Тема: Санитарно-микробиологические исследования воды, почвы и воздуха. 2. Цель

Для санитарно-гигиенической оценки воды используются два микробиологических показателя: общее коли­чество бактерий в воде и коли-индекс, которые определяются в соответствии с ГОСТ 18963-73 «Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа».

Общее количество бактерий – это количество колоний аэроб­ных и факультативно-анаэробных мезофильных сапрофитных бактерий, вырастающих при посеве 1 мл неразбавленной воды на мясопептонном агаре (МПА) за 24 ч при 37 °С.

Для оценки качества воды наиболее важное значение имеет  не „общее количество бактерий, а наличие в ней патогенных микроорганизмов. Микробиологическим показателем загрязнен­ности воды патогенными бактериями кишечной группы служит коли-индекс. В соответствии с ГОСТ 2874—82 «Вода питьевая гигиенические требования и контроль за качеством» общее ко­личество клеток бактерий в 1 мл воды должно быть не более 100, а коли-индекс - не более 3 в 1 л.

Анализ воды проводится при пользовании городским водо­проводом 1 раз в квартал, а при наличии собственных источни­ков водоснабжения - 1 раз в месяц.

Выявление патогенных микроорганизмов в воде (возбуди­телей брюшного тифа, холеры и дизентерии) осуществляется местными санитарно-эпидемиологическими станциями только по эпидемиологическим показателям.

Вода открытых морских и пресноводных водоемов, как и почва, является естественной средой обитания разнообразных бакте­рий, грибов, вирусов, микроскопических водорослей, простейших.

В водоемах различают собственную (аутохтонную) и заносную (аллохтонную) микрофлору, поступающую из почвы, воздуха, живых организмов. В воде, как и в почве, происходят биологические про­цессы очищения от несвойственной (аллохтонной) микрофлоры.

Концентрация водных микроорганизмов определяется главным образом содержанием в воде органических веществ. Наиболее чисты грунтовые подземные воды, так как после просачивания через почву большинство микробов задерживается в фильтрующем слое. Значительно больше микробов в открытых водоемах, что связано с высоким содержанием растворенных питательных органических веществ, которые поступают со сточными и канализационными водами, отходами предприятий. Сегодня в реки, озера, моря выбрасывается такое количество сточных вод с микробами и огромным количеством орга­нических веществ, что вода не успевает самоочищаться. В 1 мл такой воды количество микробов может достигать нескольких миллионов. Вода имеет важное санитарно-эпидемиологическое значение как фактор передачи возбудителей многих инфекций, особенно кишечных (брюшного тифа, дизентерии, сальмонеллезов, холеры, гепатита А, полиомиелита), которые с испражнениями больных и носителей посту­пают в открытые водоемы, а оттуда нередко и в питьевую воду.

Хотя вода не особенно благоприятна для патогенных и условно-патогенных микробов, многие из них способны переживать в ней определенное время. Сроки выживания патогенных микробов в воде зависят главным образом от их вида и концентрации микробной взвеси, температуры воды и содержания органических веществ.

Споры возбудителя сибирской язвы годами могут сохраняться в воде; месяцы переживают в воде сальмонеллы, лептоспиры, вирусы полиомиелита и гепатита А. Меньше (дни, недели) выживают возбудители дизентерии, холеры, бруцеллеза, туляремии, условно-патоген­ные энтеробактерии. В теплое время года благодаря большей актив­ности процессов самоочищения воды продолжительность жизни бактерий короче, в холодной воде соответственно дольше. Во льду возбудители кишечных инфекций могут сохраняться в течение нескольких недель и месяцев.

Санитарно-микробиологическое исследование воды прово­дится с целью текущего надзора, т.е. в плановом порядке, а также по специальным эпидемиологическим показаниям. Основными объектами такого исследования являются:

• 
  питьевая вода централизованного водоснабжения (водопровод­ная вода),
  
• 
  питьевая вода нецентрализованного водоснабжения,
  
• 
  вода поверхностных и подземных водоисточников,
  
• 
  сточные воды,
  
• 
  вода прибрежных зон морей,
  
• 
  вода плавательных бассейнов.
  

