«Оптические биосенсоры на явлении поверхностного плазмонного резонанса» по дисциплине
Методы определения концентрации глюкозы
жүктеу/скачать 0.72 Mb.
|
3. Методы определения концентрации глюкозы3.1 Глюкозооксидазный методДля определения концентрации глюкозы используют реакцию окисления глюкозы в присутствии глюкозооксидазы. В состав рабочего реагента для определения глюкозы фотометрическим биохимическим методом входят: глюкозооксидаза, пероксидаза, 4-аминоантипирин и фенол. В качестве буфера используется ТРИС (2-амино-2-гидроксиметил-пропан-1,3-диол). В основе метода лежат последовательность двух реакций: первая реакция обеспечивает высокую селективность метода, поскольку глюкозооксидаза катализирует реакцию окисления только D-глюкозы. Рис. 3.1.1 – Окисление глюкозы Глюкозооксидаза катализирует перенос двух водородных атомов с углеродного атома глюкозы на кислород, растворенный в жидком реагенте. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярном количестве перекись водорода. Вторая реакция индикаторная: перекись водорода под действием пероксидазы в реакции с 4-аминоантипирин и фенолом образует окрашенный продукт – хинонимин, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом образце. Рис. 3.1.2 – Образование хинонимина В результате испытаний было выявлено, что максимум поглощения хинонимина расположен в диапазоне 480-530нм, поэтому для фотометрических измерений смеси выбирается длина волны в этом диапазоне. Фотометрия представляет собой метод количественного анализа микроколичеств веществ. Метод дает возможность определить концентрацию вещества в растворе в тех случаях, когда вещество имеет собственную окраску либо приобретает окраску путем воздействия на него соответствующего химического реагента. Сущность фотометрического анализа заключается в следующем: определяют уменьшение интенсивности потока света с определенной областью спектра после прохождения его через определенной толщины слой окрашенного раствора и, учтя законы светопоглощения, делают вывод о концентрации растворенного вещества. Основной закон светопоглощения Бугера-Ламберта-Бера определяет зависимость между поглощением излучения раствором и концентрацией в нем поглощаемого вещества. Закон выражается в следующем уравнении: где: I0 - начальная интенсивность света; It – интенсивность света, прошедшего через поглощающее вещество; Σ – коэффициент поглощения, характеризующий поглощающую способность вещества; с – концентрация раствора (моль/л); l – толщина слоя раствора, поглощающего свет. Рисунок 3.1.3 – Уменьшение интенсивности потока света после прохождения раствора жүктеу/скачать 0.72 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|