Инструкция по применению учреждения-разработчики: гу «Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии»
Лабораторная диагностика инфекций, передаваемых клещами
жүктеу/скачать 497.3 Kb. Pdf көрінісі
|
| 2. Лабораторная диагностика инфекций, передаваемых клещами
Сбор, хранение и транспортировка образцов для лабораторной диагностики Все манипуляции по забору, транспортировке, хранению проб для проведения исследований смешанных клещевых инфекций выполняют в соответствии с Руководством «Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I–IV групп патогенности» № 11-7-13-2002, утв. Главным государственным санитарным врачом Республики Беларусь 30.12.2002. 1. Забор крови для проведения клинических и серологических исследований (выявление IgM и IgG) осуществляется в первые дни заболевания и затем в динамике в зависимости от особенностей иммунного ответа в отношении конкретного возбудителя: для клещевого боррелиоза — 4-я неделя с момента заражения, для КЭ, анаплазмоза и эрлихиоза — 2-я неделя от начала заболевания. Забор крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8–1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или в пробирки типа вакутэйнер. При заборе в шприц кровь из него аккуратно переносят в одноразовую стерильную пробирку с завинчивающейся крышкой без антикоагулянта (получение сыворотки). Для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре (либо в термостате при 37 С) в течение 30 мин до образования сгустка крови, затем центрифугируют при 3000 об./мин в течение 10 мин при комнатной температуре. После центрифугирования сыворотку отбирают стерильными наконечниками с фильтром в стерильные пластиковые пробирки объемом 1,5 мл. 2. Для проведения молекулярно-биологических исследований (ПЦР) используется плазма крови. Забор крови производится на ранних сроках заболевания (до 14 дней от начала заболевания) в пробирки типа вакутэйнер с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА в соотношении 1:20). Пробирку аккуратно переворачивают несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Плазму крови получают центрифугированием пробирок с цельной кровью при 800–1600 g (3000 об./мин) в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем отбирают плазму в объеме не менее 1 мл отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки объемом 1,5 мл. В связи с низкой концентрацией возбудителей клещевых инфекций в плазме крови и ликворе, рекомендуется проводить концентрирование материала перед этапом выделения нуклеиновых кислот. Концентрирование материала проводится путем центрифугирования плазмы крови и ликвора при 12000 об./мин в течение 20 мин, осадок и нижняя фракция (100–200 мкл) используются для выделения нуклеиновых кислот на коммерческих наборах для пробоподготовки материала к дальнейшему анализу методом ПЦР, разрешенные к применению на территории Республики Беларусь. До начала исследований условия хранения образцов следующие. Образцы цельной крови: - при температуре 2–25 С в течение 12 ч с момента взятия крови для качественного определения нуклеиновых кислот; - при температуре 2–8 С в течение 1 сут для качественного определения РНК/ДНК инфекционных агентов. Недопустимо замораживание образцов цельной крови! Образцы плазмы, сыворотки, синовиальной жидкости и ликвора: - при температуре 2–8 С — до 5 сут; - при температуре -70 С — длительно (не менее года). Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала, поэтому образцы для длительного хранения необходимо разлить небольшими (0,1-0,2 мл) порциями в отдельные стерильные пробирки объемом 1,5 мл. 3. С целью выявления фагоцитов и гранулоцитов, инфицированных анаплазмами или эрлихиями, в первые дни заболевания готовят тонкие мазки крови. 4. При наличии неврологической симптоматики, указывающей на поражение ЦНС, производится забор спинномозговой жидкости. Материал забирается в стерильные пластиковые пробирки. 5. При наличии объективных признаков артрита (предположительно боррелиозной этиологии) производится забор синовиальной жидкости из полости пораженных суставов по общепринятой методике. Материал забирается в стерильные пластиковые пробирки. жүктеу/скачать 497.3 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|