Почвы являются важнейшей средой и природным резервуа­ром обитания микроорганизмов. Вместе с растениями и животными составляют сложные и многообразные биогеоценозы, состав, плотность, функциональная активность и прочие характеристики которых зависят от типа и структуры почвы, состава минеральных и органических веществ, физико-химического состояния, температуры, рН, влажности, концентрации углекислого газа, других факторов.

В слое пахотной почвы толщиной 15 см на площади в 1 га может держаться от 1 до 5-6 тонн микробной массы. Она максимальна на глубине 10-20 см. На глубине свыше 1-2 м микроорганизмы уже встречаются в незначительном количестве, начиная с 5-6 м, почва может быть стерильной.

Патогенные микроорганизмы чаще всего попадают в землю с испражнениями, мочой, гноем, мокротой, слюной и другими выделениями, с трупами людей и животных, погибших от инфекционных заболеваний. Патогенные и условно-патогенные микробы контаминируют почву при сбросе фекально-бытовых и сточных вод различных предприятий.

Сроки переживания патогенных для человека микробов в почве широко варьируют. Не спорообразующие бактерии – возбудители дизентерии, брюшного тифа, холеры, чумы, бруцеллеза, туляремии, туберкулеза – выживают в почве от нескольких дней до нескольких месяцев. Споры возбудителей столбняка, сибирской язвы, газовой ган­грены могут сохраняться много лет. Более того, для спорообразующих бактерий рода Clostridiumпочва является естественной средой оби­тания. Поэтому попадание земли в раны чревато возникновением газовой гангрены или столбняка. Размножение в пищевых продуктах С. botulinum таит смертельную угрозу отравления ботулотоксином.

Отмирание патогенных бактерий в почве обусловлено недостат­ком влаги, отсутствием необходимых питательных субстратов, анта­гонизмом почвенных микробов, действием солнечных лучей.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы проводят с целью предупредительного санитарного надзора (выбор места для строительства детского сада или игровой детской площадки), теку­щего санитарного надзора и по эпидемическим показаниям (при рас­следовании причин вспышек инфекционных заболеваний и послед­ствий экологических аварий).

В зависимости от задачи анализ может быть кратким или расширенным. При проведении текущего санитарного надзора ограничиваются установлением факта и оценкой степени фекального загрязне­ния почвы. Почвы с преобладанием бактерий, свидетельствующих о фекальном загрязнении, рассматривают как санитарно неблагополуч­ные. Для определения давности фекального загрязнения почвы опре­деляют несколько санитарно-показательных микроорганизмов. При­сутствие в почве определенных концентраций кишечной палочки (Е. coli) и фекального стрептококка (Streptoccocusfaecalis) указывает на свежее, бактерий родов Citrobacter и Епtеrоbасtеr – на несвежее, а Clostridium perfringens – на давнее фекальное загрязнение.

Санитарно-микробиологическое исследование почвы с целью пре­дупредительного надзора проводят по расширенному перечню показа­телей. Определяют коли-индекс – количество бактерий группы кишеч­ной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титр – наименьшую массу почвы в граммах, в которой обнаруживаются осо­би Clostridium perfringens, общую численность сапрофитных, термо­фильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

При интерпретации результатов исследования руководствуются нормативными документами, в которых учитываются не только об­щие критерии оценки, но и состав почвы, климатическая зона, дру­гие факторы. Единого стандарта санитарно-микробиологической оцен­ки почв нет.

Для сани­тарно-гигиенической оценки воздуха закрытых помещений определяют два показателя.

Первым является общее количество сапрофитных микроор­ганизмов в 1 м³ воздуха. Воздух производственных цехов пище­вых производств считается чистым, если в нем содержится не более 500 сапрофитных микроорганизмов в 1м³. Вторым пока­зателем является количество в том же объеме воздуха санитарно-показательных микроорганизмов — гемолитических стрепто­кокков и стафилококков. Нормативов по этому показателю в настоящее время нет. Обнаружение их в воздухе производствен­ных помещений указывает на санитарное неблагополучие дан­ного объекта и возможность возникновения у персонала инфек­ционных заболеваний, вызываемых микрофлорой дыхательных путей, которая передается через воздух (ангины, гриппа, кок­люша, дифтерии, туберкулеза и др.). Такой воздух может стать источником обсеменения пищевых продуктов, а следовательно, представлять потенциальную опасность для здоровья людей Определение в воздухе санитарно-показательных микроорганиз­мов производят только по эпидемиологическим показаниям санитарно-эпидемиологическими станциями.

Для санитарно-гигиенического контроля воздуха применяют седиментационные и аспирационные методы анализа, описание которых имеется в нормативной документации.

Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:

• 
  Посев отпечатков пальцев рук на МПА в чашках Петри с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний.
  
• 
  Посев смывов с кожи для определения общего микробного числа и кишечной палочки.
  

1. 
   Алекшукина А.В. Медицинская микробиология: учеб.пособие.-Ростов н/Д, 2003.
   
2. 
   Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб.-2-е изд., доп.и перераб.-М., 2001.
   
3. 
   Борисов Л.Б. Руководства к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. Пособие.-М., 1993.
   
4. 
   Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб.-4-е изд., доп. И перераб.-М.,2005.
   
5. 
   КоротяевА.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб.-3-е изд., испр. И доп.-СПб., 2002.
   
6. 
   КоротяевА.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб.-2-е изд., испр. –СПб., 2000.
   
7. 
   Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. /ред. А.А. Воробьев. 2-е изд., испр. И доп.-М., 2006.
   
8. 
   Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб./ Под ред. Л.Б. Борисов.-М.,1995.
   

1. 
   Бактериялардың генетикасы: оқу құралы. –Астана, 2000
   
2. 
   Колонизация резистенттілік Дисбактериоз. Коррекциясы: әдіст. құрал.-Астана, 2000.
   
3. 
   Микробиология саласына еңбегі сіңген ғалымдар: қысқаша анықтама. – Астана, 2000.
   
4. 
   Микробиологияда қолданылатын орыс-латын-қазақ тіліндегі медициналық терминдер: словарь. – Қарағанды, 1992.
   
5. 
   Рысұлы М. Микробиология: оқулық. – Алматы, 1998.
   

1. 
   Санитарно-показательные микроорганизмы воды?
   
2. 
   Санитарно-показательные микроорганизмы почвы?
   
3. 
   Определение микробного числа почвы?
   
4. 
   Определение коли-титра, перфрингенс-титра и титра термофильных бактерий почвы?
   
5. 
   Седиментационный метод определения микробного числа воздуха?
   
6. 
   Аспирационный метод определения микробного числа воздуха?
   

Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов

Отбор проб проводят стерильно, стерильными приспособлениями, в стерильную посуду. Пробы помещают в соответствующую тару, пломбируют. Транспортировку осуществляют в сумках-холодильниках в кратчайшие сроки.

Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктов включает определение общего микробного числа и титра санитарно-показательных микроорганизмов.

ОМЧ – общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г (см³) продукта. Для его определения используют метод кратных разведений.

Метод кратных разведений. При исследовании плотных субстратов навеску измельчают в гомогенизаторе или растирают в ступке с кварцевым песком и готовят исходную взвесь в разведении 1:10. Из полученной взвеси или исходного жидкого материала готовят ряд последующих разведений с таким расчетом, чтобы при посеве двух последних разведений на чашке Петри в агаре выросло от 50 до 300 колоний. Из последних двух разведений по 1 см³ вносят в чашку и заливают 10-15 мл расплавленного и остуженного до 45°С МПА. Чашки инкубируют при 37°С 48 ч, подсчитывают количество выросших колоний. ОМЧ определяют с учетом разведения исследуемого материала.

Метод предельных разведений (титр). Из исходного жидкого материала готовят ряд десятикратных разведений до тех пор, пока в последней пробирке можно будет предположить наличие одной бактериальной клетки. Посев делают в жидкую селективную среду с последующим выделением микроорганизмов на твердой питательной среде и изучением их характеристики.
За титр принимают, то наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена одна особь искомого микроорганизма.

Санитарно-показательные микроорганизмы характеризуют продукт с точки зрения эпидемической опасности.

Основными санитарно-показательными микроорганизмами считают БГКП и для количественного учета используют методы определения количества и титра. При этом под количеством понимают определение наиболее вероятного числа (НВЧ) БГКП в единице массы или объема продукта.

Для определения НВЧ из жидкого продукта или исходной взвеси плотного, последовательно делают разведения 10^-1 , 10^-2 , 10^-3 , из которых по 1 см³ засевают в три пробирки со средой Кесслера для каждого разведения. Через 24 ч инкубации при 37°С в пробирках регистрируются изменения цвета среды и газообразование. В зависимости от количества проросших пробирок определяют НВЧ коли формных бактерий.

Готовят десятикратные разведения анализируемого материала и высевают на среду Кесслера для выявления наименьшего количества продукта, в котором присутствует кишечная палочка. Посевы термостатируют при 43°С в течение 18-24 ч. Из каждой пробирки производят высев на чашки Петри со средой Эндо так, чтобы получить рост отдельных колоний. Посевы инкубируют при 37°С - 18-24 ч, после чего из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Грамму. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек, колонии пересевают на среды Гисса с глюкозой. Наличие газообразования в пробирках с посевами указывает на присутствие БГКП.
Титр устанавливают по наименьшему количеству продукта, в котором обнаружены БГКП, или по стандартным таблицам.

В оценке пищевых продуктов по микробиологическим показателям необходимо учитывать возможность обнаружения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Продукты питания анализируют на наличие сальмонелл, сульфит редуцирующих клостридий, стафилококков, протея. При более широком исследовании продукты исследуют на грибковую флору.

Для выявления стафилококков исследуемый материал засевают на желточно-солевой агар. Посевы инкубируют в термостате 24 ч. Подозрительные на стафилококки колонии окрашивают по Граму, делают их пересев на молочный агар и проводят дальнейшую идентификацию выделенной культуры.

Для выявления протея производят посев исследуемого материала на скошенный агар методом Шукевича. После суточной инкубации с верхнего края роста делают мазки и при наличии в них грамотрицательных полиморфных бактерий делают заключение о выделении протея, при необходимости используют биохимическое и антигенное типирование.
4. Иллюстративный материал: таблицы, плакаты, схема, мультимедийный проектор.
5. Литература:

1. 
   Алекшукина А.В. Медицинская микробиология: учеб.пособие.-Ростов н/Д, 2003.
   
2. 
   Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб.-2-е изд., доп.и перераб.-М., 2001.
   
3. 
   Борисов Л.Б. Руководства к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. Пособие.-М., 1993.
   
4. 
   Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб.-4-е изд., доп. И перераб.-М.,2005.
   
5. 
   КоротяевА.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб.-3-е изд., испр. И доп.-СПб., 2002.
   
6. 
   КоротяевА.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб.-2-е изд., испр. –СПб., 2000.
   
7. 
   Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. /ред. А.А. Воробьев. 2-е изд., испр. И доп.-М., 2006.
   
8. 
   Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб./ Под ред. Л.Б. Борисов.-М.,1995.
   

1. 
   Бактериялардың генетикасы: оқу құралы. –Астана, 2000
   
2. 
   Колонизация резистенттілік Дисбактериоз. Коррекциясы: әдіст. құрал.-Астана, 2000.
   
3. 
   Микробиология саласына еңбегі сіңген ғалымдар: қысқаша анықтама. – Астана, 2000.
   
4. 
   Микробиологияда қолданылатын орыс-латын-қазақ тіліндегі медициналық терминдер: словарь. – Қарағанды, 1992.
   
5. 
   Рысұлы М. Микробиология: оқулық. – Алматы, 1998.
   

1. Назовите виды микроорганизмов писутствующие в мясных продуктах?