Учебно методические материалы по подготовке к лабораторным и семинарским занятиям по курсу вирусологии

Таблица 5

Вируссодержащий материал в разведениях	Экспериментальные данные			Кумулятивные данные
	Погибло	Выжило	Процент летальности	Поги-ло	Выжило	Отношение числа погибших к числу зараженных	Процент летальности
10-1	4	0	100	16	0	16:16	100
10-2	4	0	100	12	0	12:12	100
10-3	3	1	75	8	1	8:9	90
10-4 (В)	3	1	75	5	2	5:7	71 (b)
10-5 (А)	1	3	25	2	5	2:7	28 (а)
10-6	1	3	26	1	8	1:9	10
10-7	0	4	0	0	12	0:12	0
10-8	0	4	0	0	16	0:16	0

Таким образом, ЛД₅₀ при указанном способе титрования вируса на мышах равна разведению 10^-4,5. Зная, что вируссодержащий материал использован в объеме 0,2 мл, можно высчитать концентрацию вируса в исходной вирусной суспензии. В 0,2 мл этой суспензии будет содержаться 10^4,5 ЛД₅₀. Значит, титр виру­са будет составлять: Т = 10⁴'⁵ ЛД_50/0,2 мл или 5 • 10⁴'⁵ ЛД_50/1 мл. Найдем абсолютное значение разведения, соответствующее 1 ЛЛ₅₀. В расчет принимают цифру 4,5. Число 4 показывает, что

абсолютной цифре должно быть 5 знаков (4 + 1). А антилогарифм цифры 4,50 составляет 3162. Но поскольку в ней только 4 знака значит пятый знак приписывают в виде 0 и получают 31620. Значит, для нашего примера 1 ЛД₅₀ равна разведению ви­руса 1:31620.

2. Метод Кербера. Этот метод считается более простым, не требующим расчета кумулятивных данных, пригоден и в случаях положительного эффекта от неспецифических причин. Но для получения достоверных результатов необходимо, чтобы положи­тельные данные были известны в диапазоне от 0 до 100%.

Рассчитаем ЛД₅₀ для результатов, приведенных в табл.5.

Разведение вируса Выжило Пало

10-¹ 0 4

10-² 0 4

10-³ 1 3

10-⁴ 1 3

10-⁵ 3 1

10-⁶ 3 1

10-⁷ 4 0

10-⁸ 4 0

ЛД₅₀ высчитываем по следующей формуле:

где D — высшее разведение вируса, еще дающее 100%-ный эффект; d — коэффициент разведения; п — количество заражен­ных тест-объектов на каждое разведение; r— количество поло­жительно реагирующих тест-объектов на каждое разведение;

— сумма отношений положительно реагирующих тест-объектов к зараженным для всех разведений, дающих эффект от 0 до 100%.

Подставляем в формулу значения, получим

Следовательно, в 0,2 мл вируса, разведенного 10^-4,5, содержится одна ЛД₅₀ вируса. Далее рассуждаем так же, как и при расчете по Риду и Менчу. Если lg ЛД₅₀ = -4,5, то ЛД₅₀ = 10^-4,5 или 1:10^4,5. Значит, в 0,2 мл вируса, разведенного 1:10^4,5, содержится 1 ЛД₅₀, а в 0,2 мл исходного вируса содержится таких доз больше в 10^4,5 раза, т.е. 10^4,5 ЛД₅₀. Значит, титр вируса в нашей, суспензии Т = 10^4,5 ЛД_50/0,2 мл, или 1 ЛД₅₀ равна разведению вируса 1:31620.

Титры гемаглютинирующих вирусов можно определить РГА .

1) определение индекса нейтрализации испытуемой сыворотки ;

2) определение максимального разведения испытуемой сыворотки, которое нейтрализует действие стандартной дозы вируса (см. РЗГА, РН и др. реакции).

В ходе самостоятельной работы студентов необходимо

1. Решить задачи по титрованию вирусов.

1. Контрольный опрос.

2. Объяснения преподавателя.

3. Демонстрация примера расчета титра вируса в ЭД₅₀ по фактическим данным.

4. Самостоятельная работа студентов по решению задач расчета титра вируса в ЭД₅₀.

5. Проверка правильности решения задач студентом и исправление ошибок.

6. Подведение итогов занятия.

7. Задание к следующему занятию.

Для занятия по расчету титра вируса в ЭД₅₀ необходимо заранее составить несколько (не менее 10) задач с фактически данными. Целесообразно составлять задачи с разными тест объектами и разным инфекционным действием, что способствует закреплению знаний в памяти студентов. Каждую задачу необходимо предварительно решить и иметь готовые ответы, что облегчит проверку.

Расчет титров вирусов можно выполнять как по Керберу, так по Риду и Менчу.

Вопросы домашнего задания

1. Иммунопрофилактика вирусных инфекций.

2. Сущность и техника постановки РГА.

3. Сущность и техника постановки реакции гемадсорбции.

1. Ветеринарная лабораторная практика. T.I .М.: Изд-во Колос, 1965.—240 с.

2. Лабораторные исследования в ветеринарии: Вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни; Справочник /Под ред. Е.И.Антонова. — М.: Агропромиздат, 1987. — 240 с.

3. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных. Справочник /В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Б.В.Соловьев, Н.В. Фомина, — М.: Агропромиздат, 1986. 351 с.

4. Методы вирусологии и молекулярной биологии. М. Мир. 1972-444 с.

5. Лурия С. и др Общая вирусология. М. Мир.1981.- 680 с

6. Практикум по общей вирусологии /И.Г-Атабеков, Т.Ю.Угарова, А.Ф.Бобкова и др. /Под ред. И.Г.Атабекова. — М.: Изд-во Моск. ун-та, 1981. — 192 с.

7. Руководство к практическим занятиям по ветеринарной вирусологии: Уч. пособие /Н.И.Смирнова,. В.М.Жавненко, В.И.Науменков, У.Е.Стародубцева /Под ред. Н.И.Смирновой и В.М.Жавненко. — М.: Высшая школа, 1980. — 128 с.

8. Соколов М.И, Синицкий А.А, Ремезов П.И. Вирусоло­гические и серологические исследования при вирусных инфекци­ях. М.; Медицина, Ленингр. отд-ние, 1972. — 215 с.

9. Топчий М-К., Корнюшенко Н.П. Руководство к практи­ческим занятиям по вирусологии. — М.: Изд-во Киевского ун-та, 1967.—246с.

10. Троценко Н. И., Белоусова Р. В., Преображенская Э.А, Практикум по ветеринарной вирусологии. —М.: Агропромиздат, 1989.—287с.

11. Штарке Г. Практическая вирусология. Пер. с нем. З.Ф. Богаутдинова и Я.С.Ландсберга /Под ред. В.Н.Сюрина. —М.: Колос, 1970.—362 с.