Опыт I. Определение времени рекальцификации плазмы
Время рекальцификации плазмы - это время, в течение которого образуется фибрин в оксалатной плазме после добавления к ней хлористого кальция.
В пробирку вносят 0,2 мл 0,28% раствора хлористого кальция и добавляют 0,1 мл физиологического раствора. Смесь выдерживают в течении 60 сек на водяной бане при 37о С, затем добавляют к ней 0,1 мл оксалатной плазмы контрольного кролика.
Одновременно включают секундомер. Отмечают время появления хлопьев фибрина (начало образования сгустка), т. е. время рекальцификации плазмы. Аналогичное определение проводят с плазмой подопытного кролика.
Полученные результаты сравнивают и отмечают увеличение времени рекальцификации плазмы кролика с механической желтухой.
В норме время рекальцификации плазмы кролика составляет 1-2 мин и по своему значению эквивалентно времени свертывания крови.
Опыт 2. Определение протромбинового времени и расчет протромбинового индекса
Исследование протромбинового времени позволяет определить не только активность протромбина в крови, но также активность ускорителей превращения протромбина в тромбин, т. е. факторов V, VI, VII. Методы косвенного определения активности протромбинового времени основаны на том, что тромбин под влиянием тромбооластина в присутствии солей кальция превращается в тромбин, вызывающий образование фибрина (в виде сгустка).
Для исследования в пробирку, находящуюся на водяной бане, вносят 0,1 мл оксалатной плазмы контрольного кролика и 0,1 мл раствора тромбопластина. Через 30 мин прибавляют 0,1 мл 0,55% раствора хлористого кальция и одновременно пускают секундомер. При медленном покачивании пробирки отмечают время появления фибрина - протромбиновое время. Затем определяют протромбиновое время плазмы кролика с механической желтухой.
Результаты сравнивают и отмечают увеличение протромбинового времени у опытного кролика. Между временем появления сгустка фибрина и активностью протромбина существует обратно пропорциональная зависимость: чем меньше протромбиновое время, тем больше активность протромбина. Протромбиновый индекс определяется по формуле:
протромбиновое время (контроль)
х 100%
протромбиновое время (опыт)
В норме протромбиновый индекс составляет 80-100%. Его снижение наблюдается при всех заболеваниях, сопровождающихся нарушением синтеза протромбина, проакцелерина, прокон-вертина, при выраженной гипофибриногенемии, а также гипергепаринемии.
Анализируют полученные данные, делают выводы.
Опыт 3. Изучение коагулограммы крови у кроликов с механической желтухой
Коагулограмма - графическое изображение процессов свертывания крови и фибринолиза, основанное на изменении её электропроводности в зависимости от агрегатного состояния. Исследование проводят на коагулографе типа Н-334.
У контрольного и подопытного животного из краевой вены уха непосредственно перед записью коагулограммы берут кровь.
Во фторопластовую ячейку прибора вносят 0,28 мл исследуемой крови (до метки), ячейку закрывают крышкой, устанавливают в держателе термостата прибора, включают запись измерения электропроводности крови. При помощи специального устройства ячейка совершает качатель-ные движения, в результате чего кровь попеременно то замыкает, то размыкает электроды, скатываясь с них. По мере свертывания кровь стекает с электродов все медленнее и при окончании процесса свертывания электроды прекращают размыкаться. В зависимости от плотности сгустка толщина слоя над электродами будет меняться, что приводит к уменьшению сопротивления. Результаты исследования записываются как последовательные импульсы с частотой 6 раз в мин.
(Рис. 17- 18).
На коагулограмме определяют следующие параметры:
1. Начало свертывания крови — Т,, (мин, сек) - путем подсчета числа делений на диаграм-
мной бумаге от начала записи до первого импульса с уменьшенной амплитудой. Одно деление
на бумаге соответствует J мин, а 1 импульс - 10 сек.
Конец свертывания крови — Т2 (мин, сек) - путем подсчета числа делений на диаграмной бумаге от начала записи до первого импульса с минимальной амплитудой.
Плотность сгустка - Ао - по амплитуде импульсов (мм) в конце свертывания крови.
Начало ретракции и фибринолиза (Т3) измеряют от начала свертывания до первой увеличенной амплитуды после минимальной (мин, сек).
Суммарную величину фибринолиза и ретракции (Ам) - по амплитуде импульса (мм) через 10 мин после окончания свертывания крови.
Рассчитывают условную скорость фибринолиза и ретракции по формуле:
V— Ам—Ао/1 (мм/мин),
при t = 10 мин после окончания свертывания. Полученные результаты сравнивают, отмечают увеличение времени свертывания крови и активацию фибринолиза у кролика с механической
желтухой.
Достарыңызбен бөлісу: |