Структура и содержание рабочей учебной программы дисциплины I. Цели и задачи изучения дисциплины

Техника микроскопирования

При микроскопировании рекомендуется пользоваться следующими приемами:

1. Препарат помещают на предметный столик микроскопа и закрепляют его боковыми зажимами.

2. Вращая револьвер, устанавливают объектив малого увеличения 8х.

3. Находят правильное освещение препарата. Для этого, пользуясь плоским зеркалом, или светильником направляют свет от источника в конденсор микроскопа, стремясь получить равномерное освещение поля зрения. Лучшее освещение подбирают поднятием или опусканием конденсора и при помощи диафрагмы.

4. Находят изображение при малом увеличении (объектив 8х), фокусируя макрометрическим винтом.

5. Без поднятия тубуса, вращая револьвер, заменяют объектив малого увеличения (8х) на объективы большего увеличения (40х,90х).

а) При работе со средним увеличением (объектив 40х) диафрагму конденсора слегка приоткрывают, чтобы усилить освещение. Фокусируют при помощи микрометрического винта.

б) При использовании иммерсионного объектива (90х) открывают диафрагму конденсора, чтобы увеличить свет. На препарат наносят каплю иммерсионного (кедрового) масла. Затем, глядя на препарат сбоку (для контроля, чтобы не раздавить стекло и не поцарапать фронтальную линзу объектива), очень осторожно погружают объектив 90х в масло почти до соприкосновения с поверхность стекла, работая макрометрическим винтом. Далее очень медленно поднимают тубус при помощи макровинта до появления в поле зрения изучаемого объекта. Наконец, резкость изображения устанавливают микрометрическим винтом.

Изучаемые объекты, как правило, принято зарисовывать. Для этого препарат помещается в поле зрения микроскопа в положении наиболее удобном для зарисовки, что достигается передвижением предметного столика. Зарисовка производится по возможности точно в отношении размера, формы, расположения клеток бактерий, дрожжей, органов спороношения мицелиальных грибов и т.д.

2. Нельзя оставлять микроскоп на солнце или около зажженой горелки, т.к. может расплавиться канадский бальзам, которым склеены линзы в объективах.

3. Окончив просмотр препарата, сначала поднимают тубус, а затем снимают со столика препарат.

4. По окончании работы с микроскопом, подняв тубус и поставив объектив в удобное положение, осторожно, протирают его фронтальную линзу при помощи чистой мягкой хлопчатобумажной ткани или специальной фланели.

5. Особое внимание обращают на иммерсионный объектив, масло с поверхности которого удаляют указанной тканью, смоченной очищенным бензином или спиртом.

Нельзя допускать присыхания масла на объективе.

6. Особенно бережно необходимо относиться:

а) к микрометрическому винту - не делать полных оборотов.

б) к иммерсионному объективу, т. к. из-за короткого фокусного расстояния его фронтальной линзы, легко можно раздавить предметное стекло с препаратом, что может привести к появлению царапин на линзе.

• 
  Иммерсионная микроскопия наиболее часто применяется для изучения морфологии микроорга­низмов с использованием иммерсионного масла.
  

• 
  Исследование в тёмном поле применяют для микроорганизмов, кото­рые плохо воспринимают окраску или не красятся совсем (лептоспироа, вибрионы, спирохеты). Тёмное поле создаётся при помощи щелевого ультрамикроскопа, зетемнением в объективе или затемнением в конденсоре.
  

• 
  В основе фазово-контрастной микроскопии лежит явление изменения фаз световой волны, благодаря чему усиливается контрастность изображения объекта. Прозрачные и малоконтрастные биологичвские объ­екты выглядят при том черно-серыми на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на тёмном фоне (негативный контраст) иногда применяется для наблюдения за живыми объектами в раздавлен­ной, висячей капле или специальных микроскопах (размножение, фагоцитоз, движение, иммобилизация, взаимодействие бактерий и бактериофагов, влияние различных веществ).
  

