Методичні рекомендації для самостійної роботи студентів при підготовці до практичного заняття



бет4/8
Дата12.07.2016
өлшемі0.56 Mb.
#193917
түріМетодичні рекомендації
1   2   3   4   5   6   7   8


Краткая характеристика холеры

Холера - особо-опасная кишечная инфекция человека, которая сопровождается водянистой диареей, выраженной дегидратацией и характеризуется быстрым эпидемическим распространением



Источник инфекции

Больной человек, вибрионоситель

Механизмы передачи заболевания

Фекально-оральный; Пути: Водный, алиментарный, бытовой

Факторы передачи: вода, пищевые продукты



Инкубационный период

1-3 дня.; до 6 дней


Формы заболевания

Холерный ентерит; Холерный гастроентерит; Холерный алгид; Кома


Основные клинические признаки

-выраженная интоксикация;-профузный водянистый понос;

-рвота;-симптомы обезвоживания (сухость кожи, уменьшение тургора; падение давления; тромбозы)



Иммунитет

Стойкий, длительный. Антибактериальный, антитоксический


Лабораторная диагностика

Ускоренная: Микроскопия ( окрашенных препаратов, иммунофлюоресцентная)

Основная: Бактериологический;

Вспомогательная (ретроспективная): Серологический;

Профилактика

Неспецифическая: конвенционная и этиотропная антибактериальная

Специфическая: (только в постоянных очагах холеры): Инактивированная холерная вакцина; Холероген-анатоксин

Лечение

Эритромицин, доксациклин, тетрациклин, хлорамфеникол

Схема микробиологической диагностики холеры

Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, секционный материал (сегменты тонкого кишечника), вода, пищевые продукты
Ускоренная диагностика:

  • РИФ;

  • Реакция иммобилизации вибрионов О-1 сывороткой

Бактериологический метод:

Первый этап:

  • микроскопия нативних мазков для определения подвижности;

  • микроскопия окрашенных по Грамму мазков испражнений;

  • посев исследуемого материала в щелочную ПВ, на щелочной агар, среду ТЦБС;

Второй этап (через 4-6 часов):

  • микроскопическое исследование пленки со щелочной ПВ (нативная микроскопия);

  • мазок, окраска по Грамму;

  • постановка ориентировочной РА с О-1 сывороткой;

  • при необходимости (отсутствие видимых признаков роста) пересев в другую ПВ и на плотные среды;

Третий этап (через 14-16 часов):

  • изучение колоний, которые образовались на плотных средах: мазок по Грамму, ориентировочная РА с О-1 сывороткой;

  • пересев подозрительных колоний на щелочную ПВ.

Четвертый этап (через 20-24 часа):

  • идентификация чистых культур:

    • определение сахаролитических свойств (триада Хейберга);

    • определение серотипа в ориентировочной и развернутой РА;

    • постановка биологических тестов для определения биовара;

Пятый этап (через 24-36 часов):

  • учет результатов;

  • выдача окончательного микробиологического диагноза.

Серологический метод (вспомогательный, ретроспективная диагностика, выявление носителей, оценка напряженности иммунитета):

  • определение вибриоцидов в сыворотке больных в реакции лизиса (с 3-го дня); диагностический титр 1:1000

  • определение агглютининов в развернутой РА; диагностический титр 1:80;

  • определение антитоксинов с помощью РНГА; диагностический титр 1:160.


6.Практическая работа, которая выполняется на занятии.

6.1. Промикроскопировать демонстрационные препараты йерсиний, бацил, вибрионов, окрашенных по Грамму. Микроскопическую картину зарисовать.

Возбудитель чумы (Y.pestis) - грамм-отрицательные полиморфные палочки овоидной формы; при окрашивании метиленовим синим болем інтенсивно прокрашиваютсяч на полюсах клетки (биполярно); в мазках-отпечатках паренхиматозных органов можна обнаружить капсулу вокруг бактериальной клетки.

Возбудитель сибирской язвы (B. anthracis) – грамм-положительные стрептобациллы с обрубленными концами «бамбуковые палки»)


Холерный вибрион является грамм-отрицательным, слегка изогнутым в виде запятой микроорганизмом, длиной 1,5-3 мкм.

    1. Провести учет демонстрационного опыта фаголизиса методом «стекающей капли», который используется для ускоренной диагностики чумы.

Определение фаголизабельности проводят с целью ускоренной диагностики чумы. Для этого на питательную среду, засеянную исследуемым материалом, наносят 1 каплю специфического чумного фага, поворачивают чашку вертикально для того, чтобы капля стекла по поверхности засеянной среды; после этого посев инкубируют в термостате 5-6 часов и учитывают результат: при наличии возбудителя чумы в материале в месте контакта фага и газонной культуры будет отсутствовать рост в виде прозрачной дорожки фаголизиса.

    1. Провести визуальное и стереомикроскопическое исследование R-форм колоний антракоидов на кровяном агаре.

R-форм колонии антракоидов напоминают колонии возбудителя сибирской язвы: край колонии при увеличении напоминает курчавые локоны («львиная грива»)

    1. Изучить характер роста холерного вибриона на 1% пептонной воде. Данные внесите в протокол.

На щелочной пептонной воде возбудитель холеры через 5-6 часов образует нежную пленку с голубым оттенком.

    1. Поставить реакцию кольцепреципитации по типу Асколи , учесть результаты, внести в протокол сведения о цели применения реакции.

Цель постановки реакции: определение термостабильного сибиреязвенного антигена в продуктах животноводства (кожа, шерсть, мясо и др.)

Для постановки реакции необходимы: преципитирующая диагностическая сыворотка, нормальная сыворотка, фильтрат жидкости, в которую экстрагировали антиген путем кипячения образцов исследуемого материала, узкие преципитационные пробирки.

Методика:В пробирку 1 (контроль) наливают нормальную сыворотку в количестве 0,3-0,5 мл, затем медленно наслаивают исследуемый материал ( 0,2-0,3 мл), удерживая пробирку под наклоном, после этого пробирку ставят вертикально и наблюдают за границей раздела компонентов реакции. Если кольцо преципитации не образуется (отрицательный результат), проводять опытную реакцию в пробирке 2 по той же методике только с использованием преципитирующей сыворотки. При положительной реакции в течении 2-3 минут образуется кольцо преципитации на границе разделения жидкостей. Появление кольца преципитации свидетельствует о наличии антигенов возбудителя в исследуемом материале.


    1. Изучить иммунобиологические препараты для диагностики и профилактики чумы, сибирской язвы, холеры.

Набор препаратов: диагностические – чумной бактериофаг, противочумная люминесцентная сыворотка для постановки РИФ, преципитирующая сибиреязвенная сыворотка для постановки реакции термопреципитации, сибиреязвенный бактериофаг, сибиреязвенная люминесцентная сыворотка для РИФ; антраксин (белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза B.anthracis) для постановки кожно-аллергической пробы; диагностические О-сыворотки группо- и типоспецифические, бактериофаги el-tor, C IV Мукерджи.

профилактические препараты – чумная живая сухая вакцина EV для накожного введення, сибиреязвенная вакцина СТИ (споры авирулентного безкапсульного штамма B.anthracis), инактивированная холерная вакцина, холероген-анатоксин.



    1. Лечебные препараты: противосибиреязвенный лошадиный иммуноглобулин, антибиотики: пенициллины, цефалоспорины – для лечения сибирской язвы, тетрациклины, аминогликозиды, фторхинолоны – для лечения чумы, сибирской язвы, тетрациклін, доксициклин, хлорамфеникол – для лечения холеры.

7.Рекомендованная литература.

7а. Основная:

  1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 279-307, 308-316.

  2. В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 293, 296-302, 307-313, 318-322.

  3. А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петерб.,2002. Стр. 355-364, 364-370,394-401.

  4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999. Стр. 242-263.

  5. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков, 1999. Стр. 280-286, 294-307.

  6. Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 188-193, 198-204, 204-211.

  7. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр. 409-413, 423-428, 446-448.

  8. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр. 125-132, 143-147, 200-208.

7б. Дополнительная

  1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием. Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.

  2. Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 35-50.

  3. Лекционный материал.


8.Материалы для самоконтроля

1. В мазке из испражнений больного выявлены грамотрицательные бактерии в виде запятой. Какие свойства следует в первую очередь изучить с помощью микроскопа для получения дополнительной информации о выявленных микробах?



