С. А. Корниенко А. В. Кривопалов
жүктеу/скачать 7.14 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Результаты и обсуждение Распределение простагландинов Е 2 и D 2 (PGЕ 2 и PGD 2
| Материалы и методы
Для выявления и изучения распределения иммунорегуляторных молекул в орга- низме плероцеркоидов использовали методы иммуноцитохимического окрашива- ния тканей с применением новейших методик и специально разработанных ориги- нальных прописей для выявления простагландинов. Готовые препараты исследова- ли с помощью флуоресцентных микроскопов Axioscope Carl Zeiss (Германия) и Axioscope Opton (Германия), лазерных сканирующих конфокальных микроскопов LSM-510 Meta (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany) и Leica TSC SPE (Гер- мания). Идентификация и количественная оценка простагландинов Е 2 и D 2 была проведена методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматог- рафии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектированием с использованием системы МилиХром А-02 (Эконова, Россия). Для более точной идентификации простаглан- динов в организме был применен метод масс-спектрометрического анализа с ис- пользованием время-пролетного масс-спектрометра Agilent 6200 TOF LC/MS (Agilent Technologies, США) с ионизацией электрораспылением. Подсчет абсолютного ко- личества живых лейкоцитов, а также субпопуляций гранулоцитов и лимфоцитов проводился методом проточной цитофлуориметрии при помощи проточного цитоф- луориметра FACS Canto II (BD, США). Измерение продукции реактивных форм кислорода лейкоцитами проводили методом люцигенин-зависимой хемилюминис- ценции при помощи многорежимного планшет-ридера Tecan Infinite 200 (Tecan, Switzerland). Результаты и обсуждение Распределение простагландинов Е 2 и D 2 (PGЕ 2 и PGD 2 ) в организме D. dendriticum и L. interrupta. Впервые у цестод была исследована микроанатомия PGE 2 -иммунореактивных (ИР) структур. PGE 2 -ИР области были выявлены в цент- ральном и периферическом отделах нервной системы плероцеркоидов D. dendriticum и L. interrupta. PGE 2 локализован в периферической цитоплазме нейронов главного нервного ствола и выходящих из него нервов, ядерная зона была негативно окраше- на на PGE 2 . Кроме того, позитивная иммунореакция на PGE 2 выявлена в отростках нейронов в нейропиле. Проведенные нами ультраструктурные исследования нервной системы плероцеркоидов позволяют предположить, что именно малые нейроны в кортикальном слое главного нервного ствола проявляют позитивную иммунологи- ческую реакцию на PGE 2 . PGE 2 -ИР участки были выявлены также на поверхности тегумента плероцеркоидов D. dendriticum и L. interrupta. Они были округлой, оваль- ной или неправильной формы. Двойное окрашивание на PGE 2 и б-тубулин выявило ко-локализацию большинства PGE 2 -ИР участков с сенсорными отростками нейро- нов (рецепторами) или протоками желез. В этом случае PGE 2 -ИР участки распола- гались на терминальных расширениях сенсорных отростков (сенсилл) или прото- ков желез. Остальные PGE 2 -ИР участки не были связаны с б-тубулин-позитивными элементами. Сходным образом, не все сенсорные отростки или протоки желез про- являли ко-локализацию с PGE 2 -ИР участками. Электронно-микроскопическое ис- следование выявило тесное расположение сенсилл и протоков желез в тегументе плероцеркоидов. Интенсивная PGE 2 -ИР была выявлена в терминальных клетках протонефри- дий (циртоцитах) плероцеркоидов D. dendriticum и L. interrupta; клетки были распо- Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке 74 ложены в кортикальной паренхиме и периферической части медуллярной паренхи- мы. Циртоциты имели продолговатую конусовидную форму с заостряющейся вер- шиной и закругленным основанием. Наиболее интенсивное окрашивание на PGE 2 наблюдалось в основании конуса. Ультраструктурное исследование циртоцитов выявило, что интенсивно окрашенные PGE 2 -ИР участки в основании конуса соот- ветствовали слою цитоплазмы вокруг ядра. Слабо окрашенные PGE 2 -ИР области соответствовали цитоплазме вокруг пучка ресничек. У L. interrupta, кроме того, интенсивная иммунная реакция на PGE 2 выявлена в цитонах тегумента. Эти участ- ки имеют округлую или овальную форму. Интенсивное окрашивание на PGE 2 выяв- лено в зоне перикариона тегументальных клеток; ядерная зона негативно окрашена на PGE 2 . Бульшая часть PGD 2 -позитивных участков была связана с мышечными клет- ками. PGD 2 -ИР была выявлена в кольцевых и продольных субтегументальных мы- шечных волокнах. Интенсивная PGD 2 -ИР наблюдалась в продольных мышечных волокнах в паренхиме. Двойное окрашивание на PGD 2 и фаллоидин выявило нало- жение PGD 2 -ИР и фаллоидин-позитивных участков. Окрашивание на PGD 2 было неоднородным: один конец продольных мышечных волокон был окрашен более интенсивно, чем другой и соответствовал ядерной саркоплазматической части клетки. Дорзовентральные и поперечные мышечные волокна в центральной части тела так- же имели PGD 2 -ИР. Кроме того, PGD 2 -позитивные участки были обнаружены в цир- тоцитах. Распределение PGD 2 -ИР в циртоцитах было сходным с распределением PGE 2 : более интенсивно окрашивался участок цитоплазмы вокруг ядра, менее ин- тенсивно — цитоплазма вокруг пучка ресничек. Таким образом, иммунорегуляторы PGЕ 2 и PGD 2 могут выделяться плероцер- коидами в ткани хозяина с поверхности свободных нервных окончаний и через про- токи фронтальных желез в тегументе, а также выделительную систему. жүктеу/скачать 7.14 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|