Учебное пособие для студентов естественных специальностей Павлодар (075. 8) Ббк 28. 080. 3 Я73 Б81
Приготовление питательной среды для культивирования нефтеокисляющей микробиоты
жүктеу/скачать 10.85 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- 6.5 Выделение нефтередуцирующей микробиоты
- 6. 6 Представители нефтередуцирующей микробиоты
6.4.3 Приготовление питательной среды для культивирования нефтеокисляющей микробиотыПитательные среды, жидкие или плотные, применяются для выращивания в лабораторных или промышленных условиях бактерий, дрожжей, микроскопических грибов, водорослей, простейших, вирусов и культур растительных или животных клеток. Синтетические питательные среды состоят из определённых наборов органических и неорганических соединений, которые служат источниками углерода, азота, фосфора, серы, калия, натрия, микроэлементов и других необходимых компонентов. К сложным органическим питательным средам относятся мясо - пептонный бульон, пивное сусло, молоко и другие продукты. Все питательные среды предварительно стерилизуют в автоклаве. В зависимости от количества необходимой среды, берут соответствующую стеклянную емкость для питательной среды. При больших объемах, приготовление среды упрощается, так как исчезает необходимость взвешивания микро количеств веществ. Для выделения и размножения ассоциации нефтеокисляющих микроорганизмов можно использовать среду следующего состава: Синтетическая среда, включающая макроэлементы - NH4H2PO4 - 10,0 г/л, K2 HPO4 - 10,0 г/л, Mg SO4* 7H2O - 0,7 г/л, и микроэлементы FeSO4 * 7H2O – 12,5 мг/л, MnSO4 * 5H2O – 12,5 мг/л, ZnSO4 * 7H2O – 12,5 мг/л, NaCl – 6,3 мг/л. рН среды ближе к нейтральной. В качестве источника энергии и углерода добавляют углеводороды идентичные загрязнителю. Для работы с высокопарафинистыми нефтями можно использовать питательную среду для культивирования микроорганизмов, разлагающих парафин: NaNO3 – 2.0 г/л, K2 HPO4 - 1,0 г/л, Mg SO4* 7H2O - 0,5 г/л, Fe2 (SO4)3 – 0,01 г/л, MnCl2 – 0,008 г/л, ZnSO4 – 0,002 г/л, 1 литр дистиллированной воды, агар – 20 г. До застывания разлитой в чашки Петри среды, в каждую чашку добавляют 2 – 3 капли парафина. Для приготовления питательной среды, в емкость большего объема, чем необходимо для приготавливаемого раствора, наливается более половины дистиллированной воды и последовательно, как приведено в прописи растворяются указанные вещества. После того, как все ингредиенты растворены, вливается до нужного количества остальная дистиллированная вода. Приготовленный питательный раствор разливается в конические колбы, как это показано на рисунке 40., колба закрывается стерильной марлево - ватной пробкой, препятствующей проникновению микроорганизмов и стерилизуется. 6.5 Выделение нефтередуцирующей микробиотыВ связи с характером загрязнения определяется стратегия проведения рекультивационных работ, включающая на первом этапе сбор избытка нефтепродуктов, при возможности их вторичного использования. Выделение ассоциаций микроорганизмов проводится на участках почв со сравнительно невысоким уровнем загрязнения, обеспечивающим возможность развития нефтередуцирующих микроорганизмов. При проведении практических работ по выделению и наработке биомассы углеводородокисляющих организмов чаще всего использовалась среда следующего состава: NH4H2PO4 - 10,0 г/л, K2 HPO4 - 10,0 г/л, Mg SO4* 7H2O - 0,7 г/л, и микроэлементы FeSO4 * 7H2O – 12,5 мг/л, MnSO4 * 5H2O – 12,5 мг/л, ZnSO4 * 7H2O – 12,5 мг/л, с добавлением нефтепродуктов, аналогичных по своим характеристикам углеводородам в почве. Почву, загрязненную нефтепродуктами, концентрациями не вызывающими угнетения, отобранную, как было описано в предыдущем разделе, помещают в колбу (рисунке 40.) с предварительно приготовленной средой. Наработка биомассы нефтеокисляющих микроорганизмов на первом этапе проводится на качалках (рисунке 41.) в конических колбах, по стандартной методике, при 200-240 об/мин, и температуре 221 0С, в течение трех суток. 
Выросшую культуру контролируют на способность к биодеструкции посевом на среду с нефтепродуктами в аэробных условиях. Скорость деструкции определяется по интенсивности разрушения пленки углеводородов с контролем биотестированием или приборными методами. При необходимости определяется видовая принадлежность микроорганизмов, после роста их колоний на твердом субстрате в чашке Петри. Выделенную культуру сообщества микроорганизмов с удовлетворительной скоростью окисления алканов нефти используют в качестве посевного материала для получения биомассы клеток. Для этого колбы с такой же средой засевают полученной культурой из расчета 3-5 % посевного материала от объема среды и выращивание микроорганизмов проводят при тех же условиях в течение семи суток. 
Полученная на этой стадии культура микроорганизмов используется для наработки биомассы на почвенных площадках при ее титре не ниже одного миллиарда клеток на миллилитр препарата. 6. 6 Представители нефтередуцирующей микробиотыВ природе углеводородокисляющая микрофлора в основном представлена следующими родами: бактерий Rhodococcus, Corynebacterium, Nocardia, Arthrobacter, Acinetobacter, Micrococcus, Pseudomonas; дрожжей Candida, Trichosporon; грибов Penicilinum, Aspergillus. Микроорганизмы, окисляющие углеводороды, широко распространены в почве, воде и на дне морей. Одним из важнейших условий использования микроорганизмами нефти является присутствие воды. Окисление углеводородов производят: Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter sp., Aeromonas sp., Amycolata hydrocarbonoxydans, Arthrobacter globiformis, Arthrobacter sp., Azotobacter vinelandii, Bacillus sp., Corynebacterium sp., Flavobacterium sp., Micrococcus sp., Mycobacterium flavescens, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas sp., Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Rhodococcus sp. и другие. Ароматические соединения окисляют: Azotobacter chroococcum, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas putida, Rhodosporidium sp., Leucosporidium sp.. В редуцировании асфальта принимает участие Amycolata autotrophica. Деструкцию бензапирена производят представители Pseudomonas sp.. жүктеу/скачать 10.85 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|