Методическое пособие к малому практикуму по биохимии и молекулярной биологии
Работа 8. Определение активности каталазы
жүктеу/скачать 1.21 Mb. Pdf көрінісі
|
| Работа 8. Определение активности каталазы
по Баху и Зубковой Фермент каталаза (Н 2 О 2 : Н 2 О 2 -оксидоредуктаза) разлагает перекись водорода по уравнению: Н 2 О 2 + Н 2 О 2 = 2Н 2 О + О 2 . Каталаза содержится в большом количестве в эритроцитах. Метод Баха и Зубковой основан на определении количества переки- си водорода, разложенного каталазой за 30 мин. Активность каталазы рас- считывается по разнице между контролем и опытом, где перекись водоро- да частично разложена каталазой. Определение перекиси водорода прово- дится титрованием марганцовокислым калием в кислой среде. Реакцию можно выразить уравнением: 2КMnО 4 + 5H 2 O 2 + 3H 2 SO 4 = K 2 SO 4 + 2МnSO 4 + 8H 2 O + 5O 2 Ход исследования В две колбы наливают по 7 мл дистиллированной воды и по 1 мл крови (в разведении 1:1000). Содержимое одной колбы кипятят в течение 2 мин и охлаждают (контроль). Другую колбу (опыт) оставляют без изме- нений. В каждую колбу вносят по 2 мл 0,1 Н раствора перекиси водорода и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. После этого в обе колбы добавляют по 5 мл 10 %-ной серной кислоты и титруют содержимое 0,1 Н раствором КМnО 4 до появления розового окрашивания. Расчет: Активность каталазы выражается каталазным числом – ко- личеством перекиси водорода, которое разлагается 1 мл крови в течение 30 мин. На титрование контрольного раствора, где каталаза инактивирова- на кипячением и Н 2 О 2 сохранилась, идет больше перманганата калия, чем на титрование опытного раствора. Разность в результатах титрования соот- ветствует количеству разложенной Н 2 О 2. Грамм-эквивалент Н 2 О 2 равен 17 г (34:2). Следовательно, в 1 мл 0,1 Н раствора содержится 1,7 мг Н 2 О 2 . 1 мл 0,1 Н раствора перманганата калия эквивалентен 1 мл 0,1 Н раствора Н 2 О 2 . Умножая 1,7 на разность в объемах 0,1 Н раствора перманганата ка- лия, пошедшего на титрование контроля и опыта, получают каталазное число. Каталазное число в норме у человека составляет 10–15 единиц. |