С. А. Корниенко А. В. Кривопалов

Материалы VI межрегиональной научной конференции, 4–6 сентября 2019
89
O. viverrini и C. ѕinensis (Pakharukova, Mordvinov, 2016; Shin et al., 2010). Проявле-
ние данного агрессивного вид рака неспецифическими симптомами, а также отсут-
ствие специфических маркеров ранней стадии, делает его трудным для диагности-
ки. Вследствие чего холангиокарцинома выявляется у пациентов довольно поздно,
что в итоге приводит к плохому прогнозу (Patel, 2011). Более того, из-за существую-
щей химио- и радиорезистентности этой опухоли, а также слабого ответа на лекар-
ственную терапию необходимы исследования для поиска нового эффективного ле-
чения и новых подходов (Banales et al., 2016).
Для исследований холангиокарциногенеза, ассоциированного с описторхозом,
используют общепринятую экспериментальную модель на хомячках при сочетан-
ном введении с диметилнитрозамином (Boonjaraspinyo et al., 2011; Songserm et al.,
2009). Также для разработки лекарственных препаратов применяются клеточные
линии. Основная масса работ проведена для O. viverrini-ассоциированной холанги-
окарциномы (Boonjaraspinyo et al., 2012; Puthdee et al., 2013). Существуют данные
об отличиях между O. viverrini и O. felineus, а также о вызываемых ими различиях в
патоморфологии печени (Lvova et al., 2012; Lvova et al., 2016). Для исследований
особенностей карциногенеза, ассоциированного с инфекцией O. felineus, была раз-
работана модель на хомячках (Maksimova et al., 2017). При том практически ничего
не известно о молекулярном механизме и особенностях экспрессии биомаркеров
холангиокарциногенеза, индуцированного этим видом печеночных сосальщиков.
В настоящий момент общепринятым молекулярным маркером холангиокар-
циномы при гистопатологическом описании является цитокератин 7, поскольку
именно этот вид кератинов экспрессируется в желчных протоках (Moll et al., 2008).
Также ведутся исследования по поиску потенциальных биомаркеров, экспрессия
которых увеличена при холангиокарциноме. Таким потенциальным биомаркером
является аннексин А1, который имеет множество функций, среди которых регуля-
ция клеточного роста, пролиферации и апоптоза (Hongsrichan et al., 2013). Помимо
этого, другим потенциальным биомаркером холангиокарциномы является экзосто-
син 1, который участвует в сигнальной трансдукции и вовлечён в начало развития
опухоли (Khoontawad et al., 2014). В дополнение виментин, участвующий в про-
грессии и метастазировании опухолей, рассматривают как маркер низкой выживае-
мости пациентов при дедифференцированной холангиокарциноме (Korita et al., 2010).
Поскольку клеточных линий, которые получены из холангиокарциномы, ассо-
циированой с инфекцией O. felineus, не описано, то целью этой работы являлось
создание клеточной линии этого вида опухолей и определение маркеров холангио-
карциномы.
Клеточная линия HamCCA-1 была получена из тканей холангиокарциномы
сирийских хомячков Mesocricetus auratus, находящихся под сочетанным влиянием
инфекции O. felineus и диметилнитрозамина (Maksimova et al., 2017). Клетки дан-
ной линии культивировались на среде DMEM/F-12 (1:1), содержавшей 10 % эмбри-
ональной бычьей сыворотки, при стандартных культуральных условиях и сохраня-
ли свою морфологию в течение более 6 месяцев. Клеткам были свойственны рост в
монослое, полигональная форма, высокое ядерно-цитоплазматическое соотноше-
ние, гиперхромность ядер. Также клетки обладали активной пролиферативной спо-
собностью и высокой скоростью миграции. При кариотипировании было обнару-
жено, что большинство клеток полиплоидны. Анализ дифференциально окрашен-
ных хромосом показал, что кариотип околодиплоидных клеток не соответствует

Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке
90
стандартному для M. auratus, и линия несёт множественные межхромосомные пе-
рестройки.
Туморогенность клеток HamCCA-1 была продемонстрирована аллотрансплан-
тацией на хомячках. Для этого хомячкам M. auratus вводили под кожу бедра суспен-
зию опухолевых клеток в разных дозах. Рост опухоли наблюдался с первой недели
после трансплантации у всех животных. Размер опухоли измеряли шесть недель (Potter
et al., 2018). Объём опухоли коррелировал с количеством введённых клеток. При гис-
тологическом исследовании трансплантированных опухолей было показано, что их
строение сходно с первичными холангиокарциномами в печени хомячков.
С помощью иммуноцитохимического анализа клеточной культуры определя-
ли стандартные и потенциальные маркеры холангиокарциномы. Было показано, что
клетки линии HamCCA-1 демонстрировали позитивное окрашивание на кератин 7,
аннексин A1, экзостосин 1 и виментин, что подтверждает происхождение данной
клеточной линии из холангиокарциномы.
Таким образм, эта модель может быть использована для изучения холангио-
карциногенеза, а также для поиска лечения холангиокарциномы и разработки мето-
дов ранней диагностики этого заболевания.
Работа выполнена при финансовой поддержке Бюджетного проекта ИЦиГ СО
РАН (0324-2019-0041).

жүктеу/скачать 7.14 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: