Управление биологической активностью почв

УДК: 593.2.413

В литературе мы, также, не встретили сведений о связи возраста птицы и процента отхода инкубации. Мы в своих исследованиях изучили причины отхода инкубации яйца, полученного от индеек в возрасте одного года, двух и трех лет.

От качества инкубационного яйца зависит жизнеспособность молодняка, особенно в ранний период постфетального онтогенеза. Для того чтобы обосновать оптимальные сроки использования птицы для племенной работы, необходимо знать о влиянии возраста индейки на качество инкубационного яйца. О влиянии возраста индеек на качество инкубационного яйца и сохранность молодняка, полученного от птицы различного возраста в научных публикациях исследователей ближнего и дальнего зарубежья сведений мы не нашли.

Для исследования качества инкубационного яйца, полученного от индеек различного возраста были сформированы три опытные группы индеек: 1 группа – индейки в возрасте 1 года, 2 группа – в возрасте 2 года, 3 группа – в возрасте 3 года. Индейки содержались в одинаковых условиях, были клинически здоровы. Перед инкубацией проведен биологический контроль инкубационного яйца. Определяли следующие показатели: масса яйца, индекс формы, каратиноиды, толщина скорлупы, индекс белка и желтка (1).

Индейки каждой возрастной группы находились в отдельном помещении. На протяжении периода инкубации биологический контроль яйца проводился в установленные сроки. По окончании инкубации провели анализ отхода инкубационного яйца. Полученные данные обработаны математическими методами.

Материалом исследований. Для выявления возраста птицы, несущей наиболее пригодное для инкубации яйцо, изучено качество инкубационного яйца. Всего на инкубацию было заложено 2592 яйца. полученных от индеек, разводимых на индюшиной ферме пос.Викторовский Тарановского р-на Костанайской области.

Биологический контроль яйца, проведенный до инкубации позволил установить, что яйцо, полученное от индеек всех возрастных групп, имело правильную форму, чистую, гладкую скорлупу, воздушную камеру в тупом конце яйца, или чуть смещенную в сторону. Желток занимал центральное положение или был немного смещен к воздушной камере, малоподвижен при вращении яйца. Показатели качества инкубационного яйца в опытных группах отличались, но были в пределах допустимых требований. Как показали результаты наших исследований, яйцо, полученное от индеек двухлетнего возраста по массе, индексу яйца, содержанию каратиноидов имело более высокие показатели, чем у индеек в возрасте одного года и трех лет.

Следует заметить, что по другим критериям качества яйца показатели (условный брак, не пригодные к инкубации, индекс белка и желтка (%), оплодотворенность (%)) в группе индеек двухлетнего возраста уступали таковым в группах индеек в одно- и трехлетнем возрасте. В общем, во всех возрастных группах инкубационное яйцо было высокого качества. В группе индеек двухлетнего возраста процент условного брака и процент яиц, не пригодных к инкубации, был выше, чем у годовалых и трехлетних индеек. Но, в целом, количество не кондиционных яиц во всех группах не превышало установленной нормы.

На основании анализа результатов исследований нами установлено, что отход инкубационного яйца в 1 группе составил – 25,09 %, во второй группе – 11,47 %, в третьей группе – 32,7 %. Таким образом, вывод индюшат в 1 опытной группе составил 74,01 %, во второй – 88,53 %, в 3 группе – 67,3%.

Для выявления причин отхода инкубации было вскрыто в среднем по 33 % отхода инкубационных яиц.

Результаты вскрытия отходов инкубации, выраженные в процентном отношении к числу общего отхода инкубации, представлены в таблице 13. Поскольку в число неоплодотворенных яиц входят яйца с зародышами, погибшими в первые 48 часов инкубации, до развития в желтке кровеносной системы, то для установления истиной оплодотворенности учитывали яйца 48.

В результате проведенных исследований установлено, что выводимость индюшат в трех опытных группах отличалась и составила: в 1 группе 74,01 %, во второй – 88,53 %, в 3 группе –67,3 %.

Результаты вскрытия отходов инкубации, выраженные в процентном отношении к общему количеству яиц, представлены на рисунке 2

Таким образом, нами установлено, что во всех опытных группах инкубационное яйцо было высокого качества. Яйцо, полученное от индеек двухлетнего возраста по массе, индексу яйца, содержанию каратиноидов имело более высокие показатели, чем у индеек в возрасте одного года и трех лет. Следует заметить, что по другим показателям в группе индеек двухлетнего возраста показатели качества яйца уступали таковым в группах индеек в одно- и трехлетнем возрасте. У индеек двухлетнего возраста процент условного брака и процент яиц, не пригодных к инкубации, был выше, чем у годовалых и трехлетних птиц. Но, в целом, во всех возрастных группах инкубационное яйцо было высокого качества, а количество не кондиционных яиц не превышало установленной нормы.

Отход инкубации у индеек в возрасте одного года был больше, чем у двухлетних индеек. Этот показатель снижается у двухлетних индеек, а затем снова повышается при достижении индейками трех летнего возраста. Самый высокий процент не оплодотворенных яиц был в группе индеек в возрасте одного года. У двух летних индеек этот показатель был в два раза ниже, а в трех летнем возрасте снова отмечено повышение процента не оплодотворенных яиц. Гибель эмбрионов во всех возрастных группах произошла, в основном, в результате нарушений условий инкубации. Самый высокий процент слабых эмбрионов, не сумевших проклюнуться, наблюдался в группе индеек в возрасте одного года. В группе индеек в возрасте двух лет этот показатель значительно ниже. В группе индеек трехлетнего возраста процент слабых эмбрионов начинает повышаться. Это дает нам основание заключить, что использование индеек в птицеводстве возможно до трех летнего возраста, а не только до окончания первой яйцекладки. Таким образом, максимальные показатели оплодотворенности яиц, более высокие инкубационные качества и жизнеспособность эмбрионов отмечены у индеек в возрасте двух лет. В связи с выше изложенным, считаем возможным обосновать сроки использования птицы для получения инкубационного яйца высокого качества до трехлетнего возраста. Дальнейшее использование индеек для получения инкубационного яйца не целесообразно в связи с начинающимся снижением качества инкубационного яйца у индеек трехлетнего возраста.


СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Дядичкина, Л. Ф. Руководство по биологиче­скому контролю при инкубации яиц сельскохозяйственной птицы / Л. Ф. Дядичкина, Н. С. Позднякова и др. – Сергиев Посад. – 2001.
2. Молдажанов, А. К. Некоторые резуль­таты оценки инкубационных качеств яиц уток кросса арман / А. К. Молдажанов, А. К. Таджиева, И. В. Ильницкая // Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. – Алматы : Бастау. – 2006. – № 1. – С. 51-53.
3. Чупина, Л. В. Влияние температурного фактора и срока хранения на качество яиц / Л. В. Чупина, А. Ф. Бакшеев, Н. С. Хрусталева, О. А. Чупина, К. А. Дементьева // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Мат. Сибирской междунар. науч.-практ. конф. НГАУ. – Новосибирск. – 2004. – С. 393.
4. Романов, А. Л. Птичье яйцо / А. Л. Романов, А. И. Романова. – М. : Птицепромиздат. – 1959. – 620 с.
5. Прево, А. А. Разведение индеек / А. А. Прево, З. А. Жидких. – М. : Колос. – 1958. – 97 с.

УДК: 619:612.616:636.3.082.232

1) разработать и выяснить оптимальные дозы биопрепаратов, с целью их дальнейшего применения в овцеводстве.

2) определить гонадотропную сыворотки крови и мочи валухов наряду с известным препаратом активность ХЧГ (хорионический гонодотропин человека).

Из данных литературы известно, что гонадотропные гормоны обеспечивают развитие и созревание фолликулов, овуляцию, развитие желтого тела беременности, биосинтез и секрецию половых гормонов. После менопаузы продукция и выделение гонадотропинов резко возрастает, а при кастрации самцов содержание ФСГ (фаликуло стимулирующий гормон) в крови повышается [3], при беременности плацента человека продуцирует гонадотропин хорионический гормон близкий к ЛГ (лютеинизирующий гормон) [4]. В дополнение одним из основных направлений наших исследований было определение гонадотропной активности сыворотки крови, мочи кастрированных самцов с известным препаратом ХЧГ (хорионический гонадотропин человека) и применение этих биопрепаратов в овцеводстве.

Опыты проводили на мышах одинакового возраста и веса. Для определения фолликулостимулирующей активности использовали тест увеличения яичников у инфантильных мышей по методу brown (1956) и loqe (1969). Инфантильным самкам три раза с интервалом в 24 часа вводили мочу и сыворотку крови валухов в нескольких разведениях от 0,1 до 1,1 мл., после чего через 100 часов убивали опытных животных и определяли вес яичников (рисунок 1). Двукратное увеличение веса яичников брали за 1 единицу фолликулярной активности.

1. С увеличением дозы лютенизирующей активности с 10 до 100 у.е. в яичниках крыс уменьшилось содержание аскорбиновой кислоты в 5,6 раза, что свидетельствует об овуляции.

2. При изучении теста на биопрепарат из мочи и сыворотки крови валухов установили минимальную пороговую дозу 3 м.е., вызывающих рост и созревание фолликулов у мышей без овуляции.

3. При определении пороговой дозы ХЧГ, вызывающая овуляцию установлена пороговая доза 0,32 м.е.

2. Туребеков, О. Т. Практические мероприятия по повышению плодовитости овцематок / О. Т. Туребеков, Б. К. Ильясов. – Вестник СГУ имени Шакарима. – 2006.

3. Жмахина, К. Н. Гинекологическая эндокринология / К. Н. Жмахина. – Москва : Колос. – 1976.

4. Савченко, О. Н. Гормоны яичника и гонадотропные гормоны / О. Н. Савченко – Ленинград : Лениздат. – 1967.

УДК: 636.082.12

Темпы генетического улучшения молочного стада на 85-90 % определяется племенной ценностью используемых в воспроизводстве быков-производителей. Следовательно, оценка их генетических качеств является одним из главных звеньев племенной работы в молочном скотоводстве. Племенная ценность производителя характеризуется рядом признаков и показателей.

Совершенствование методов оценки животных, их отбора в основные селекционные группы, научное обоснование подбора и интенсивности использования производителей, имеющих лучшие, генетически обусловленные хозяйственно-полезные признаки – важнейшая задача сельскохозяйственной биологии.

Анализ отечественной и иностранной литературы свидетельствует, что применение новых генетических методов оценки племенных животных является в настоящее время доступным. Особого внимания заслуживает полиморфизм длин рестриктных фрагментов (ПДРФ), определяемый при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) [2, 3, 4].

Современные методы молекулярной генетики позволяют исследователям определить пол эмбриона, что очень важно особенно при использовании трансплантации эмбрионов у коров, также вести отбор животных по каппа-казеину молока у крупного рогатого скота.

Установлено, что каппа-казеин является единственным кальций независимым белком казеиновой фракции, главная роль которого представлена стабилизатором казеиновых мицелл в растворе. В отличие от других казеинов, каппа-казеин не фосфорилируется, а гликолизируется, что и обеспечивает его независимость от ионов кальция. Различная степень гликолизирования, вызванная гетерогенностью генетических вариантов А и В, распространяет свое влияние на физико-химические свойства молока.

Исследованиями [4, 5] установлено, что наиболее желательным типом по гену каппа-казеина являются животные, несущие гомозиготный аллель типа ВВ, а затем АВ. Молоко животных с генотипом ВВ больше пригодно для сыроварения. Задача селекционной работы заключается в том, чтобы выявить племенных животных с генотипом ВВ.

Для решения указанной задачи сейчас успешно применяют полимеразную цепную реакцию. Идея метода и ее выполнение очень просты. Сначала синтезируется два дезоксинуклеотида длиной 20-30 оснований, представляющие собой концевые последовательности интересующего фрагмента ДНК. Полярность выбрана так, чтобы после отжига их направления 5^/ – 3^/ были обращены друг к другу. Избыточное количество этих олигонуклеотидов смешивают с геномной ДНК и смесь нагревают для денатурации последней. Снижение температуры приводит к реассоциации олигонуклеотидов с гомологичными участками геномной ДНК. Затем проводят наращивание цепи при участии ДНК-полимеразы и дезоксирибонуклеозидтрифосфатов (dATP, dGTP, dCTP, dTTP). Такая последовательность реакции денатурации, реассоциации и наращивания цепи повторяется 30-35 раз.

В настоящее время известна нуклеотидная последовательность гена каппа-казеина и синтезированы праймеры. Обычно для определения генотипа быков используют ДНК, выделенную из спермы. Мы попытались упрастить эту процедуру и использовали для амплификации в качестве матрицы ДНК фиксированную на фильтрованной бумаге. Пятно крови на фильтрованной бумаге находилось в комнатных условиях 10-15 дней. Таким образом, в качестве источника ДНК мы использовали пятно крови, высушенное на фильтрованной бумаге [6].

