46
лированной воды. Содержимое нагревают до температуры около 70°С, пере-
мешивают до полного растворения и охлаждают до 20
о
С.
Реактив 2 (раствор красителя). Навеску 4,6 г красителя «амидо черный
10 Б» помещают в колбу и добавляют в нее 200 см
3
воды, нагревают до 70°С
и перемешивают до растворения красителя. Раствор отфильтровывают через
бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 2000 см
3
. Фильтр промы-
вают водой до удаления следов красителя. Затем в эту колбу переносят реак-
тив 1. Содержимое колбы охлаждают и доливают водой до метки, закрывают
резиновой пробкой и перемешивают содержимое путем многократного пере-
ворачивания колбы. Если рН раствора не соответствует 2,3 ± 0,1, то добав-
ляют,
соответственно, концентрированную серную кислоту или гидроксид
натрия.
Техника анализа. В стеклянную пробирку пипеткой вносят 1 см
3
моло-
ка, приливают 20 см
3
раствора
красителя, закрыв пробирку резиновой проб-
кой, перемешивают ее содержимое, переворачивая пробирку от 2 до 10 раз,
не встряхивая. Пробирку помещают в центрифугу и центрифугируют в тече-
ние 20 мин. Затем отбирают пипеткой 1см
3
надосадочной
жидкости, поме-
щают в мерную колбу вместимостью 50 см
3
, доливают до метки дистиллиро-
ванной водой и перемешивают содержимое. Аналогичным способом разбав-
ляют рабочий раствор красителя в 50 раз. Он должен иметь оптическую
плотность 0,82 ± 0,02, если она не
соответствует данному значению, то до-
бавляют буферный раствор или раствор красителя.
На фотоэлектроколориметре или спектрофотометре в кювете с длиной
рабочей грани 10 мм при 590-600 нм измеряют
оптическую плотность раз-
бавленного раствора красителя по отношению к разбавленной надосадочной
жидкости. Массовую долю белка (%) вычисляют по формуле (34.3):
Б = 7,78 D – 1,34
(4.3)
где D − оптическая плотность;
7,78 и 1,34 – эмпирические коэффициенты.