Тема № 6. Микроскопический анализ лекарственных растений

1. 
   Формирование теоретических знаний о микроскопическом анализе лекарственных растений.
   
2. 
   Освоение практических навыков по приготовлению временных микропрепаратов из цельного растительного сырья.
   
3. 
   Научиться определять характерные диагностические признаки на анатомических срезах листьев лекарственных растений.
   
4. 
   Проведение микроскопического анализа лекарственных растений
   

Микроскопический анализ является основным методом определения подлинности измельчённого лекарственного растительного сырья – резаного, дроблёного, порошкованного, в брикетах и гранулах (резано-прессованного). Микроскопический анализ основывается на глубоком знании анатомической структуры растений и заключается в том, чтобы в общей картине анатомического строения различных органов и тканей уметь отыскать характерные диагностические признаки, по которым изучаемый объект можно отличить от аналогичных частей другого растения.

Для овладения микроскопическим анализом необходимы также прочные навыки по микроскопии и микроскопической технике, так как от качества микропрепарата зависит успешное решение поставленной задачи.

Техника приготовления временных микропрепаратов.

Техника приготовления микропрепаратов разнообразна и зависит от состояния, в котором находится сырьё (цельное, резаное, порошкообразное) и принадлежности его к определённой морфологической группе: кора, подземный орган, лист. Препараты цельного сырья. Чтобы выяснить анатомическое строение цельного сырья, его необходимо подготовить. Это достигается холодным размачиванием, кипячением, размягчением в водяных парах, во влажной камере. Чаще применяется метод холодного размачивания, рекомендуемый для всех органов растений.

Холодное размачивание. Исследуемое сырьё помещают в банку или чашку с жидкостью (2 части воды и 1 часть глицерина) с добавлением кристаллика карболовой кислоты. В течение 1–2 суток размачивают мелкие семена, плоды, листья, травы, цветки. Кору, корни, корневища, твёрдые семена рекомендуется размачивать около 3 суток, иногда до 4–5 суток. После размачивания сырьё перекладывают в 90 % спирт с небольшим количеством глицерина (чтобы меньше улетучивался спирт), срезы делают бритвой, лезвием или на микротоме. Мелкие объекты резать трудно, поэтому их помещают в парафин, пробку, пенопласт или сердцевину бузины.

Техника микроскопического исследования лекарственного сырья.

Микроскопические исследования лекарственного сырья можно проводить без приготовления срезов. Препараты необходимо предварительно просветлить в растворе щёлочи. Для этого кусочки листовой пластинки (с краем листа, жилкой), венчика и чашечки, иногда стеблей кипятят в пробирке в 5% водном растворе КОН 1-2 мин (в зависимости от толщины листа), затем содержимое выливают в чашку, жидкость сливают, сырьё промывают и оставляют в воде.

Кусочки сырья берут лопаточкой или препаровальной иглой. Если листья тонкие и собираются при вынимании в складочки, то под кусочек листа в воде подводят предметное стекло. Кусочек листа должен лежать на стекле гладко. Если надо рассматривать лист с двух сторон, то кусочек листовой пластинки режут на две части скальпелем на предметном стекле, затем одну часть осторожно перевёртывают и помещают обе части рядом. Плотные листья при рассмотрении раздавливают лопаточкой или скальпелем. Тонкие срезы можно приготовить с помощью пробки, бузины или пенопласта. Готовые препараты и срезы просматривают в растворе хлоралгидрата. Иногда при анализе листьев и трав используют микрохимические реакции, напр., эфирное масло, смолу, кутин определяют реактивом судан Ш.

Таблица 1

1. 
   Лекарственные растения Казахстана. / Под ред. К.У. Ушбаева. Алматы: Гылым, 2010 г.-215 с.
   
2. 
   Лекарственные растения Казахстана и их использование. / Под ред. М.К. Кукенова.-Алматы: Гылым, 1996 г.-343 с.
   
3. 
   Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия / Под ред. Г.П. Яковлева. – СПб.: СпецЛит, 2006. – 845 с.: ил.
   
4. 
   Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. Учебник. – 4-е изд., перераб. и доп. – М.: ОАО Издательство «Медицина», 2007. – 656 с.: ил.
   