A Наличие цист.

B Наличие спор.

C Наличие капсул.

D Подвижность.

E Наличие гранул волютина.
2. Существуют территории, пребывание на которых людей или животных связано с постоянным риском заражения определенными видами бактерий. Какая особенность этих бактерий предопределяет их длительное пребывание в почве?

A Капсулообразование

B Спорообразование

C Способность размножаться в остатках растений

D Наличие плотной клеточной стенки

E Наличие плазмид
3. В эпидемиологии некоторых заболеваний большое значение имеют переносчики - блохи. Выберите из приведенных заболеваний то, в распространении которого в природе решающую роль играют блохи:

A Чума

B Сибирская язва

C Сыпной тиф

D Возвратный тиф

E Лептоспироз
4. У больного во время осмотра карбункула врач отметил: в центре черный струп, отек подкожной клетчатки, при прикосновении - безболезненность. При микроскопии

выявлены грамположительные стрептобациллы, образующие капсулу. Укажите



наиболее вероятное заболевание.

A Чума

B Столбняк

C Сибирская язва

D Холера

E Сифилис
5. У больного из рвотных масс с подозрением на холеру выделены грамотрицательные подвижные вибрионы. Какие диагностические препараты следует применить для определения серовара выделенной культуры?

A Нормальные сыворотки

B Люминесцентная сыворотка

C Поливалентный бактериофаг

D Типовые бактериофаги

E Типовые агглютинирующие сыворотки Инаба и Огава
6.Рабочему цеха по переработке кожевенного сырья поставлен предварительный диагноз "сибирская язва". Какую реакцию используют для установления факта заражения кожевенного сырья?

A Реакцию связывания комплемента

B Реакцию агглютинации

C Реакцию термопреципитации

D Реакцию нейтрализации

E Реакцию непрямой гемагглютинации
7. У фермера после контакта с кожей и мясом погибшей коровы на коже возникли карбункулы с почернением в центре, гиперемией, повышением температуры. После госпитализации был поставлен диагноз – сибирская язва. Что срочно необходимо ввести больному для лечения?

A Противосибиреязвенный глобулин

B Вакцина СТИ

C Вакцина БЦЖ

D Тулярин

E Антраксин
8. При микроскопическом исследовании препарата, изготовленного из увеличенного пахового лимфоузла больного, окрашенного по Лефлеру (метиленовым синим), было выявлено бактерии овоидной формы, интенсивнее окрашенные по полюсам, расположены хаотически. Какому из перечисленных микроорганизмов присущи эти свойства?

A L.interrogans

B N.gonorrhoae

C T.pallidum

D Y.pestis

E M.tuberculosis

Автор: доцент Вовк И. Н.
Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов
при подготовке к практическому занятию №19
для студентов фармацевтического факультета


(специальность - фармация)
1.Тема занятия: Патогенные клостридии. Возбудители анаэробных инфекций - ботулизма, столбняка, анаэробной газовой инфекции. Морфология, биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия.
2.1. Цель общая.
Уметь объяснить биологические свойства возбудителей ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции; принципы лабораторной диагностики, специфической профилактики, лечения инфекций.
2.2. Цель конкретная. Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции; назначать препараты для профилактики заболеваний.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
3.1. Морфологические группы бактерий.
3.2. Споры бактерий, их значение, методы выявления.
3.3. Понятие «асептика», «антисептика», «антисептические средства».
3.4. Токсины микроорганизмов.
3.5. Иммунобиологические препараты для специфической профилактики и лечения заболеваний.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
4.1 Морфологическая, биологическая характеристика патогенных клостридий, значение в возникновении заболеваний.
4. 2. Характеристика ботулотоксина, экзотоксинов возбудителей столбняка, газовой анаэробной инфекции, механизм их действия.
4.3. Микробиологическая диагностика ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции Реакция нейтрализации, методика определения экзотоксинов патогенных клостридий.
4.4. Профилактика, терапия ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции. Характеристика иммунобиологических препаратов.
5. Содержание темы.