В другом опыте для амплификации использовали ДНК, выделенную из спермы быков-проиводителей. ДНК для амплификации выделяли из замороженной спермы быков-производителей по методу Bahnak [7]. Центрифугировали 1 мл спермы в течение 5 минут при 4000 g. Осевшие клетки промывали 0,15 М раствором NaCI, 2мМ ЕДТА и центрифугировали в течение 5 минут при 4000 g. Эту процедуру повторяли еще два раза. Затем, после последнего центрифугирования верхний слой отсасывали с помощью пипетки, а к осадку добавляли лизирующий буфер Bahnak в количестве 5 мл, имеющий следующий состав: 6М гуанидинтиоцианат, 25 мМ цитрат натрия рН 7,0, 0,5 % Sarcosyl, 0,1 М 2-меркаптоэтанол и инкубировали при 37 ⁰С в течение 30 минут. Перед депротеинизацией лизированный раствор ДНК разбавляли 0,15 М раствором NaCL в соотношении 1:4. Депротеинизацию осуществляли по обычной методике, путем добавления равного объема смеси фенол-хлороформ-изоамиловый спирт (24:24:1). После центрифугирования осторожно отсасывали верхний слой пипеткой и осаждали в двух объемах 96 % этилового спирта. Высушивали ДНК 2-5 минут под вытяжным шкафом и растворяли в буфере ТЕ.

Полимеразную цепную реакцию для генотипирования быков-производителей по локусу каппа-казеина проводили по методике Medrano J.F. et al [8] с применением праймеров с последовательностью: JK501 5^/–ATCATTTATGGССATTCCACCAAAG–3^/ и JK 302 5^/–AGACAATGT-CTCTTCCGCTTTACCCG-3^/. Брали соскоб из пятна крови и помешали в реакционную среду конечного объема 50 мкл, содержащую 50 мМ трис KCI, 20 мМ трис HCI, рН 8,4, 25 мМ MgCI₂, 0,1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина – БСА, 4 дНТФ (1,5 мМ каждый), олигонуклетидные праймеры в концентрации 0,8 мкг/мл каждый. Использование данного набора праймеров позволил амплифицировать участок ДНК, длиной 350 пн. Количество циклов устанавливали 35 при режиме: 94 ⁰С денатурация, 55 ⁰С – отжиг праймеров и 72⁰С – элонгация, 60:60:60 секунд. Оптимальный состав буфера для проведения полимеразной цепной реакции: 10х 500 мМ калия хлорида, 100 мМ Трис HCI (рН 8,3), 15 мМ магния хлорида и 20 мг/мл БСА. В состав реакционной смеси в объеме 50 мкл входили следующие компоненты: 300-500 ng геномной ДНК, 10мМ смесь dNTP, 6 пика моли каждого праймера, 5 мкл 10х вышеуказанного буфера, 2,5 ед. фермента Tag Polymerase. Результаты амплификации проверяли электрофорезом в 4 % агарозе, окрашенной бромистым этидием. Обнаружение фрагмента размером 350 пн свидетельствовал об успешной амплификации. Продукт рестрикции подвергали электрофорезу при режиме: напряжение 180 В, сила тока 150 мА, мощность 50 Вт и продолжительность 45-60 минут. Установлено, что после рестрикции Hinf I у животных с генотипом АА образуется 2- бэнда, размерами 266 и 84, с генотипом АВ -3 бэнда, размерами 266, 132 и 84 и с генотипом ВВ – 2 бэнда, размерами 266 и 132 пар оснований.

Нами были протестированы образцы ДНК 17 быков-производителей алатауской породы, принадлежащих хозяйствам Алматинской области и установлена частота генетических вариантов аллелей гена каппа-казеина молока ВВ – 1, АВ – 10 и АА – 6.

Следует отметить, что в зависимости от цели и задачи эксперимента для генотипирования быков производителей методом полимеразной цепной реакции можно использовать в качестве источника ДНК, пятно крови. Использование пятна крови, фиксированного на фильтровальной бумаге значительно облегчает процедуру проведения полимеразной цепной реакции и расширяет возможности применения этого метода для генотипирования племенных животных в большом масштабе.