) проводить эксперименты. Для измерения параметров клеточных культур были использованы в течение 4-6 недель после оттаивания. Распространение анализаРаспространение косвенно оценивать с помощью клеточной пролиферации реагента WST-1 (Roche, Мангейм, Германия). Клетки (1,5 х 104 в 100 мкл) высаживали в утраивается в 96-луночных планшетов. После 4-6 часов, чтобы позволить вложение, наркотики были добавлены в различных концентрациях (см. ниже). Распространения измеряется 4 ч после инкубации с реагентом в трех экземплярах. Верхний предел абсорбции 2.0 - 2.1. Данные приведены в процентах ингибирование пролиферации относительно неочищенных управления. Гибель клеток анализАпоптоз/некроз измеряется с помощью Аннексина V-FITC апоптоза обнаружения Kit я (BD Biosciences Pharmingen™, San Diego, CA, США). Кратко: 2х105 клетки инкубировали с Аннексина V-FITC и 7-AAD при комнатной температуре в темноте. После этого образцы были проанализированы в проточный цитометр (FACS Calibur, BD Biosciences, San Jose, CA). В начале апоптотических клеток: Аннексина V-FITC позитивных и 7-AAD отрицательным. В конце апоптоза/некротических клеток: Аннексина V-FITC позитивных и 7-AAD положительные. Данные приведены в процентах от общего количества клеток. Цитотоксичности (%) была рассчитана следующим образом: в начале апоптотических клеток (%)  + в конце апоптоза/некротических клеток (%).
Концентрации препарата в анализахПредшествующий реальных экспериментов доза-реакция диапазон концентраций и оптимальное время инкубации определялась для каждого химиотерапевтического агента, а каждая ячейка строки по отдельности, используя WST-1 распространением анализа (данные не показаны). Клетки инкубировали в течение 48 ч или 72 ч соответственно, в зависимости от максимальной измеримых антипролиферативное действие цитостатиков. Потому что его собственная флуоресценция, доксорубицин при более высоких дозах мешал нуклеиновая кислота, краситель 7-AAD. Поэтому максимальные концентрации доксорубицина полезная для обнаружения апоптоз клеток карциномы молочной железы линий HCC1143 и HCC1937 составила 5 мкг/мл. В основные эксперименты, наркотики были добавлены в питательной среде в концентрациях, указанным в таблице 1. Каждая доза соответствующих химиотерапевтический препарат в сочетании с VAE-м (HCC1937 и HCC1143) или VAE-ку (па-ту-8902, DU-145 и NCI-H460) в концентрациях 0; 0.1; 1.0; 10; 100 мкг/мл для измерения и распространения 0; 0.1; 1.0; 10 мкг/мл для измерения апоптоз/некроз. Типичные клинические Iscador концентрации для подкожного применения 0.1 и 1 мкг/мл, примерно соответствующие инъекции по 5 мг Iscador при указании объема циркулирующей крови или веса тела, соответственно. Параметры измерялись после соответствующего времени инкубации. Как мы, предназначенный для выявления минимальной дозы способны вызывать апоптоз в па-ту-8902 мы использовали значительно выше гемцитабин концентрации в апоптоз, чем в пролиферации анализа. Анализ данныхТри независимые эксперименты были проведены для каждой комбинации химиотерапевтической и экстракт омелы. Данные были проанализированы с 2-полосными дисперсионного анализа (ANOVA), Тип 6 разложения) с помощью программы Statistica 6.0 (Statsoft Inc., Талса, США). Для парных сравнений, защищенных Фишер ЛСД-теста был использован. Эта процедура дает хорошие защиты от ложных срабатываний, а также ложно-отрицательных ошибок [20]. Предел значимость определяется как p < 0.05.
|