Возбудитель ботулизма Clostridium.botulinum) - короткая грамм-положительная палочка, образует овальную субтерминально расположенную спора («теннисная ракетка»). Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра. Екзотоксин- ботулотоксин (нейротоксин), который связывает ацетилхолин в нервно-мышечных синапсах центральной, вегетативной и периферической нервной системах. Экзотоксин накапливается в основном в консервированных продуктах, при попадании в желудок может активироваться протеолитическими ферментами. Инкубационный период - от 2 часов до 10 суток. Формы заболевания - гастроинтестинальная, раневой ботулизм, ботулизм новорожденных. Иммунитет - антитоксический слаб напряжений. Методы диагностики - биологическая проба, бактериологический, серологический метод для выявления ботулотоксина в пищевых продуктах, материале от больного (ИФА, РНГА с антительным диагностикумом). Профилактика - неспецифическая (контроль за изготовлением консервированных продуктов), специфическая экстренная пассивная (поливалентная антитоксическая вакцина).

Возбудитель столбняка (C.tetani). Грамположительная спорообразующая палочка («барабанная палочка"), не образуют капсулу, перитрих. Облигатный анаэроб. Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра. Экзотоксин имеет 2 фракции: тетаноспазмин (нейротоксин) и тетанолизин (мембранотоксины, гемолизинов). Механизм действия нейротоксина: угнетение выделения тормозных нейромедиаторов в синапсах вставочных нейронов ЦНС. Столбняк - острая токсическая раневая инфекция, которую вызывает нейротоксин C. tetani, и проявляется судорогами скелетных мышц и периодическими генерализованными судорогами. Механизм и пути передачи заболевания - контактный. Факторы передачи - инородные тела в ране, нестерильный инструмент и т.д. Источник инфекции - животные, человек (клостридии - постоянные комменсалы ЖКТ людей и животных). Патогенез - попадание спор в рану, прорастание спор в анаэробных условиях, фиксация экзотоксина в мышечно-нейронных синапсах, ретроградный аксональный транспорт токсина в ЦНС, фиксация в синапсах тормозных нейронов, связывание медиаторов. Инкубационный период - от 2 до 14 суток. Формы заболевания - раневой столбняк, столбняк новорожденных, послеродовой столбняк, криптогенный столбняк. Иммунитет - постинфекционный, антитоксический, слабо напряжений, непродолжительный. Методы диагностики - бактериоскопический, биологическая проба (реакция нейтрализации на белых мышах), бактериологический, серологический (определение тетеноспазмина в материале с помощью ИФА. Профилактика - неспецифическая (хирургическая обработка раны, удаление инородных тел, сгустков крови, соблюдение асептики при хирургических вмешательствах) специфическая плановая (иммунизация детей АКДС, АДС), экстренная - активная (анатоксин), активно-пассивная (анатоксин + сыворотка, пассивная (антитоксическая сыворотка).

Классификация патогенных для человека анаэробов - возбудителей газовой раневой инфекции и гнойно-воспалительных осложнений

Название рода

Патогенные виды

Неспорообразующие анаэробы

Bacteroides

Fusobacterium

Propionobacterium

Peptococcus

Peptostreptococcus

Veilonella


B. fragilis, B.melaninogenicus
F.nucleatum, F.necroforum


P. acnes, P.avidus

P. niger

P. anaerobius
V.atipica, V.dispar


Спорообразующие анаэробы

Clostridium

C. perfringens
C. novi
C. septicum
C. hystolyticum
C. difficile
C. sporogenes



Неспорообразующие анаэробы вызывают эндогенные гнойно-воспалительные инфекции в ассоциациях с факультативными анаэробами или аэробами: мягких тканей (флегмоны, абсцессы, нагноение трофических язв, раневые инфекции), дыхательной системы (абсцессы легких, эмпиема плевры и др.), опорно-двигательной системы (остеомиелит), мочеполовой системы, стоматологические заболевания (глубокий кариес, периодонтит, периостит, пародонтит, хелитозис и др.). Условия развития заболеваний: нарушения тканевых барьеров кожи и слизистой оболочки; снижение уровня кислорода и окислительно-восстановительного потенциала в тканях вследствие травм, спазмов или нарушение проницаемости сосудов; хирургические вмешательства (операции на кишечнике, в челюстно-лицевой области); сахарный диабет, онкозаболевания, лейкозы, артериосклероз, эндартериит, алкоголизм; длительное применение препаратов с иммуносупрессивной действием (кортикостероиды, иммунодепрессанты, антибиотики рентгеновское и гамма-излучения.