5. 
   Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии: Учебное пособие /Под ред. И.А. Самылиной, А.А. Сорокиной. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – 672
   
6. 
   Самылина И.А., Аносова О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас в 2 т. – М., 2007. – Т.1. – 192 с.; Т.2. – 384 с.
   
7. 
   Лекарственные растения Государственной фармакопеи / под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. – М. : АМНИ, 1999. – 488 с.
   
8. 
   Самылина И.А., Ермакова В.А., Бобкова Н.В., Потанина О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас. – Т.3. – М., 2009. – 488 с.
   

1. 
   Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР под ред. Чикова П.С. ВНИИЛР, Ботанический институт им. В.Л.Комарова АН СССР, Ленинградский государственный университет им. А.А.Жданова, Томский государственный университет им. В.В.Куйбышева, Главное управление геодезии и картографии при Совете Министров СССР. М., 1983.
   
2. 
   Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1994
   
3. 
   Саутин В.Н. Определитель лесных растений медицинского значения. М.: Лесная промышленность, 1998.
   
4. 
   Государственная фармакопея Республики Казахстан. Т.1. – Алматы: Издательский дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.
   

1. Какое значение имеет микроскопический метод определения подлинности и доброкачественности растительного сырья?

2. Какие анатомические признаки можно использовать для определения лекарственного растительного сырья?

3. Назовите растения с аномоцитным, диацитным и парацитным типами устьичных аппаратов.

1. 
   Формирование теоретических знаний о структурных образованиях растений, служащих местами секреции и локализации биологически активных веществ.
   
2. 
   Освоение практических навыков по технике микроскопирования.
   
3. 
   Развитие коммуникативных навыков.
   

1. 
   Лекарственные растения Казахстана. / Под ред. К.У. Ушбаева. Алматы: Гылым, 2010 г.-215 с.
   
2. 
   Лекарственные растения Казахстана и их использование. / Под ред. М.К. Кукенова.-Алматы: Гылым, 1996 г.-343 с.
   
3. 
   Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия / Под ред. Г.П. Яковлева. – СПб.: СпецЛит, 2006. – 845 с.: ил.
   
4. 
   Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. Учебник. – 4-е изд., перераб. и доп. – М.: ОАО Издательство «Медицина», 2007. – 656 с.: ил.
   
5. 
   Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии: Учебное пособие /Под ред. И.А. Самылиной, А.А. Сорокиной. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – 672
   
6. 
   Самылина И.А., Аносова О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас в 2 т. – М., 2007. – Т.1. – 192 с.; Т.2. – 384 с.
   
7. 
   Лекарственные растения Государственной фармакопеи / под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. – М. : АМНИ, 1999. – 488 с.
   
8. 
   Самылина И.А., Ермакова В.А., Бобкова Н.В., Потанина О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас. – Т.3. – М., 2009. – 488 с.
   

1. 
   Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР под ред. Чикова П.С. ВНИИЛР, Ботанический институт им. В.Л.Комарова АН СССР, Ленинградский государственный университет им. А.А.Жданова, Томский государственный университет им. В.В.Куйбышева, Главное управление геодезии и картографии при Совете Министров СССР. М., 1983.
   
2. 
   Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1994
   
3. 
   Саутин В.Н. Определитель лесных растений медицинского значения. М.: Лесная промышленность, 1998.
   
4. 
   Государственная фармакопея Республики Казахстан. Т.1. – Алматы: Издательский дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.
   

1. Какие биологически активные вещества входят в состав растений? Где они локализуются в растениях?

2. Какие выделительные ткани, локализующие биологически активные вещества, Вам известны?

3. В чём отличие схизогенных и лизигенных вместилищ?

1. 
   Формирование теоретических знаний о методах проведения качественных, микрохимических и гистохимических реакций на содержание биологически активных веществ в лекарственных растениях.
   
2. 
   Освоение практических навыков.
   
3. 
   Формирование правовой компетенции, применением и освоением правил техники безопасности при работе в лаборатории с реактивами.
   

По технике выполнения и характеру получаемых результатов химические реакции, применяемые для определения биологически активных веществ, можно разделить на несколько групп:

1) качественнее реакции, для проведения которых готовят водные извлечения исследуемого сырья. Результаты реакции наблюдаются при добавлении реактива к полученному извлечению;

2) микрохимические реакции проводят обычно одновременно с микроскопическим анализом лекарственного растительного сырья, наблюдая их результаты под микроскопом, что во много раз повышает чувствительность реакций;

3) гистохимические реакции это такие реакции, с помощью которых можно выявить те или иные соединения непосредственно в клетках и структурах, где они локализуются. Гистохимические реакции проводят на срезах свежего или фиксированного материала особыми способами. В некоторых случаях можно пользоваться высушенным растительным материалом. Результаты реакции наблюдают под микроскопом, вначале при малом увеличении, а затем при большом.

При микроскопической работе следует помнить о важных условиях:

1. Исследуемый материал должен быть живым или максимально приближаться к состоянию живого здорового растения.

2. Исследование требует повторности, чтобы изменения в состоянии организма, зависящие от стадии вегетации, влияния внешних условий, сезонного и суточного режима в метаболизме организма, не давали повода ложному заключению.

3. Срезы должны изготавливаться без применения каких-либо дополнительных воздействий (даже смачивания водой), если это не требуется для проведения реакции.

4. Применяемые при работе растворы и реактивы, пипетки, стёкла и прочий инвентарь должны содержаться в идеальной чистоте.

5. Следует заранее учесть, какие вещества могут участвовать в реакции помимо искомого, и принять меры к их устранению.

6. Необходимо выработать в себе привычку составлять в письменной форме подробное описание результатов реакции и снабжать его зарисовками.

а) смочить каплей раствора железноаммиачных квасцов внутреннюю поверхность коры дуба обыкновенного (Quercus robur) –чёрно-синее окрашивание свидетельствует о наличии дубильных веществ;

б) нанести на предметное стекло несколько капель отвара коры дуба (1:100) и добавить каплю железноаммиачных квасцов. Отметить изменение цвета. Данные внести в таблицу 1.

Задание 2. Проделать качественную реакцию на сапонины. Для этого 2г измельчённого сырья корней и корневищ синюхи голубой (Polemonium coeruleum) поместить в колбу ёмкостью 100 мл прилить 50 мл дистиллированной воды и нагреть на кипящей водяной бане, часто помешивая в течение 10 минут, затем охладить и профильтровать. В пробирку отлить 5 мл отвара, сильно встряхнуть. Образуется обильная и стойкая пена (сапонины). Данные внести в таблицу 1.

Задание 3. Приготовить поперечный срез корня (или корневища) солодки уральской (Glycyrrhiza uralensis), поместить его на предметное стекло и капнуть концентрированную серную кислоту, накрыть покровным стеклом и рассмотреть микропрепарат под микроскопом. Ткани окрасятся в соломенный цвет (реакция на глицирризин). Результаты внести в таблицу 1.

Задание 4. Выдавить несколько капель из кожуры апельсина или лимона на предметное стекло, окрасить их реактивом судан III. отметить изменение окраски. Данные внести в таблицу 1.

Таблица 1

1. 
   Лекарственные растения Казахстана. / Под ред. К.У. Ушбаева. Алматы: Гылым, 2010 г.-215 с.
   
2. 
   Лекарственные растения Казахстана и их использование. / Под ред. М.К. Кукенова.-Алматы: Гылым, 1996 г.-343 с.
   
3. 
   Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия / Под ред. Г.П. Яковлева. – СПб.: СпецЛит, 2006. – 845 с.: ил.
   

4. 
   Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии: Учебное пособие /Под ред. И.А. Самылиной, А.А. Сорокиной. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – 672
   
5. 
   Самылина И.А., Аносова О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас в 2 т. – М., 2007. – Т.1. – 192 с.; Т.2. – 384 с.
   
6. 
   Лекарственные растения Государственной фармакопеи / под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. – М. : АМНИ, 1999. – 488 с.
   
7. 
   Самылина И.А., Ермакова В.А., Бобкова Н.В., Потанина О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас. – Т.3. – М., 2009. – 488 с.
   

1. 
   Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР под ред. Чикова П.С. ВНИИЛР, Ботанический институт им. В.Л.Комарова АН СССР, Ленинградский государственный университет им. А.А.Жданова, Томский государственный университет им. В.В.Куйбышева, Главное управление геодезии и картографии при Совете Министров СССР. М., 1983.
   
2. 
   Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1994
   
3. 
   Саутин В.Н. Определитель лесных растений медицинского значения. М.: Лесная промышленность, 1998.
   
4. 
   Государственная фармакопея Республики Казахстан. Т.1. – Алматы: Издательский дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.
   

1. Какие группы биологически активных веществ Вам известны?

2. Назовите растения, содержащие дубильные вещества, алкалоиды, сапонины.

3.Расскажите о важнейших условиях, необходимых для проведения микрохимических исследований.

4. Охарактеризуйте качественные реакции на дубильные вещества, сапонины, эфирные масла, глицирризин.

Тема №8. Рубежный контроль - коллоквиум

Контрольные вопросы коллоквиума.

1. Понятие о лекарственных растениях, их значение в медицине.

2. История применения и изучения лекарственных растений.

3. Использование лекарственных растений в народной, традиционной и научной медицине.

4. Понятия «лекарственное сырье», и «лекарственные средства». Фармакопея, официальные лекарственные растения.

5. Биологически активные, сопутствующие и балластные вещества. Механизм их действия на организм.

6. Основные группы действующих веществ. Классификация лекарственных растений (по Д.А. Муравьевой, 1978).

7. Качественные реакции на дубильные вещества, сапонины, эфирные масла, глицирризин.

8. Основные группы алкалоидоносных растений, важнейшие сырьевые растения, содержащие алкалоиды, их применение в медицине. Физиологическая роль алкалоидов в растениях.

9. Растения, содержащие соединения общеукрепляющего действия. Алкалоидоносные стимуляторы (шоколадное дерево, кофейное дерево).

10. Основные группы гликозидов, их свойства. Сердечные гликозиды. Значение сердечных гликозидов для медицины. Распространение гликозидсодержащих растений в природе.

11. Сапонины и сапониноносные растения, их значение для медицины, физиологическая роль сапонинов для растений.

12. Сапониноносные стимуляторы из сем. аралиевых, сибирские стимуляторы. Их ареал, химический состав, лечебный эффект, проблемы охраны.

13. Растения, содержащие фенольные соединения. Классификация фенольных соединений, их физико-химические свойства, физиологическая роль для растений, представители отдельных групп, распространение и применение.

14. Кумарины, физико-химические свойства, медико-биологическое значение. Представители отдельных групп кумаринов.

15. Растения, содержащие флаваноиды. Медико-биологическое значение флаваноидов, их физиологическая роль для растений. Виды растений, содержащие флаваноиды.

16. Полимерные фенольные соединения. Дубильные вещества, их классификация, их физико-химические свойства, важнейшие сырьевые растения.

17. Полифенольные соединения, их распространение в раститель-

ном мире, значение для медицины.

18. Применение эфирных масел в медицине. Значение эфирных масел для растений и закономерности в динамике их накопления. Способы получения эфирных масел.

19. Смолы, каучук, гутта.

Кредит № 2
Тема № 1. Лекарственные растения РК, содержащие алкалоиды, гликозиды и сапонины

Цель: Ознакомление с лекарственными растениями РК, содержащие алкалоиды, гликозиды и сапонины и изучение их фармакологического действия.

Задачи обучения.

1. 
   Формирование теоретических знаний о лекарственных растениях РК, содержащие алкалоиды, гликозиды и сапонины.
   
2. 
   Формирование практических навыков проведения анализа лекарственных растений
   
3. 
   Развитие коммуникативных навыков, пригодных при работе с лекарственными растениями
   

Алкалоиды – природные азотсодержащие соединения основного характера, имеющие сложный состав и обладающие сильным специфическим действием. В переводе термин «алкалоид» (от араб.alkali щелочь греч. eoides – подобный) означает щелочеподобный. Подобно щелочи алкалоиды образуют с кислотами соли. В растениях алкалоиды находятся в клеточном соке в растворенном виде. Содержание их колеблется от тысячных долей процента до нескольких процентов. При содержании 1–3% – растение относится к богатым алкалоидами – высокоалкалоидоносное.

С использованием алкалоидов связано производство тонизирующих напитков (чай, кофе, какао), а также табачная промышленность. Ряд алкалоидов применяют в сельском хозяйстве, как инсектициды. Алкалоиды имеют ряд отрицательных свойств. При применении некоторых алкалоидов развивается пристрастие, лекарственная зависимость (наркомания). Многие алкалоиды – сильные яды, способные вызывать отравления с летальным исходом. Все алкалоидоносное сырье относится к сильнодействующему и ядовитому.

Гликозиды (от глико – сладкий) – широко распространенные природные соединения, распадающиеся под влиянием различных агентов (кислота, щелочь, ферменты) на углеводную и неуглеводную (агликон) части. Разнообразие гликозидов зависит как от разнообразия сахара (моносахариды, дисахариды, олигосахариды), так и от природы агликона. Терапевтическое действие оказывают агликоны. Строение и свойства их отличаются многообразием. Сахара обеспечивают растворимость и легкую всасываемость гликозидов. В растениях гликозиды играют весьма разнообразную роль. Они повышают растворимость и проницаемость веществ. Гликозиды весьма активные биологические вещества. Большое значение в медицинской практике имеют гликозиды сердечной группы. Они действуют на сердце избирательно. Под влиянием сердечных гликозидов улучшается сердечная деятельность, усиливается венозное давление, уменьшается возбуждение центральной нервной системы. Гликозиды, как правило, очень ядовиты и могут быть использованы по назначению врача. Неправильное их применение может вызвать паралич при сильном истощении сердечной мышцы.

Сапонины – (от латинского названия растения Saponaria – мыльнянка, из которого впервые были выделены эти вещества) это гликозиды, водные растворы которых при встряхивании дают обильную и устойчивую пену, не содержащую щелочи. Сапонины найдены почти в половине видов лекарственных растений, особенно много их у представителей семейств гвоздичных и первоцветных. Сапонины в зависимости от строения агликона делят на стероидные и тритерпеновые.

Задание 1. Рассмотреть гербарные образцы алкалоидоносных растений. Выявить их диагностические признаки на примере растений сем. Пасленовые. Данные внести в таблицу 1.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

1. 
   Лекарственные растения Казахстана. / Под ред. К.У. Ушбаева. Алматы: Гылым, 2010 г.-215 с.
   
2. 
   Лекарственные растения Казахстана и их использование. / Под ред. М.К. Кукенова.-Алматы: Гылым, 1996 г.-343 с.
   
3. 
   Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия / Под ред. Г.П. Яковлева. – СПб.: СпецЛит, 2006. – 845 с.: ил.
   

4. 
   Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии: Учебное пособие /Под ред. И.А. Самылиной, А.А. Сорокиной. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – 672
   
5. 
   Самылина И.А., Аносова О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас в 2 т. – М., 2007. – Т.1. – 192 с.; Т.2. – 384 с.
   
6. 
   Лекарственные растения Государственной фармакопеи / под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева. – М. : АМНИ, 1999. – 488 с.
   
7. 
   Самылина И.А., Ермакова В.А., Бобкова Н.В., Потанина О.Г. Фармакогнозия: учебное пособие: Атлас. – Т.3. – М., 2009. – 488 с.
   

1. 
   Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР под ред. Чикова П.С. ВНИИЛР, Ботанический институт им. В.Л.Комарова АН СССР, Ленинградский государственный университет им. А.А.Жданова, Томский государственный университет им. В.В.Куйбышева, Главное управление геодезии и картографии при Совете Министров СССР. М., 1983.
   
2. 
   Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М.: Высшая школа, 1994
   
3. 
   Саутин В.Н. Определитель лесных растений медицинского значения. М.: Лесная промышленность, 1998.
   
4. 
   Государственная фармакопея Республики Казахстан. Т.1. – Алматы: Издательский дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.
   

1. Какие соединения называются алкалоидами?

2. Укажите меры предосторожности при работе с сырьем чемерицы.

3. Укажите динамику накопления алкалоидов при сушке и хранении лекарственного сырья.

4. Каковы рациональные сроки заготовки, сушки и хранения сырья, содержащего алкалоиды?

5. Назовите мероприятия, проводимые при сборе, сушке и хранении ядовитого сырья.

6.Какие природные соединения называются гликозидами? Приведите примеры растений, содержащих гликозиды? Назовите растения, содержащие гликозиды сердечного действия?

7. При какой температуре производится сушка листьев наперстянки? Почему листья наперстянки сушат быстро?

8. Назовите растения, содержащие сапонины.

9. Каков биохимический состав корня солодки? Назовите лекарственные средства, получаемые из корня солодки. Как используется корень солодки в медицине и других отраслях народного хозяйства?

10. Перечислите растения семейства аралиевых, укажите их ареал. Каковы общие ботанические признаки растений семейства аралиевых? Как используются они в медицине?