• 
  Люминесценция - свечение, сопровождающееся выделением тепла или возникающее под влиянием источника энергии (световые, рентге­новские лучи, электрический разряд). Способность объектов светить­ся самостоятельно называется фотолюминесценцией. Вторичная или непрямая люминесценция возникает после окраски объектов флюорохромами. В качестве флюорохрома часто используют акридин жёлтый, акридин оранжевый, аурамин. Люминесцирующий микроскоп - это обыч­ный биологический микроскоп, оснащённый источником интенсивного ультрафиолетового света и светофильтрами. Люминесцентная микро­скопия используется для идентификации возбудителей, В -, Т - лим­фоцитов и их субпопуляций, для обнаружения иммунных комплексов в случаях аутоиммунных заболеваний.
  

• 
  Электронный микроскоп даёт возможность рассматривать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности опти­ческого микроскопа (0,2 мкм). Используется для визуального изу­чения вирусов и структур клетки. В качестве источника освещения используется поток электронов с длиной волны в I0^5-6 раз меньше длины волны спектра видимого света. Эти микроскопы дают увеличе­ние более чем в 200 000 раз и разрежающую способность до А (ангстрем равен 10⁸ см).
  

БАКТЕРИОСКОПЧЕСКИЙ МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________
Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________	Латинское название _______________ Материал________________________ Окраска_________________________

Тема: МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ.

ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ.

Цель: Изучить строение бактериальной клетки, функции и методы выявления отдельных органоидов.

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. 
   Основные морфологические группы бактерий. Отличия клеток прокариотов от эукариотов.
   

2. 
   Особенности морфологии хламидий, микоплазм, риккетсий, бактерий, грибов, актиномицетов, спирохет и простейших.
   
3. 
   Основные методы микроскопии. Методы изучения структуры бактериальных клеток и их практическое значение.
   
4. 
   Принципы классификации микроорганизмов.
   

Морфология бактерий - размер, форма и взаимное располо­жение бактериальных клеток.

Возбудителями инфекционных процессов у человека могут быть вирусы, хламидии, микоплазмы, рикетсии, бактерии, простейшие и грибы.

Вирусы - микроорганизмы, размером 1-800 нм в диаметре, не имею­щие клеточного строения, содержащие один тип нуклеиновой кислоты, абсолютные паразиты (размножаются только внутриклеточно).

Хламидии - микроорганизмы размером 8 - 1000 нм в диаметре, не имеющие клеточного строения, содержащие оба типа нуклеиновой кис­лоты» абсолютные паразиты.

Микоплазмы г. полиморфные микроорганизмы, размером от I нм до 10мкм, имеют два типа нуклеиновой кислоты, размножаются делением» не имеют клеточной стенки»

Риккетсии - полиморфные микроорганизмы, клеточного строения, размером от 0,5 до 10 мкм, не имеют дифференцированного ядра (прокариоты), размножаются делением, абсолютные паразиты.

Бактерии - прокариоты, размером от 0,5 до 10 мкм, размножаются делением.

Актиномицеты – имеют клеточную стенку, цитоплазматическую мембрану, нуклеотид, рибосомы и внутриклеточные включения. Они представляют собой нитевидные, ветвистые клетки, занимающие промежуточное положение между бактериями и грибами.

Простейшие - одноклеточные микроорганизмы размером от 5 до 80 мкм, имеют дифференцированное ядро, размножаются делением.

Грибы - одноклеточные или многоклеточные микроорганизмы от 5 до 1000 мкм, имеют дифференцированное ядро, размножаются спорами.

Морфологию микроорганизмов (размер, форма и взаимное располо­жение бактериальных клеток) изучают в нативных препаратах типа раздавленной капли, в охраненных и фиксированных мазках, используя иммерсионную систему объектива микроскопа.

ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ГРУППЫ БАКТЕРИЙ