Спорообразующие возбудители газовой анаэробной инфекции. Грам-положительные спорообразующие палочки, которые во время споруляции приобретают веретенообразную форму; не образуют капсулу (кроме C. perfringens) малоподвижные перитрихи (кроме C. perfringens). Облигатные анаэробы. Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра, среда Виллиса-Хобса. C. perfringens, C. septicum имеют преимущественно сахаролитические свойства, C. novyi, C. hystoliticum - протеолитические свойства. Факторы вирулентности - многофракционное экзотоксины, капсула. Действие экзотоксинов - гемолитическое, дермонекротическое, летальное, энтеротоксигенное, нейротоксическое, кардиотоксическое, нефротоксическое. Клинические формы газовой анаэробной инфекции - эмфизематозная, отечная, смешанная. Характерно отсутствие ярких признаков воспаления в ране, быстро прогрессирующий некроз тканей и наличие выраженной интоксикации. Методы диагностики - бактериоскопический (предварительная диагностика), бактериологический (основной), биологический, иммунохимический. Профилактика - неспецифическая (ПХО раны), специфическая (поливалентная противогангренозная гетерологическая сыворотка). Лечение - неспецифическое - антибиотики (цефалоспорины или пенициллины), специфическое (видоспецифическим антитоксические сыворотки).

Серологические варианты C. perfringens A и C выделяют энтеротоксины, накопление которых в пищевых продуктах приводит к развитию пищевых токсикоинфекций. C. perfringens тип A вызывает токсикоинфекцию легкой и средней тяжести с коротким инкубационным периодом и непродолжительным течением. Основные симптомы (диарея, рвота) исчезают в течение суток. Тяжелое течение имеет некротический энтерит, вызванный C. perfringens типа С.

Возбудитель псевдомембранозного колита (C. difficile) - грамположительная спорообразующая палочка. На средах для культивирования анаэробов образует белые плотные колонии со специфическим запахом крезола. Возбудитель продуцирует два экзотоксина А и В. Токсин А (энтеротоксин) имеет летальное действие, вызывает диарею. Токсин В (цитотоксин) повреждает клетки слизистой кишечника, подавляет синтез белка и нарушает функцию мембран с потерей ионов К +. C. difficile входит в состав микрофлоры кишечника у 3% здоровых взрослых и 30-50% детей. Носительство распространено у госпитализированных больных. Возбудитель иногда вызывает внутрибольничные вспышки заболевания. Поражение чаще всего возникает при антибиотикотерапии. В результате подавляется нормальная микрофлора (анаэробные неспорообразующие бактерии), которая является основой колонизационной резистентности толстого кишечника. C. difficile выживает благодаря образованию спор. Отмена антибиотиков способствует прорастанию спор и выделению экзотоксина вегетативными клетками. Для исследования используют бактериологический метод, определение цитотоксинах с помощью ИФА. Лечение - ванкомицин, метронидазол, эубиотики.
Граф логической структуры микробиологической диагностики энтеральных клостридиозов

Материал для исследования: промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, остатки пищевых продуктов, стул


Бактериологическое метод
1. Материал прогревают при 80 0С в течение 20 мин;
2. Посев материала на среду Китта-Тароцци; инкубация 48-72 ч.,
3. Пересев на кровяной агар Цейсслера; инкубация 24-48 ч.
4. Изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци; инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании: морфологии, культуральных, биохимических свойств, результатах биологической пробы (реакция нейтрализации) для определения серотипа токсина.
Серологический метод: определение ботулотоксина с помощью РНГА с антительным эритроцитарных диагностикумом; выявление токсина с помощью ИФА.

Граф логической структуры микробиологической диагностики раневой анаэробной инфекции

Материал для исследования: раневой содержание, экссудат, некротизированные ткани, тампоны из раны, при родильном столбняке - отделение и биоптаты из матки, влагалища; при столбняке новорожденных - выделение из пупка.


Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):
Мазок, окраска по Граму
Иммунофлюоресцентная микроскопия
Бактериологическоий метод
1) Материал прогревают при 800С в течение 20 мин;
2) Посев материала на среду Китта-Тароцци, в конденсационную воду скошенного кровяного агара по Филдсу;
3) Инкубация 48-72 ч., пересев на кровяной агар Цейсслера;
4) Инкубация 24-48 ч, изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци;
5) Инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании морфологии, культуральных свойств; ферментативных признаков, результатов биологической пробы (реакция нейтрализации).

Методы для определения нейротоксина клостридий в исследуемом материале

Биологический метод (реакция нейтрализации) - введение смеси фильтрата материала (или жидкой культуры) и антитоксической сыворотки, предварительно выдержанной в термостате 30-40мин. (контрольная мышь); введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки (опытная мышь) учет результатов биологической пробы через 4-5 суток.
Серологический метод: определение тетаноспазмин с помощью РНГА с антительным эритроцитарных диагностикикумом; выявление токсина с помощью ИФА.

Ускоренный метод выявления токсина перфрингенс

Лецитиназная проба для выявления токсина перфрингенс в исследуемом материале с помощью диагностической сыворотки анти-perfringens.


6. Практические работы, выполняемые на занятиях.
6.1. Изучить морфологию возбудителя ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции в демонстрационных препаратах, окрашенных по Граму. Микроскопическую картину зарисовать в протокол, обращая внимание на форму, размер и расположение спор.
6.2. Изучить характер роста клостридий в среде Китта-Тароцци, лакмусовой молоке.
Ознакомиться с питательными средами, которые используют для выделения патогенных клостридий из исследуемого материала и накопления чистой культуры (кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра, среда Китта-Тароцци, скошенный кровяно-сахарный агар по Филдсу).
6.3. Учесть результаты демонстрационной РПГА, поставленной с целью выявления ботулотоксина в разных образцах пищевых продуктов.
Возбудитель ботулизма выделяет токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и могут быть дифференцированы в реакциях с типоспецифическими сыворотками. Для этой цели используют реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит нормальная сыворотка. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток с складчатым или зазубренным краем («перевернутая зонтик»), в отрицательном - оседают в виде «пуговицы».
6.4. Осуществить учет результатов опыта выявления токсина клостридий перфрингенс в раневом отделяемом по его лецитиназной активностью с целью ускоренной диагностики клостридиоза. Для этого в трех пробирки вносят по 0,3 мл исследуемого материала, в две из них - по 0,1 мл лецитина, дальше в первую добавляют 0,1 мл сыворотки антиперфрингенс, во вторую - 0,1 мл, а в третью - 0 2 мл физиологического раствора. Учет результатов осуществляют через 40 минут инкубации в термостате. В первой пробирке раствор остается прозрачным (нейтрализация токсина антитоксином), во второй - положительный результат в виде помутнения (расщепление лецитина), в третий - содержимое остается прозрачным (контроль).
6.5. Ознакомиться с лечебно диагностическими препаратами, которые применяют при раневых анаэробных инфекциях.
1) Антитоксическая поливалентная противогангренозная сыворотка. Выпускают в жидком виде, получают путем гипериммунизации лошадей анатоксинами. Используют для специфической профилактики и лечения газовой анаэробной инфекции.
2) Адсорбированный столбнячный анатоксин (АС). Получают путем обеззараживания столбнячного экзотоксина 0,4% формалином при 40 0С в течение 4 недель, концентрируют, адсорбируют на гидроокиси алюминия. Используют для активной иммунизации против столбняка.
3) Ассоциированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС) содержит столбнячный анатоксин. Используют для активной иммунизации новорожденных против столбняка, коклюша, дифтерии.
4) Адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС, АДС-М). Используют для активной иммунизации против столбняка, дифтерии.
5) Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получают из гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови людей, ревакцинированных очищенным сорбированным анатоксином. Используют для пассивной экстренной профилактики столбняка в сочетании со столбнячным анатоксином при травмах, лечении столбняка (преимущественно детей).
6) Противостолбнячная сыворотка. Получают из крови гипериммунизированных столбнячным анатоксином лошадей. Активность измеряют в международных единицах (МЕ), используют для профилактики и лечения столбняка.
7) Противоботулинические сыворотки. Получают из крови лошадей, которые были гипериммунизированы ботулиническими анатоксинами. Для лечебно-профилктических мероприятий готовят противоботулинические поливалентные и моновалентные сыворотки типов А, В, Е, F. Моновалентные сыворотки используют для определения серотипа токсина в исследуемом материале в реакции нейтрализации на белых мышах.
7. Рекомендованная литература.
7.1. Литература основная.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк и др. Микробиология, 2004. - С. 430-445.
И.Л.Дикий, И.И.Сидорчук и др. Микробиология: Руководство к лабораторным занятиям, 2004. С. 407-421.
7.2. Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь / Под ред. Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2 004.
8. Материалы для самоконтроля.
8.1. Тестовые задания для проверки исходного уровня знаний.
1) Выживанию микробов в объектах внешней среды способствует спорообразование. Микроорганизмы какого рода с являются спорообразующими?
A. Bacteroides
B. Clostridium
C. Peptococcus
D. Peptostreptococcus
E. Staphylococcus
2) У больного была выделена культура бактерий, которые не растут в присутствии кислорода. Как обеспечить условия роста для этой культуры?
A. Использование анаэростатов
B. Использование аппарата Кротова
C. Использование печи Пастера
D. Использование сывороточных сред
E. Средами с окислительным редокс потенциалом
3) Патогенные микробы и их токсины, попав в макроорганизм, могут распространяться в нем разными путями. Какой путь характерен для токсинемия?
A. Возбудители из крови поступают во внутренние органы
B. Микробы с места попадания поступают в кровь, но не размножаются
C. Микробы из крови поступают во внутренние органы, где образуют гнойные очаги
D. Микробы находятся в лимфоузлах
E. В кровь попадают микробные токсины
4) После получения антитоксической сыворотки необходимо определить ее активность. С этой целью используют реакцию, которая основана на соединении равных доз иммунной сыворотки и анатоксина. Как называется эта реакция?
A. Гемагглютинация
B. Гемадсорбции
C. Связывание комплемента
D. Преципитации
E. Флокуляция
5) Для серопрофилактики и серотерапии инфекций используют иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Какой вид иммунитета формируется с их помощью?
A. Видовой наследственный
B. Приобретенный активный
C. Приобретенный пассивный
D. Искусственный активный
Е. Искусственный пассивный
8.2. Контрольные вопросы для проверки исходного уровня знаний.
Ситуационная задача 1. В бактериологической лаборатории исследовали вяленую рыбу домашнего изготовления, которая стала причиной тяжелого пищевого отравления. При микроскопии выделенной на среде Китта-Тароцци культуры обнаружены микроорганизмы, похожие на теннисную ракетку.
Вопросы.
1. Какой диагноз установил врач?
2. Укажите видовое название возбудителя (лат.)
3. Опишите патогенез болезни.
4. Назовите материалы от больного, подлежащих исследованию для установления диагноза, методы их исследования.
5. Профилактика заболевания.

Ситуационная задача 2. Из организма больного пищевым отравлением выделили чистую культуру анаэробных грамположительных спорообразующих палочек.
Вопросы.
1. Какие виды клостридий могут вызывать пищевые токсикоинфекции?
2. Дайте их морфологическую характеристику.
3. Опишите этапы бактериологического метода исследования при диагностике заболевания.
4. Какую еще инфекцию могут вызвать эти возбудители?
5. Профилактика заболеваний, вызванных данным микроорганизмами.

Ситуационная задача 3. Пострадавшему в автомобильной катастрофе (перелом нижней конечности) оказали неотложную помощь и ввели противостолбнячную сыворотку. Но через два месяца пациента госпитализировали в инфекционное отделение с симптомами позднего столбняка.
Вопросы.
1. Как правильно нужно было бы провести профилактику столбняка, чтобы предотвратить подобное осложнение?
2. Опишите морфологические свойства возбудителя.
3. Назовите питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя, условия его культивирования.
4. Перечислите методы микробиологической диагностики столбняка.
5. Профилактика столбняка.

Автор - доцент А.В.Крижановская
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов медицинского факультета
при подготовке к практическому занятию № 20



Достарыңызбен бөлісу:
1   2   3   4   5   6   7   8




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет