Тема. Определение групп крови системы аво. Определение резус-принадлежности

Существуют два групповых агглютиногена – А и В и два агглютинина – ά и β. Разные сочетания данных антигенов и антител образуют четыре группы крови: О_άβ (I), А_β (II), В_ά (III), АВ_о (IV).

Для установления группы крови используют стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов или цоликлоны.

Использование стандартных сывороток. Для работы необходимы: стандартные сыворотки крови групп О (I), А (II) и В (III), двух различных серий для каждой группы; изотонический раствор натрия хлорида; белая пластина со смачиваемой поверхностью; пипетки; стеклянные палочки.

Ход работы. На левой стороне пластины напишите «О», в середине – «А», справа «В», на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяете группу крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластину нанесите по одной капле стандартной сыворотки групп О,А,В. Стандартные сыворотки берут двух различных серий для каждой группы, поэтому всего получится шесть капель, которые образуют два ряда. Рядом с каждой каплей сыворотки нанесите по капле крови. Затем перемешайте сухой стеклянной палочкой сыворотку и кровь. Причем для каждой пары (капля сыворотки и капля крови) необходимо использовать свою палочку. После перемешивания пластину необходимо покачать и оставить на 1-2 минуты в покое. В течение 3-5 минут наблюдайте за ходом реакции изогемагглютинации. После полного наступления агглютинации добавьте к смеси эритроцитов с сывороткой по капле изотонического раствора и перемешайте. Реакция изогемагглютинации может быть положительной или отрицательной. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы, но разных серий должны совпадать. При наличии агглютинации с сыворотками всех трех групп проведите дополнительное исследование с сывороткой группы АВ для исключения агглютинации, вызванной антиэритроцитарными аутоантителами. Результат должен быть отрицательный!

Результаты реакций с сыворотками трех групп О (I), А (II), В (III) могут давать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см.табл.1).

Цоликлоны анти-А анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Время наступления реакции агглютинации и ее выраженность у цоликлонов выше, чем у гемагглютинирущих АВО-сывороток.

При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей изотонического раствора хлорида натрия. Кровь можно отнести к группе АВ (IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе.

Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором. Выделяют три разновидности резус-антигена: D, C, E. Наибольшей активностью обладает антиген D, поэтому именно его определение имеет важное значение. Группы крови, в которых содержится антиген Rh (D), условно принято считать резус-положительными (Rh+), а группы крови, не содержащие антигена Rh(D), - резус-отрицательными (Rh-). Для определения резус-фактора в настоящее время используют стандартную сыворотку, содержащую определенный титр агглютининов или цоликлон анти-D.