Исследование на опиаты биологических объектов методом газовой

27 
При исследовании крови, учитывая высокую полярность морфина и 
низкие концентрации опиатов, большое значение имеет их анализ в виде 
дериватов, что позволяет улучшить хроматографическое разделение и 
увеличить чувствительность детектирования. Анализ литературных данных 
показывает, что для опиатов интерес представляют следующие способы 
дериватизации: 
1) ацетилирование – образование ацетилированных продуктов 
происходит в ходе реакции с уксусным ангидридом в присутствии безводного 
пиридина, играющего роль катализатора и акцептора кислых продуктов 
дериватизации; 
2) ацилирование – с использованием трифторуксусного ангидрида (ТФА). 
В ряде недавно опубликованных работ для дериватизации опиатов 
предлагается пропионовый ангидрид. 
Силилирующие агенты – N, O-бис (триметилсилил)-ацетамид (БСА), N, 
O-
бис (триметилсилил)-трифторацетамид (БСТФА) и N-метил (N-
триметилсилил)-трифторацетамид (МСТФА), использование которых описано 
в ряде работ по анализу опиатов в биологических объектах, могут загрязнять 
детекторы (ПИД, ЭЗД, масс-селективный детектор), отлагаясь в виде оксида 
кремния, кроме того, они легко подвергаются гидролизу, в том числе под 
действием спирта.
Следует отметить, что дериватизация опиатов ацетилированием не 
препятствует использованию одной хроматографической колонки для анализа 
недериватизованных 
и 
дериватизованных 
опиатов. 
Ограничением 
ацетилирования для опиатов является невозможность дифференцирования 
героина, 6-МАМ и морфина при их совместном присутствии, а также кодеина и 
6-
ацетилкодеина, так как они образуют один и тот же продукт – 
диацетилморфин в первом случае и ацетилкодеин – во втором.
Авторским коллективом Российского центра судебно-медицинской 
экспертизы предложены методики ГХ/МС-анализа как недериватизованных 
морфина и кодеина, так и виде ацетил- и ацилпроизводных. 
Метод ГХ/МС позволяет идентифицировать выделенные из крови 
морфин и героин на уровне нанограммовых количеств, например, морфин 
можно обнаружить на уровне 58 нг/мл. Идентификация осуществляется по 

28 
временам удерживания и масс-спектрам (рис. 3) с использованием электронных 
библиотек масс-спектров: NIST, Wiley, PMW Tox и др. 
В 
практике 
рутинного 
судебно-химического 
и 
химико-
токсикологического анализов количественное определение опиатов методом 
ГХ/МС не получило достаточно широкого распространения. Среди причин 
данного явления следует отметить отсутствие персонала, владеющим методом 
на достаточном уровне, несовершенство нормативной базы, следствием 
которого является невозможность использовать стандартные образцы 
исследуемых опиатов.
А 
Б 
В 
Г 
Рис. 3. Масс-спектры морфина (А), кодеина (Б), героина (В) и 6-МАМ (Г) 
Однако экспертом судебно-химического отделения Челябинского 
Областного бюро судебно-медицинской экспертизы А.Б. Мелентьевым 
разработана методика количественного определения морфина и кодеина в 
крови, которая успешно применяется в рамках деятельности данного бюро. В 
качестве внутренних стандартов используются гидрохлориды этилморфина и 
циклизина; дериватизация стандартов и анализируемых веществ производится с 
использованием пропионового ангидрида; пробы анализируются в режиме 
селективного ионного мониторинга (SIM). Предел обнаружения по морфину и 
кодеину составляет 0,02 мкг/мл, предел количественного определения – 0,05 

29 
кг/мл. Калибровочные графики линейны в диапазоне концентраций морфина и 
кодеина 0,05-0,2 мкг/мл.
ГЖХ может использоваться при анализе опиатов только в комбинации с 
другими методами. С использованием азотно-фосфорного детектора (ТИД) 
предел обнаружения морфина составляет 300 нг/мл, что значительно уступает 
методу ГХ/МС. В качестве внутренних стандартов при работе с ПИД 
используется метилстеарат, с ТИД – дифениламин. При идентификации 
внутренние 
стандарты 
необходимы 
для 
корректировки 
условий 
хроматографирования (по величине времени удерживания) и последующего 
входа в компонентную базу. Компонентной базой называется массив данных по 
временам удерживания стандартных образцов, с которым осуществляется 
сравнение времен удерживания анализируемых веществ. 
При химико-токсикологическом исследовании мочи методом ГЖХ с ПИД 
с морфином одним пиком элюируется фоновое вещество мочи – 
дегидроандростерон, который присутствует в любой моче в концентрациях от 
80 до 500 нг/мл. Данное явление может привести к массовым 
ложноположительным результатам при определении морфина методом ГЖХ с 
ПИД. По мнению С.А. Савчука, метод ГЖХ может быть использован для 
анализа больших содержаний морфина (от 500 нг/мл) только в сочетании с 
исследованием на ТИД. При этом обязательным является проверка 
подтверждающим методом ГХ/МС. Наличие внутренних стандартов позволяет 
проводить количественный анализ, хорошо воспроизводимые результаты 
получают при содержании морфина 500 нг и выше.

жүктеу/скачать 1.35 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: