Результаты исследования и их обсуждение

В результате исследования структурной организации печени при хронической интоксикации различными субтоксическими дозами хлористого кадмия (1,5мг/кг и 3мг/кг м.т.) получены следующие результаты: через 1 сутки после хронической интоксикации наблюдались существенные сдвиги системного характера, свидетельствующие о нарушениях во всех структурах тканевого микрорайона печени. В гепатоцитах всех исследуемых животных отмечали отек клеток, развитие вакуольной и жировой дистрофии. Многие гепатоциты, в основном, в перипортальной зоне находились в состоянии деструкции (рисунок 1). У животных, получавших таган-сорбент наблюдались аналогичные нарушения (рисунок 2). Явления некроза и некробиоза гепатоцитов у животных, получавших двойную дозу кадмия в 3мг/кг м.т. были более выражены (рисунок 3). Степень плотности цитоплазмы в различных гепатоцитах варьировала, но у большинства гепатоцитов цитоплазма просветлялась. При сорбентной терапии, вследствие непродолжительного времени воздействия, наблюдалась схожая картина (рисунок 4). Указанные нарушения приводили к снижению численной плотности гепатоцитов: на 16% и 18%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. У животных отмечалась тенденция к снижению количества двуядерных гепатоцитов. В некоторых участках паренхимы наблюдалась клеточная инфильтрация, в которых встречались макрофаги, тучные клетки, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты и плазмоциты.

Это являлось реакцией на некротические нарушения гепатоцитов. Вдоль портальных трактов наблюдали скопления клеток крови, преимущественно лимфоцитов. Отмечался отек периваскулярного пространства сосудов, истончение эндотелиальной выстилки, плазморрагии, извитости сосудов.

Синусоиды печени были расширены, в них наблюдался стаз эритроцитов, лимфоцитов и макрофагов, что суживало просвет синусоидов и нарушало кровоток. Наблюдалось чередование участков расширенных капилляров с ишемически спазмированными, что является свидетельством микроциркуляторных нарушений в печени под воздействием токсиканта. На препаратах отмечалось расширение интерстиция (перисинусоидального пространства Диссе), где наблюдалось скопление электронно-плотного вещества белкового происхождения, клеточного детрита (остатков разрушенных клеток), лимфоцитов, макрофагов. Это нарушало отток первичной лимфы, снижало интенсивность гемато-тканевого обмена, что вызывало в свою очередь ишемическое повреждение гепатоцитов. Все указанное приводило к снижению транспорта лимфы из печени, и как следствие, к развитию несбалансированного фиброза печени. Известно, что продукты распада гепатоцитов активизируют Т-лимфоциты, действующие через лимфокины на макрофаги, которые стимулируют развитие фибропластического процесса. В то же время, происходит и прямая стимуляция макрофагов продуктами окисления мембран разрушающихся клеток. Обращает на себя внимание появление в перисинусоидальном пространстве Диссе, в условиях кадмиевой интоксикации, В-лимфоцитов, трансформирующихся в плазматические клетки. Известно, что взаимодействие макрофагов и лимфоцитов - важный этап иммунного ответа организма. Изучение макрофагов и лимфоидных клеток в условиях антигенной стимуляции выявило, что активность макрофагов влияет на трансформацию лимфоцитов в плазматические клетки [Медуницин Н.В., 1999; Peterson T.C., Renton K.W., 2006]. Все указанные выше нарушения были более выражены у животных, получавших хлорид кадмия в дозе 3мг/кг м. т. Печень животных, которым после эксперимента добавляли в рацион таган-сорбент, через 1сутки имела почти сходное с описанным выше строение. Это говорит о недостаточности срока воздействия указанного сорбента и соответственно его протективного действия.

Морфометрический анализ препаратов печени выявил, что через 1сутки после кадмиевой интоксикации, объем цитоплазмы возрастал, относительно контрольного значения: на 15% и на 20%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Это свидетельствует об отеке печеночных клеток, развивающемся вследствие воздействия токсиканта. Причем отек клеток у животных, получавших дозу химиката в 3мг/кг м.т., был выражен больше. У животных с сорбентной терапией наблюдались аналогичные нарушения. Объемная плотность синусоидов, через 1 сутки после экзотоксикоза, увеличивалась, у животных в 1,6 и в 2,2 раза, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. В то же время, у животных с таган-сорбентом эти значения, по сравнению с данными животных без коррекции, снижались на 10% и 8%.

Ультратруктурное исследование гепатоцитов при хроническом воздействии кадмия показало нарушения мембранотропного характера. На препаратах отмечались нарушения со стороны ядерного аппарата клеток, внутриклеточных органелл, межклеточных контактов, конфигурации микроворсинок гепатоцитов, а также желчных капилляров, способствующих развитию микроциркуляторных нарушений. О наблюдаемых в цитоплазме гепатоцитов признаках повреждения аппарата синтеза белков и выработки энергии, свидетельствуют: расширение и фрагментация цистерн ГЭР, в которых появлялись везикулярно расширенные участки, лишенные рибосом; снижение числа прикрепленных и свободных рибосом; набухание митохондрий с редукцией крист (рисунок 5). При сорбентной терапии наблюдается некоторое снижение структурных нарушений (рисунок 6). Отмечалась вариабельность плотности матрикса митохондрий, что указывает на различие их энергетического состояния, обусловленного интоксикацией, а в целом – о недостаточности энергообеспечения гепатоцитов. Наблюдалась картина «слияния» митохондрий. В этот процесс были вовлечены мембраны ГЭР, образующие структурно ассоциированные с митохондриями мито-ГЭР комплексы. Существует мнение, что эти образования нужны для транспорта специальных белков и, возможно, липидных компонентов из ГЭР в митохондрии [Meyer V.A., Meyer P.A., 1997]. В работах этих авторов установлено, что для синтеза цитохрома Р-450 необходимы тесные структурные связи митохондрий и ГЭР. По-видимому, такие ультраструктурные перестройки в паренхиматозных клетках печени связаны с метаболизмом токсиканта в клетках органа - мишени и необходимы для обеспечения окислительного гидроксилирования ксенобиотика монооксигеназной системой печени. Все указанные нарушения в гепатоцитах животных с дозой токсиканта в 3мг/кг м.т. были выражены больше.

Набухание митохондрий и редукция крист, расширение и фрагментация цистерн ГЭР, уменьшение числа рибосом, снижение уровня гликогена в гепатоцитах печени. Рисунок 5 – Ультраструктурные нарушения в гепатоцитах печени крысы, не получавшей коррекцию сорбентом, на 1сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Электронограмма. Ув.×10000.

Набухание митохондрий, расширение и фрагментация цистерн ГЭР, уменьшение числа рибосом и уровня гликогена в гепатоцитах печени. Рисунок 6 – Ультраструктурные нарушения в гепатоцитах печени крысы, получавшей таган-сорбент, на 1сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Электронограмма. Ув.×10000.

Морфометрический анализ показал, что через 1 сутки, после окончания затравки, у животных объемная плотность ГЭР в гепатоцитах возрастала на 35% и 47%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и в 3мг/кг м.т. У животных с сорбентной терапией эти значения, относительно данных крыс без коррекции, уменьшались на 10% и 9%. Численная плотность прикрепленных рибосом в гепатоцитах уменьшалась через 1 сутки в 2,4 и в 2,7 раза, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м. т. У животных с сорбентом эти значения, относительно данных животных без лечения, возрастали - на 14% и 12% (рисунок 7). Число свободных рибосом, через 1сутки после интоксикации, уменьшалось: в 2,3 и в 2,5 раза (рисунок 8). У крыс, с коррекцией таган-сорбентом, число свободных рибосом, относительно данных у животных без лечения, возрастало: на 12% и 9%. Это свидетельствует о протективном влиянии данного сорбента даже в такой небольшой срок, как одни сутки. Все это указывает на значительное снижение белоксинтетической функции в печеночных клетках при кадмиевой интоксикации и протективную роль таган-сорбента на ультраструктуру гепатоцитов уже в первые сутки, после затравки.

Морфометрически признаки недостаточности энергообеспечения клеток проявлялись увеличением объемной плотности митохондрий: на 12% и 15%, соответственно дозе химиката в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т.

Объемная плотность митохондрий, через 21 сутки после отравления, снижалась, но оставалась выше контроля на 4% и 6%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Коррекция приближала данные величины к исходным значениям, снижая объемную плотность митохондрий еще на 4% в обеих группах. Показатели липидов на 21 сутки был выше контроля на 20% и 33%. Корреция сорбентом снижала их еще на 33% и 20%. Объемная плотность гликогена и липидов на 21 сутки не достигала контрольных значений и еще намного отличалась от показателей интактных животных. На 21 сутки уровень гликогена был ниже контрольных значений на 17% и 39%, соответственно дозе химиката. При сорбентной терапии содержание гликогена возрастало на 9% в обеих группах. Таким образом, 21 дневное использование сорбента оказывало после кадмиевой интоксикации значительное саногенное, протективное влияние на структурно-функциональную организацию тканевого микрорайона печени: гепатоцитов и его органоидов, структуру микроциркуляторного русла и интерстиция, снижая уровень всех указанных выше нарушений. Степень повреждений при интоксикации и процессы восстановления были дозозависимы. При воздействии таган-сорбента, показатели большинства органелл достигали контрольного уровня. Труднее поддавались восстановлению более глубокие нарушения, наблюдающиеся при двойной дозе хлористого кадмия в 3мг/кг м.т.

Полученные результаты подтверждают, что функциональная морфология гепатоцитов определяется состоянием синусоидальных клеток печени (эндотелиоцитов, печеночных макрофагов, липоцитов). Это позволяет рассматривать гепатоциты и синусоидальные клетки как единую кооперативную систему клеток. Численная плотность синусоидальных клеток в тестовой площади у животных после отравления существенно снижалась: на 22% и 32%, соответственно дозе токсиканта 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Лечение таган-сорбентом, оказывая протективное воздействие, повышало у животных количество этих клеток на 8% и 17%, соответственно дозе химиката. В эндотелиоцитах (ЭЦ) и в печеночных макрофагах, при экзотоксикозе хлоридом кадмия в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., происходили ультраструктурные нарушения мембранотропного характера, которые протекали синхронно с изменениями в гепатоцитах. Эти отклонения приводили, через 1 сутки после интоксикации, к нарушению белоксинтезирующей и энергообразующей функций синусоидальных клеток.

Ультраструктурно в эндотелиоцитах и в клетках Купфера отмечались однонаправленные нарушения в виде везикулярного расширения и фрагментации цистерн ГЭР. Морфометрические исследования показали возрастание объемной плотности ГЭР и снижение числа рибосом, что нарушало процессы синтеза белков. Так, в ЭЦ объемная плотность ГЭР возрастала через 1сутки на 19% - при дозе токсиканта 1,5мг/кг и на 41%- при дозе-3мг/кг м.т. Число прикрепленных рибосом в ЭЦ, при дозе хлористого кадмия 1,5мг/кг, уменьшалось в 2,1 раза, а при дозе химиката 3мг/кг м.т. - в 2,4 раза. При сорбентной терапии число прикрепленных рибосом возрастало на 36% и 30%. Число свободных рибосом также снижалось: 1,9 раза и в 2,2 раза, соответственно дозе кадмия. После коррекции их число повышалось на 6% и 8%. Нарушалась энергообеспеченность эндотелиальных клеток, о чем свидетельствует увеличение объемной плотности митохондрий, изменение плотности матрикса, редукция крист в некоторых из них. Митохондрии компоновались в блоки, мембраны ГЭР тесно прилегали к митохондриям. Объемная плотность митохондрий в ЭЦ через 1сутки возрастала на 16% и на 41%, соответственно дозе кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Это говорит об отеке митохондрий и нарушении энергообеспечения эндотелиоцитов под действием хлорида кадмия. У животных, отравленных дозой 3мг/кг м.т., отек был выражен значительно. После коррекции объемная плотность митохондрий снижалась, по сравнению с данными животных без лечения, на 6% и 5%. Наблюдаемое просветление матрикса митохондрий с их вакуолизацией и фрагментация эндоплазматического ретикулума ЭЦ, считают некоторые авторы, сопряжено с нарушением структуры мембран и связанных с этим многочисленных функций и, прежде всего, регуляции обменных процессов через плазмолемму [ Bedossa P.,1999; Волкова Е.С., 2002].

Объемная плотность лизосом в ЭЦ возрастала через 1 сутки на 22% - при дозе химиката 1,5мг/кг и на 30% - при дозе этого вещества 3мг/кг м.т.. Коррекция таган-сорбентом приводила к снижению этих показателей на 7% и 3%. Наблюдались признаки снижения эндоцитозной активности ЭК печени. Об этом говорит достоверное снижение объемной плотности микропиноцитозных пузырьков: в 2,1 и в 2,8 раза, соответственно дозе кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Указанное свидетельствует о снижении транспортной функции в ЭК, а значит о снижении защитных механизмов в печени при отравлении солями кадмия, особенно в больших дозах. Наблюдалось изменение соотношения базальных и люминальных везикул в пользу последних, что говорит о снижении плотности базальных везикул. В печени, как считают некоторые авторы [Шкурупий В.А., 1989; Автандилов Г.Г., 1990; Шурлыгина А.В., Летягин А.Ю.,Труфакин В.А., 1993], очищение крови от антигена происходит в основном эндотелиальными клетками через рецептор-опосредованный эндоцитоз. Снижение пиноцитозной активности эндотелиоцитов синусоидов печени замедляет удаление антигенов из крови. Это способствует дифференцировке Т-клеток в эффекторные клетки Т-хелперы. Вследствие этого возрастает Т-зависимая активация В-лимфоцитов и их дифференцировка в плазматические клетки. Это является, считают авторы, ключевым моментом в иммунно-опосредованном повреждении клеток печени.

Изучение особенностей морфологии клеток Купфера, через 1 сутки после затравки, показало, что для них характерно, прежде всего, увеличение их числа с явлениями гетерофагоцитоза. Наблюдалась картина фагоцитоза частиц гликогена, а порой и эритроцитов из внеклеточных пространств. Для этих клеток характерно наличие длинных псевдоподий, плотно прилежащих к гепатоцитам. Встречались печеночные макрофаги, ультраструктурные особенности которых свидетельствовали о высокой секреторной активности. В отдельных клетках наблюдались признаки деградации, проявляющиеся, по-видимому, в силу высокой фагоцитарной активности макрофагальных клеток, вызванные поглощением продуктов некротически измененных печеночных клеток, очищением крови от токсических метаболитов. Наряду с этим встречались клетки, находящиеся в пролиферативном цикле, что подтверждают данные о поддержании популяции клеток Купфера при восстановлении структурного гомеостаза печени, не только за счет подвижного фонда моноцитов крови, но и за счет деления фиксированных клеток [Маянский Д.Н., Урсов И.Г., 1997]. Ультраструктура клеток Купфера печени при хроническом воздействии хлористым кадмием соответствовала структуре активно фагоцитирующих клеток, что подтверждают данные морфометрического анализа этих клеток. Так, объемная плотность ГЭР печеночных макрофагов крыс имела тенденцию к возрастанию на 25% и 37%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Использование таган-сорбента уменьшало объемную плотность ГЭР на 9% и 8%. Численная плотность прикрепленных рибосом уменьшалась в 2 и в 2,3 раза, соответственно дозе химиката. Число свободных рибосом также уменьшалось - в 1,7 и в 1,9 раза. Все это свидетельствует о значительном угнетении белоксинтетической функции клеток Купфера при хроническом отравленни хлористым кадмием, особенно у животных с дозой вещества в 3мг/кг м.т. После коррекции число прикрепленных рибосом возрастало на 12% и на 13%, а число свободных рибосом - 10% и на 9%. Это свидетельствует о благоприятном воздействии данного сорбента на основные функции изучаемых клеток даже в столь непродолжительный промежуток времени. Объемная плотность митохондрий в клетках Купфера через 1сутки повышалась на 16% и на 24%. Это свидетельствует об отеке митохондрий и возможности затруднения энергообеспечения печеночных макрофагов под влиянием кадмия. Коррекция сорбентом уменьшала эту величину на 6% в обеих группах животных.

В печеночных макрофагах значительно возрастали катаболические процессы путем увеличения объемной плотности вторичных лизосом. Объемная плотность лизосом возрастала в 1,9 и в 2 раза. Под действием таган-сорбента эти показатели лизосом снижались на 15% и 8%. Возрастание объемной плотности лизосомально-вакуолярного аппарата клеток Купфера способствовало усиленному фагоцитозу при интоксикации. Цитоплазма печеночных макрофагов нередко имела пенистый вид, содержала крупные вторичные лизосомы. Полученные данные указывают на значительное участие лизосомально-вакуолярного аппарата указанных клеток в процессах детоксикации хлористого кадмия, что подтверждает концепцию Л.Е Панина и Н.Н.Маянской [Панин Л.Е.. Маянская И.Н., 1987] о возможности объединения гидролитического потенциала лизосом и системы детоксикации ксенобиотиков соматических клеток с еще более мощным потенциалом лизосомальных гидролаз синусоидальных клеток. Особенно это выражено при дозе хлористого кадмия в 3мг/кг м.т. В рассматриваемых клетках снижалась и транспортная функция, за счет уменьшения числа микровезикул, что свидетельствует о снижении защитных механизмов в печени при отравлении кадмием, особенно в больших дозах. На 1-е сутки объемная плотность микропиноцитозных везикул уменьшалась в 2,1 и в 2,6 раза, соответственно дозе кадмия. Таган-сорбент повышал уровень микровезикул на 27% и 21%. Наблюдалось изменение соотношения базальных и люминальных везикул в пользу последних, что говорит о снижении плотности базальных везикул. У животных, получавших двойную дозу хлористого кадмия в 3мг/кг м.т. изменения были более глубокими. Выраженного протективного влияния таган-сорбента, из-за краткости времени действия, через 1 сутки не наблюдалось, хотя отмечалась тенденция к снижению нарушений в клетках животных, получавших сорбент.

На 7-е сутки под действием, развивающихся компенсаторно-приспособительных процессов после кадмиевой интоксикации, происходило некоторое улучшение, но нарушения в структурных компонентах синусоидальных клеток сохранялись (рисунок 13). При сорбентной терапии наблюдалось значительное снижение нарушений (рисунок 14). Этот процесс у животных, получавших кадмий в дозе 1,5мг/кг м.т. проходил более интенсивно. У животных с высокой дозой токсиканта в 3мг/кг восстановление проходило медленнее и труднее. Таган-сорбент в этот срок существенно способствовал сглаживанию нарушений. Особенно это было выражено у животных, получавших хлорид кадмия в дозе 1,5мг/кг м.т., что свидетельствует о дозозависимости действия сорбента.

Объемная плотность митохондрий в ЭЦ на 21 сутки у животных, получавших кадмий в дозе 1,5мг/кг, почти достигала контрольных значений, отличаясь только на 3%. В то время как, у животных, получавших дозу 3мг/кг м.т., отличие еще было значительное - на 24%. Это доказывает дозозависимость воздействия хлорида кадмия. Таган-сорбент снижал далее уровень объемной плотности митохондрий в обеих группах животных еще на 4%. Восстановительные процессы у животных с дозой кадмия в 1,5мг/кг м.т., протекали более интенсивно. Однако, некоторые показатели ЭЦ, у животных с дозой хлорида кадмия в 3мг/кг м.т., также как в гепатоцитах, на 21 сутки сохраняли изменения и после коррекции. Это говорит о том, что при кадмиевой интоксикации глубина структурных нарушений в исследуемых клетках значительна и для полного восстановления требуется больше времени.

В печеночных макрофагах объемная плотность ГЭР на 21 сутки снижалась, но контрольных значений не достигала и оставалась ниже их на 10% и на 22%, соответственно дозе токсического вещества в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. После коррекции указанные показатели снижались в обеих группах животных еще на 10%. Показатели прикрепленных и свободных рибосом, у животных, отравленных дозой хлорида кадмия в 1,5мг/кг, были ниже контрольных значений на 38% и 31%, соответственно. У животных, получавших химикат в дозе 3мг/кг, показатели рибосом были ниже контрольных величин на 45% и 39%. Это свидетельствует о том, что на 21 сутки эксперимента функция синтеза белков полностью не восстанавливается. После коррекции у животных, получавших хлорид кадмия в дозе 1,5мг/кг, число рибосом возрастало еще на 40% и 22%, соответственно вида рибосом. В другой группе животных, получавших токсикант в дозе 3мг/кг м.т., численная плотность рибосом после коррекции возрастала еще на 38% и 17%, соответственно. Морфометрически объемная плотность митохондрий в клетках Купфера на 21 сутки уменьшалась, но была выше контрольных величин еще на 8% и 20%. Это свидетельствует о том, что функция энергообепечения данных клеток к 21 суткам восстанавливается лишь частично, особенно это выражено у животных, получавших дозу хлорида кадмия в 3мг/кг м.т. Сорбентная терапия снижала, значения объемной плотности митохондрий еще на 7% и 6%. На 21 сутки эксперимента увеличивалась объемная плотность микропиноцитозных везикул клеток Купфера, но она оставалась ниже контрольных значений на 37% и 43%, соответственно дозе токсического вещества в 1,5мг/кг и 3мг/кг. Таган-сорбент повышал количество микровезикул еще на 34% и 28%.

При интоксикации хлористым кадмием в липоцитах печени (клетках Ито) крыс происходила частичная редукция липидных включений, являющихся хранилищем витамина А. Деградация липидных капель осуществлялась образованием аутофагосом и дальнейшего экзоцитоза, что вело к разрастанию коллагеновых волокон в интерстиции. Известно, что витамин А липидных гранул блокирует превращение липоцитов в миофибробласты, потеря его приводит к активации фиброгенеза [Naher J., Mcguire R.,1999; Callea F., Desmet V.,1999].

Кадмий, являющийся токсикантом техногенного происхождения, вызывает разнообразные функциональные нарушения в печени, подавляя синтез белков и ферментов, участвующих в метаболизме токсикантов. Особое место в оценке состояния животных отводится аминотрансферазам и билирубину: аланинаминотрансферазе (АлАТ), аспартатаминотрансферазе (АсАТ) и общему билирубину. Поражение тканей и органов при интоксикациях обычно сопровождается повышением содержания этих ферментов в сыворотке крови, и считается результатом их выхода, при массовом разрушении клеток, в кровяное русло. Уровень аминотрансфераз у контрольных животных соответствовал: АлАТ-0,14±0,02мккат/л, а АсАТ- 0,15±0,02 мккат/л. После хронической интоксикации хлоридом кадмия, показатель АлАТ в 1-е сутки возрастал, по сравнению с контролем, в 1,6 и в 3,3 раза, соответственно дозе хлорида кадмия 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Под действием компенсаторных процессов, на 7-е и 21 сутки, данные АлАТ снижались. К 21 суткам величина АлАТ составляла 0,19 мккат/л и 0,29 мккат/л, что было выше контроля в 1,3 и в 2 раза, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Коррекция сорбентом значительно уменьшала уровень АлАТ в крови. В то же время, уровень АсАТ через 1 сутки был выше контрольной величины в 2 и 4 раза, соответственно дозе химиката 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. К 7-м и 21 суткам величина АсАТ снижалась. Так, к 21 суткам уровень АсАТ составлял 0,24 мккат/л и 0,44мккат/л., что выше контроля в 1,6 и в 2,9 раза, соответственно дозе кадмия. Статистический анализ данных позволил установить, что коэффициент зависимости (r) содержания АлАТ в крови от дозы составлял 0,97 при Р=0,008, для АсАТ этот показатель (r) был равен 0,94 при Р= 0,016. Чем больше кадмия получало животное, тем больше возрастало содержание аминотрансфераз. Увеличение содержания аминотрансфераз в крови крыс, подвергавшихся затравке, является достоверным признаком повреждающего действия кадмия на печень. При сравнении воздействий кадмия на ферменты, со стороны АсАТ отмечались более выраженные сдвиги содержания, по сравнению с АлАТ. Таган- сорбент значительно снижал содержание аминотрансфераз в крови крыс, однако сорбент был более эффективен у животных, получавших дозу в 1,5мг/кг м.т. Уровень АлАТ и АсАТ в крови крыс при дозе токсиканта в 1,5 мг/кг, после воздействия сорбента к 21 суткам, возвращался к контролю. Воздействие большей дозы кадмия вызывало выраженное увеличение содержания ферментов, которое, под воздействием сорбента, имело тенденцию к снижению, но в более длительный срок.

Содержание общего билирубина в контрольной группе крыс составляло 8,1±0,05 мкмоль/л., а при воздействии кадмия в 1-е сутки, отмечалось увеличение его содержания в крови крыс в 1,5 и в 3,1 раза, соответственно дозе кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. К 7-м и 21 суткам уровень билирубина снижался. К 21 суткам он составлял 10,6 мкмоль/л. и 13,82 мкмоль/л, что был больше контроля на 31% и 71%. Это подтверждает предположение о глубоком повреждении печени токсикантом, особенно при двойной дозе хлорида кадмия, и свидетельствует о снижении функциональной активности печени. Коррекция таган - сорбентом приближала показатели билирубина в крови животных к контрольному уровню.

Таким образом, рассматривая в целом проблему детоксикации кадмия, необходимо отметить особую роль клеток печени, микросомальные оксигеназы которой оказываются первой барьерной системой на пути введенного химического вещества. Благодаря детоксикации кадмия и его метаболитов, печень оказывает защитное действие и в отношении других органов, имеющих более низкую ферментную активность по отношению к токсическим метаболитам.

Академиком Ю.И. Бородиным сформулирована концепция, согласно которой лимфоузлы рассматриваются в качестве маркеров средового прессинга на лимфатическую систему. Это позволяет понять особенности гисто-лимфатических отношений в системе «печень-регионарный лимфатический узел». Лимфоузлы вместе с печенью формируют гомеостатирующую систему, которая, в первую очередь, реагирует на токсическое воздействие. В доступной литературе работ, посвященных изучению мофофункциональных нарушений в регионарных лимфоузлах печени при интоксикации солями кадмия мы не встретили.

В результате наших исследований выявлено, что хронический экзотоксикоз хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. вызывает в лимфоузлах печени через 1 сутки существенные структурно-функциональные нарушения в виде отека капсулы и паренхимы лимфоузла, а также расширения площади всех синусов. За счет развития отека паренхимы узла и расширения просвета синусов, особенно мозговых, возрастает дренажная функция узла. Это говорит об усилении дренажной функции и повышенном выносе клеток из лимфоузла, вследствие воздействия токсического вещества. Происходит некоторое уменьшение корково-мозгового индекса на 4% и 9%, соответственно дозе химиката. Это свидетельствует о снижении компактности структуры печеночного узла, за счет отека паренхимы и расширения синусов. В результате тип лимфоузла печени переходит с компактного на промежуточный.

Площадь паракортикальной зоны коркового вещества лимфоузла печени через 1сутки уменьшалась, что говорит о реакции паренхимы лимфоузла на воздействие, поступающей из печени лимфы, снижением площади структур, относящихся к Т - зависимым зонам. Это, по-видимому, происходит вследствие гибели клеток из-за токсической стресс-реакции, в ответ на хроническое воздействие хлорида кадмия, и объясняется деятельностью макрофагов, воздействующих на пролиферацию Т-лимфоцитов (рисунок 15).. Макрофаги при встрече с токсикантом и продуктами его метаболизма, изменяют свой метаболизм, что приводит к, появлению продуктов супероксидного радикала и перекиси водорода. Через 1 сутки после интоксикации, объемная плотность паракортекса снижалась на 16% и 29%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Сорбент, оказывая положительное действие, повышал показатели на 8% и 6%. Площадь первичных лимфоидных узелков в корковом веществе через 1 сутки уменьшалась, а площадь вторичных лимфоидных узелков увеличивалась. Развитие В-зависимого гуморального ответа на воздействие токсиканта сопровождалось расширением площади вторичных лимфоидных узелков с активным формированием центров размножения и разрастанием медуллярных тяжей мозгового вещества что, по всей видимости, служит необходимым условием эффективного образования антител. Через 1сутки площадь вторичных лимфоидных узелков возрастала: на 55% и 73%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. (рисунок 16). Это свидетельствует о разрастании, в ответ на интоксикацию, площади В-зависимых зон, вследствие развития иммуннопролиферативных процессов в центрах размножения. Известно, что регуляция функций В-лимфоцитов при развитии иммунного ответа осуществляется не только Т-лимфоцитами, которые действуют путем кратковременных прямых контактов, но и вспомогательными клетками: макрофагами, цитокинами макрофагального происхождения, интердигитирующими клетками и фолликулярными дендритными клетками. Активация В-лимфоцитов, вследствие взаимодействия со специфическим антигеном, по-видимому, приводит к появлению чувствительности к продуктам активированных макрофагов, которые значительно стимулируют В-лимфоциты к пролиферации и дифференциации. Воздействие таган-сорбента снижало указанные показатели на 16% и 13% (рисунок 16). Это показывает положительный эффект действия сорбента и свидетельствует о выраженности эффекта при меньшей дозе кадмия в 1,5мг/кг м.т. Расширялась площадь мозговых синусов (рисунок 17) и мозговых тяжей (рисунок 18), особенно у животных, получавших дозу химиката в 3мг/кг м.т.

Исходя из сказанного, можно заключить, что, поступающая из печени лимфа, содержащая токсикант и его метаболиты подвергается обработке в регионарных лимфоузлах, реагирующих на введение хлористого кадмия очень характерно - нарастанием площади структур, занимаемых В-зонами: мозговых тяжей и вторичных лимфоидных узелков. Полученные данные свидетельствуют о синхронном с печенью участии регионарных лимфоузлов в гомеостатических реакциях организма при кадмиевой интоксикации.

Рисунок 15 – Динамика изменений объемной плотности паракортикальной зоны в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом.	Рисунок 16 – Динамика изменений объемной плотности вторичных лимфоидных узелков в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом.
Рисунок 17 - Динамика изменений объемной плотности мозговых синусов в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом.	Рисунок 18 – Динамика изменений объемной плотности мозговых тяжей в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. а также коррекции таган-сорбентом.

Во всех структурных компонентах паренхимы лимфоузла печени, через 1сутки после экзотоксикоза, развивались иммуноморфологические реакции в виде пролиферации, бласттрансформации и дифференциации клеток, в ответ на воздействие токсиканта. Морфодинамика цитологического состава разных зон лимфоузла сопровождалась неодинаковыми по интенсивности и направленности качественными изменениями клеток разных популяций. Это, по-видимому, зависело от морфофункциональных особенностей зоны и от дозы кадмия. Через 1 сутки клеточные сдвиги во всех исследуемых зонах печеночного лимфоузла характеризовались уменьшением числа малых и средних лимфоцитов и увеличением больших, бластных форм лимфоцитов (рисунок 19). Во всех зонах отмечались фагоцитарная, плазмоцитарная, тучноклеточная реакции. В мозговых тяжах и во вторичных лимфоидных узелках отмечалось увеличение численности плазмобластов, плазмоцитов, макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток, клеток Мотта, а также митозов. Наиболее существенным морфологическим признаком экзотоксикоза является возрастание числа дегенерирующих клеток. Это объясняется прямым токсическим воздействием кадмия, присутствующего в крови и лимфе, на лимфоузел. Возможно попадание в лимфоузел этих клеток из зоны лимфосбора, то есть из печени в составе афферентной лимфы. Увеличение числа дегенерирующих клеток сопровождалось возрастанием числа макрофагов, что свидетельствует об активации фагоцитарной реакции (рисунок 20).

Через 7 суток, под влиянием компенсаторных процессов, в структуре лимфоузлов печени наблюдались позитивные сдвиги. Так, объемная плотность капсулы, относительно значений предыдущего срока, снижалась в обеих группах животных на 10%. Таган сорбент далее уменьшал эти значения еще на 14% и 10%. Наблюдалось возрастание площади паракортикальной зоны на 7% и 11%, соответственно дозе токсиканта 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. После коррекции эти значения повышались еще на 7%, в обеих группах. Площадь вторичных лимфоидных узелков, относительно данных 1-х суток, под влиянием компенсаторных процессов, снижалась на 12% и 8%, соответственно дозе химиката в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Коррекция сорбентом снижала эти величины еще на 13% и 12%. Площадь мозговых тяжей на 7-е сутки уменьшалась, в обеих группах животных, на 5%. При сорбентной терапии этот показатель снижался еще на 10% и 9%. Значительно уменьшалась на 7-е сутки площадь мозговых синусов: на 11% и 9%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и в 3мг/кг м.т. Таган- сорбент снижал ее еще на 11%, в обеих группах. В результате сужения синусов на 7-е сутки эксперимента происходило более тесное контактирование протекающей через узел лимфы с паренхимой узла, вследствие чего создавались условия для усиления обменных процессов между лимфой и клеточными элементами узла, что усиливало процессы детоксикации. В цитоархитектонике структур лимфатических узлов печени на 7-е сутки сохранялась тенденция к снижению числа малых и средних лимфоцитов и возрастанию больших, бластных форм лимфоцитов, которые подвергались дальнейшей пролиферации и дифференциации. Происходило возрастание зрелых клеток плазмоцитарного ряда - плазмоцитов, увеличивалось количество макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток, нейтрофилов, эозинофилов, а также митозов. При сорбентной терапии наблюдались позитивные сдвиги в цитоархитектонике всех структур лимфоузлов.

К 21-м суткам наблюдения в структурной организации всех зон лимфоузлов отмечались восстановительные явления. Однако исходного уровня показатели не достигали. Так, объемная плотность капсулы оставалась на 21-е сутки выше контрольных величин на 12% и 20%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Это свидетельствует, по-видимому, о склеротических изменениях в капсуле, развившихся после отека. Таган сорбент снижал показатели объемной плотности капсулы на 9% и на 8%. Объемная плотность паракортикальной зоны на 21 сутки частично восстанавливалась, но оставалась меньше контрольных значений на 5% и 12%. Коррекция сорбентом повышала эти показатели еще на 5% и 4%. На 21-е сутки происходило снижение объемной плотности вторичных лимфоидных узелков - на 10%, в обеих группах животных. Но эти показатели оставались выше контрольных показателей: на 23% и 43%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Сорбентная терапия уменьшала указанные показатели еще на 12% и на 7%. Полученные после коррекции значения объемной плотности вторичных лимфоидных узелков у животных, получавших кадмий в дозе 1,5мг/кг, достигали контрольных величин. В то же время, у животных, получавших хлористый кадмий в дозе 3мг/кг м.т., показатели были выше контрольных значений, поэтому для их восстановления до исходного уровня требовалась более длительная коррекция. Все сказанное свидетельствует о дозозависимости восстановительных процессов при коррекции Таган-сорбентом.

Структура мозгового вещества на 21 сутки также частично восстанавливалась. Площадь мозговых синусов в этот срок, относительно данных 7-х суток, уменьшалась, что свидетельствует о повышении депонирующей функции лимфоузла, вследствие чего повышался контакт между протекающей лимфой и паренхимой лимфоузла. Это способствовало усилению обменных процессов в печеночном узле, а в целом улучшению детоксикационной функции узла и способствовало приближению типа лимфоузла печени к компактному. Но, несмотря на это, значения объемной плотности мозговых синусов на 21 сутки оставались выше контрольных показателей на 9% и 18%, соответственно дозе токсического вещества. Корково-мозговой индекс возрастал на 2% и 5%, соответственно дозе хлорида кадмия, что говорит о том, что на 21 сутки компактный тип лимфоузла печени частично восстанавливается (рисунок 21). Таган- сорбент повышал далее этот показатель еще на 7% и 6%, что полностью восстанавливал компактный тип лимфоузла печени (рисунок 22). Площадь мозговых тяжей к 21 суткам также уменьшалась, но оставалась выше контрольных данных на 13% и 16%, соответственно дозе химиката в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. После коррекции, показатели мозговых тяжей, снижались еще на 10% и 6%. Эти показатели соответствовали контрольным величинам, особенно у животных, получавших химикат в дозе 1,5мг/кг м.т.

Известно, что лимфоузел представляет собой орган для перераспределения жидкости и форменных элементов между кровью и лимфой в зависимости от конкретных гемо- и лимфодинамических ситуаций. [Бородин Ю.И., 2005; Гашев А.А. и Zawiejia D.C., 2005]. Правильное протекание процессов фильтрации и резорбции в лимфоузле находится в прямой зависимости от структурно-функционального состояния эндотелиоцитов его обменных кровеносных капилляров [Zawieja D.C., Kossman E. and Pullin J., 1999; Петренко В.М., 2006].

Исходя из сказанного, можно заключить, что в регионарных лимфатических узлах нарушения развиваются синхронно с изменениями в печени и печеночных клетках. Это говорит о том, что печеночные лимфатические узлы являются важными гомеостатирующими органами для внутренней среды организма и вместе с печенью составляют единую иммуно-химическую функциональную систему гомеостаза, согласно которой в лимфатическом регионе печени система детоксикации печени и система иммунитета функционально сопряжены. Все нарушения имеют дозозависимый характер и больше выражены у животных, получавших двойную дозу хлорида кадмия в 3мг/кг м.т. Таган-сорбент оказывает протективное воздействие на все структуры лимфатического региона печени, в результате чего нарушения в значительной степени сглаживаются. Процессы восстановления проходят более интенсивно у животных, получавших меньшую дозу хлорида кадмия в 1,5мг/кг м.т., что свидетельствует о дозозависимости коррекции указанным сорбентом.