Учебно-методическое пособие для выполнения лабораторно-практических работ по дисциплине: «Ветеринарная вирусология»

Департамент научно-технологической политики и образования

ФГОУ ВПО Волгоградская государственная сельскохозяйственная академия
Кафедра инфекционной патологии и судебной ветеринарной медицины

Учебно-методическое пособие

для выполнения лабораторно-практических работ

по дисциплине: «Ветеринарная вирусология».

Раздел I. Общая вирусология

Волгоград

ИПК «Нива»

2010

ББК 48.43

М54

М54 Учебно-методическое пособие для выполнения лабораторно-практических работ по дисциплине: «Ветеринарная вирусология». Раздел I. Общая вирусология / Сост. Г.М. Фирсов; Волгогр. гос. с.-х. акад. Волгоград, 2010. 104 с.

Для студентов зооветеринарного факультета, очной и заочной формы обучения по направлению «Ветеринария».

УДК 619 : 578

ББК 48.43

М54

© ИПК ФГОУ ВПО ВГСХА «Нива», 2010

«Ветеринарная вирусология» является профилирующей, формирующей у студента врачебное мышление дисциплиной. Поскольку преобладающее большинство инфекционных болезней всех видов животных имеет вирусную этиологию, и они наносят огромный экономический ущерб отечественному животноводству, изучение дисциплины имеет целью:

– Овладение теоретическими основами вирусологии;

– Приобретение знаний и навыков профилактики и диагностики вирусных болезней животных.

Задачей:

– Изучить особенности биологии вирусов и взаимодействия их с заражаемым организмом;

– Усвоить принципиальный подход к установлению предварительного диагноза;

– Научиться составлять планы лабораторных исследований при диагностике вирусных болезней;

– Овладеть современными вирусологическими методами диагностики.

В результате обучения студенты должны уметь:

– Правильно взять патологический материал;

– Правильно консервировать и транспортировать патологический материал в лабораторию;

– Обнаруживать и идентифицировать вирусы в патологическом материале;

– Поставить диагноз на вирусную болезнь;

– Овладеть навыками:

– Выполнения методов индикации вируса в патологическом материале;

– Работы с куриными эмбрионами для обнаружения и выделения вирусов;

– Изготовления культуры клеток и использования ее для диагностики;

– Проведения серологических исследований;

– Применения методов обнаружения и титрования антител в сыворотках животных;

– Выполнения методов лабораторной диагностики ящура, бешенства, оспы, лейкоза КРС и других вирусных инфекций.

Раздел I. Общая вирусология

Тема 1. Правила работы с вируссодержащими материалами. Устройство вирусологической лаборатории
Цель занятия: ознакомиться с вирусологической лабораторией кафедры, оборудованием. Изучить правила и технику безопасности при работе с вируссодержащим материалом.

Оборудование и материалы: таблицы - схемы устройства вирусологической лаборатории, настольный бокс, люминесцентный и инвертированный микроскопы, центрифуги, холодильники, магнитные мешалки, термостаты, спиртовки, стеклянная посуда (груши, пробирки, флаконы, матрасы, чашки Петри, пипетки), аппараты Такачи, основные реактивы и питательные среды, журнал регистрации студентов, получавших инструктаж по технике безопасности, документация лаборатории и основные утвержденные инструкции по правилам работы в ветеринарных учреждениях, мультимедийное оборудование, презентации MS Office Power Point по теме занятия.
Методика проведения занятия и методические указания по теме

Объяснение преподавателя: цели и задачи вирусологических лабораторий, оборудование, режим работы вирусологических лабораторий, предупреждения лабораторных заражений, методы хранения и уничтожения вирусов в лабораториях, консервирование, документация в вирусологических лабораториях, техника безопасности при работе студентов с вируссодержащим материалом, с лабораторными животными.

Инструктаж и роспись в журнале по технике безопасности

Сотрудники вирусологической лаборатории и студенты обязаны соблюдать правила работы, предупреждающие загрязнения вируссодержащего материала посторонней микрофлорой, обеспечить личную безопасность и не допустить рассеивания вирусов во внешней среде.

При работе с вируссодержащим материалом необходимо выполнять следующие требования:

• 
  не допускать рассеивания вирусов во внешней среде;
  
• 
  предотвратить контаминацию (загрязнение) вируссодержащего материала посторонней микрофлорой;
  
• 
  обеспечить личную безопасность.
  

Запрещено выходить за пределы лаборатории в халатах и спецобуви или надевать верхнюю одежду на халат, курить, принимать пищу в производственных помеще­ниях и хранить в них продукты питания. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, в некоторых случаях надевают очки и перчатки. Обязательно меня­ют обувь. Не допускаются хождение и разговоры во время работы.

Современ­ные требования к лабораторным диагностическим комплексам и отдельным со­ставляющим (полы, стены, потолки, системы отопления, вентиляции, водоснаб­жения и канализации) изложены в правилах лабораторной практики GLP.

Вирусологические отделы лабораторий и научно-исследовательских ветеринарных станций призваны осуществлять лабораторную диагностику вирусных инфекций, контролировать заболеваемость животных, вызываемую вирусами в межэпизоотический период, а также учитывать состояние и напряженность специфического постинфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета, участвовать в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными и хламидийными заболеваниями животных в обслуживаемом регионе.

Структура вирусологической лаборатории определяется задачами и особенностями ее деятельности. Размещать лабораторию желательно в двухэтажном здании или в изолированном отсеке. Бок­сы предпочтительнее располагать с северной, теневой стороны здания, чтобы избежать попадания в них прямых солнечных лучей, или следует застеклить окна боксов молочным или матовым стеклом. Полы в коридорах и комнатах для сотрудников могут быть паркетными, покрытыми лаком; в остальных – из плот­ного, влагонепроницаемого, устойчивого к дезинфектантам материала. Деревян­ные полы покрывают пластиком. Стены и потолки лаборатории должны быть также устойчивыми к дезинфектантам, легко подвергаться мойке. В боксах всю площадь целесообразно отделывать кафельной плиткой. Двери боксов должны быть раздвижными. Это позволяет сэкономить площадь и избежать колебания воздуха. В плоскости двери устраивают окошко с небольшой площадкой Целе­сообразно иметь боксы следующего назначения: для получения и культивирова­ния клеток – 1–2 бокса; для заражения культуры клеток – 1–2, для заражения куриных эмбрионов – 1–2 бокса; для заражения подопытных животных – 1 бокс; для вскрытия подопытных животных – 1 бокс; для склада стерильного стекла – 1 помещение.

Основные диагностические работы должны проводиться в настольных или стационарных ламинарных боксах (разного класса) с системой защиты операто­ра, предупреждения контаминации исследуемого материала, защиты окружаю­щей среды от вредных и опасных выбросов.

Помещения несколько больших размеров (примерно 4х4 м) выделяют для серологических исследований, уничтожения инфекционного материала, приго­товления и стерилизации лабораторной посуды и других материалов, приготов­ления питательных сред и растворов, а также для сотрудников.

Лаборатория (отдел) вирусологии долж­на быть обеспечена холодной и горячей водой, желательны подача пара и газа, наличие централизованного вакуум-провода и подачи воздуха под давлением.

Каждый бокс комплектуют соответствующей мебелью и оборудованием. При­мерная схема размещения оборудования и приборов представлена на рисунке 1. Наиболее важен стол, размер которого зависит от выполняемых на нем работ. В связи с тем, что многие работы приходится выполнять вдвоем, стол рекоменду­ется располагать параллельно стене, чтобы два работника сидели друг против друга, или ставить его к стене в виде буквы Т, что позволяет более экономно использовать площадь стола. Шкафчики для стеклянной посуды и мелкого ин­вентаря можно устроить под столом или повесить на стену. Покрытие лабора­торного стола должно быть устойчивым к действию дезинфицирующих веществ. Лабораторные стулья лучше всего металлические, так как они легко очищаются и дезинфицируются. Над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы (БУВ-30). У входа в бокс кладут резиновый губчатый коврик, пропитанный дезраствором. В предбокснике находятся стерильные халаты, колпаки, косынки, маски и тапочки, перчатки, которые надевают перед работой в боксе, и, в зави­симости от назначения бокса, соответствующее оборудование (термостат, холо­дильник, водяная баня, центрифуга и пр.).

Ограничить численность бактерий можно с помощью бактерицидных ламп БУВ-15 и БУВ-30. Значительного снижения количества бактерий в воздухе боксов и предбоксников, на поверхности столов и другого оборудования можно достигнуть обра­боткой аэрозолем перекиси водорода и некоторых других веществ. Уборку помещений проводят влажным способом: полы, стены, мебель про­тирают марлей, увлажненной дезраствором.

Для вирусологической лаборатории любого типа обязательной частью обору­дования должен быть настольный бокс, содержащий бактерицидную лампу, еще лучше – ламинарный шкаф с подачей стерильного воздуха (рис. 2, 3).

При работе в вирусологической лаборатории необходимо строго соблюдать методы и правила асептики и антисептики!

Асептика – система мероприятий и приемов работы, предупреждающих попадание микроорганизмов и вирусов из окружающей среды в организм человека, а также в исследуемый материал. Она предусматривает использование стерильных инструментов и материалов, обработку рук сотрудников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы.

Антисептика – комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов и вирусов, способных вызвать инфекционный процесс при попадании на поврежденные или интактные участки кожи и слизистых оболочек. В качестве антисептиков используют различные химические вещества: 70%-ный этиловый спирт, 5%-ный спиртовой раствор йода, 0,5–3%-ный раствор хлорамина, 0,1%-ный раствор перманганата калия, 0,5–1%-ный раствор формалина, 1-2%-ные спиртовые растворы метиленового синего или бриллиантового зеленого.

Дезинфекция – обеззараживание объектов окружающей среды путем уничтожения патогенных для человека и животных микроорганизмов и вирусов физическими способами и с помощью химических веществ: растворами хлорной извести (0,1–-10%-ным), формалина, хлорамина (0,5-5%-ным), фенола (3–5%-ным), лизола (3–5%-ным), едкой щелочи (2–3%-ным) и др. Выбор дезинфицирующего вещества и его концентрации зависит от материала, подлежащего дезинфекции.

В лабораториях для дезинфекции боксов чаще всего применяют пары формалина (30–35 мл 40%-ного раствора формальдегида на 1 м³ помещения), ß-пропиолактон (1,1 л на 100 м³ помещения) или испаряют карболовую кислоту (не реже одного раза в неделю) и ежедневно делают влажную уборку с применением растворов хлорамина, гидроксида натрия и др.

Физические методы стерилизации:

а) прокаливание в пламени спиртовки или горелки. Данный способ применяют для стерилизации препаровальных игл, петель из аппарата Такачи, пинцетов, горловин культуральных сосудов и т. д.;

б) стерилизация кипячением. Этим методом стерилизуют шприцы, мелкий хирургический инструмент, предметные и покровные стекла и другие предметы. Кипятят не менее 30 мин. Однако данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как некоторые вирусы, например вирус гепатита, и споры бактерий могут остаться при этом жизнеспособными;

в) стерилизация сухим жаром в сушильном шкафу. Метод основан на действии нагретого до 165–180°С воздуха. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду;

г) стерилизация в автоклаве паром под давлением. Это один из наиболее эффективных методов стерилизации, поэтому он широко применяется;

д) стерилизация в аппарате Коха или автоклаве текучим паром (давление 100–150 кПа (1–1,5 ат), экспозиция 30 мин). Применяют для стерилизации материалов, не выдерживающих воздействия высокой температуры, например питательных сред с витаминами и углеводами;

е) стерилизация ультрафиолетовыми лучами. Метод основан на бактерицидном действии УФ-лучей с длиной волны 260– 300 мкм. Для стерилизации воздуха в боксах используют лампы БУВ-15, БУВ-30. Обычно облучение проводят 1–2 ч;

ж) фильтрование жидкостей через бактериальные фильтры. Этим методом пользуются для освобождения питательных сред, сыворотки крови, витаминов и т. д. от бактерий, но не от вирусов.

Химические методы стерилизации.

При этом методе используют различные химические вещества.
1.3 Хранение вирусов и других материалов, учет и этикетировка их в лаборатории.

В настоящее время чрезвычайно актуален вопрос биологической безопаснос­ти работы диагностической лаборатории, который в соответствии с Федераль­ным законом «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения», санитарно-эпидемиологическими правилами «Безопасность работы с мик­роорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» СП 1.3.1285-03 и «Безо­пасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминта­ми» СП 1.2.731-99, Международным ветеринарным кодексом (2002г.), Ветери­нарным законодательством РФ (М.,2000г.) с учётом требований санитарно-эпидемиологических правил СП 1.2.1318-03 «Порядок выдачи санитарно-эпиде­миологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологичес­кого происхождения и гельминтами», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности» рег­ламентируется специальной инструкцией, введенной в действие в 2004 г.

Для всех вирусологических лабораторий установлен единый порядок обраще­ния с вирусами, предусматривающий правила их хранения, регистрации, передачи внутри лаборатории и за ее пределы. Работники лаборатории должны руковод­ствоваться действующей инструкцией о порядке хранения, обращения, отпуска, а также вывоза и ввоза в Российскую Федерацию из зарубежных стран культур микроорганизмов, токсинов и ядов животного и растительного происхождения.

В каждой лаборатории приказом директора определяют лицо, ответственное за учет культур, выделяемых в лаборатории или поступающих извне (для произ­водственных целей), а также за соблюдение порядка их хранения и уничтоже­ния. Штаммы вирусов регистрируют в специальном журнале, где отмечают их расходование, автоклавирование и пр. Отдельные вируссодержащие материалы в пробирках, флаконах и других сосудах непременно снабжают этикетками с указанием наименования вируса, штамма, даты получения, номера пассажа, объе­ма и других сведений. Данные этикеток должны полностью соответствовать за­писям в журналах штаммов лаборатории. Этикетки должны быть из плотной пергаментной бумаги, которая прикрепляется эластичной тонкой резинкой или с помощью хорошего клея. Удобными являются этикетки из лейкопластыря с основой из материала. Может быть использована также прозрачная клейкая лента, с помощью которой прикрепляют этикетки к стеклу (этикетки в этом случае оформляют на небольшом кусочке бумаги). Заполняют их не расплывающейся в воде и других растворителях пастой. В большинстве случаев целесообразно дуб­лировать надписи на этикетках графитным стержнем – практически неудаляемая надпись, кроме случаев механического стирания ее.

Штаммы вирусов хранят в холодильнике под замком с пломбой или печатью. Выделенные изоляты, как и штаммы стандартных вирусов, необходимые для сравнения и серологических исследований, следует хранить в условиях, обеспечивающих им максимально длительную жизнеспособность. При рН сре­ды 7,0 – 7,4 и внесении в нее определенных добавок вирус можно хранить при 4°С в течение нескольких недель, а некоторые виды – в течение года без потери инфекционных свойств.
1.4 Основные методы консервации вирусов

Применяют следующие методы консервация вирусов:

1) при хранении плотного вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный раствор на физиологическом растворе), который обладает бактериостатическим действием и в то же время защищает вирусы. В этом случае вирус можно хранить при 4°С несколько месяцев;

2) чаще всего вирусы хранят в холодильниках, обеспечивающих температуру минус 20, минус 30, минус 70 °С. При этой температуре некоторые вирусы без добавки защитных веществ сравнительно быстро теряют инфекционность. Известно, что чем меньше белка в вируссодержащей взвеси, тем меньше стабильность вирусов, поэтому очищенные вирусы быстро теряют свою биологическую активность. Хорошее защитное действие при замораживании и хранении вирусов оказывает добавка одного из следующих компонентов: инактивированной сыворотки крови, обезжиренного молока (от 10 до 30 %), желатина (0,5–1,5 %), ДМСО (10 %) и др. При быстром замораживании вируса до минус 196 °С (жидкий азот) с последующим хранением при этой температуре титр вируса в течение нескольких месяцев не снижается. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замораживать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов (NaH₂PO₄ или КН₂РО₄), которые обладают кислой реакцией и имеют более низкую точку замерзания, чем двузамещенные фосфаты (Na₉HPO₄ или К₂НРО₄) с щелочной реакцией.

Скорость оттаивания вируса существенно не влияет на его активность. Размораживать вирусы можно как при комнатной температуре, так и в водяной бане при температуре 37 °С. Во избежание частого замораживания и оттаивания одного и того же вируссодержащего материала необходимо хранить его маленькими порциями, достаточными для одноразового титрования или использования, например для реакции нейтрализации;

3) лиофилизация, т. е. высушивание в замороженном состоянии в условиях вакуума, – очень хороший способ консервирования вирусов. Для лиофилизации необходимы соответствующая аппаратура, определенный (в зависимости от вида вируса) наполнитель и тщательное выполнение процедуры сушки. На стойкость лиофилизированного вируса влияет не только выбор соответствующего наполнителя, но и состав газа в ампуле (уже 0,5 % кислорода вызывают быструю гибель вируса, в то время как влажность в границах 2–3 % существенно не влияет) и температура хранения лиофилизата – не выше 4 °С. Лиофилизацию лучше проводить в учреждениях, хорошо знакомых с этой методикой. В лиофилизированном виде вирусы могут храниться несколько лет.

– журнал вирусологических исследований (экспертиз, сельхозучета, формы № 13-вет);

– журнал учета зараженных животных;

– журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения;

– журнал учета движения производственных или музейных штаммов и другие книги учета согласно утвержденной инструкции.
Задания:

1. Ознакомиться с вирусологической лабораторией и ее основным оборудованием.

2. Изучить правила работы с вируссодержащим материалом.

Самостоятельная работа студентов:

а) подготовка бокса для работы;

б) отработка навыков работы с пипеткой и стерильными инструментами;

в) изучение документации лаборатории.

1. Какова роль вирусов в инфекционной патологии животных?

2. Что вы знаете о технике безопасности и правилах работы в вирусологической лаборатории?

3. Какие методы консервации вирусов вы знаете?

4. Какие способы уничтожения вирусов существуют в лабораторной практике?
Тема 2. Получение, транспортировка и подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
Цель занятия: ознакомить студентов с правилами взятия и транспортировки патологического материала для лабораторных исследований. Приготовить вируссодержащую суспензию из органов павших или вынужденно убитых животных. Подготовить смывы, полученные от больных животных, для вирусологического исследования.

Оборудование и материалы: стерилизаторы со стерильными ножницами и пинцетами; спиртовки; стерильные ватные тампоны; вата; спирт-ректификат; пенициллиновые флаконы с 3–4 мл раствора Хенкса; термос с охлаждающей смесью; лейкопластырь; графитные карандаши; кювета; пенициллиновые флаконы с кусочками паренхиматозных органов; стерильные ступки с пестиками; стерильный песок; пипетки на 5 и 10 мл, стерильные центрифужные пробирки; антибиотики (пенициллин и стрептомицин); МПА; МПБ; раствор Хенкса или Эрла, центрифуга, мультимедийное оборудование, презентации MS Office Power Point по теме занятия.
Методика проведения занятия и методические указания по теме

Объяснение преподавателя: правила и методы получения, упаковки, порядок транспортировки и хранения вируссодержащего материала, подготовка его к исследованию.

Демонстрация: а) набора посуды и инструментов, необходимых для взятия материала от больных животных и трупов;

б) приемов взятия смывов со слизистой оболочки носа, конъюнктивы, прямой кишки у коров, телят или других животных;

в) этикетирования и транспортировки взятого материала.
2.1 Получение и обработка патологического материала

В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза прежде всего зависит от правильности взятия патологического материала, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вируссодержащего материала, которые имеют свои особенности.

Материал для исследований от заболевших, павших или вынужденно убитых животных следует брать как можно быстрее после появления четких признаков болезни или не позднее 2–3 ч после клинической смерти или убоя. Это связано с тем, что сразу после заболевания или в первые 1–2 дня значительно ослабевает барьерная роль кишечника, что наряду с повышенной проницаемостью кровеносных сосудов способствует диссеминации кишечной флоры. Кроме того, по мере продолжения и даже углубления инфекционного процесса количество вируса может уменьшаться в результате воздействия защитных механизмов организма.

При взятии материала для выделения вируса следует исходить из патогенеза изучаемой инфекции (входные ворота, пути распространения вируса в организме, места его размножения и пути выделения). Так, при респираторных инфекциях для выделения вирусов берут носоглоточные смывы, мазки из носа и глотки, соскобы трахеи и кусочки легкого трупов; при энтеровирусных – кал; при нейротропных – кусочки головного или спинного мозга; при дермотропных инфекциях – свежие поражения кожи и т. п., т. е. отбирают тот материал, в котором предполагается наибольшая концентрация вируса. Материалом для выделения вируса могут служить различные экскреты и секреты, кусочки органов, кровь, лимфа и пр.

Вирусы из трупа животного выделяют из ткани или органов, в которых предположительно происходит наи­большее их накопление. Материал для исследования берут по возможности скорее (во избежание аутолиза). Иногда целесообразно провести диагностический убой больного живот­ного на стадии максимального проявления клинической картины болезни. При этом необходимо составить подробный протокол вскрытия и получить пробы.

Спинной мозг мелких животных получают также методом выдавливания. Позвоночник вместе с ребрами и мышцами пересекают в шейной части, затем двумя пинцетами, начиная с хвостовой части, попеременно пережимают позво­ночник, постепенно передвигаясь к головному концу. Спинной мозг выдавливают из пересеченного шейного конца позвоночника.

Головной и спинной мозг не рекомендуется промывать растворами. При из­влечении их необходимо также соблюдать все предосторожности (работа в за­щитной спецодежде, в резиновых перчатках, защитной маске и очках, быть пре­дельно аккуратным).

Периферические нервы редко используют для выделения вируса. Метод по­лучения нерва обусловливается анатомическим его расположением. Для иссле­дования необходимо брать небольшой отрезок нерва.

Пробу для гистологического исследования также необходимо проводить как можно скорее после гибели животного, до аутолиза и деструкции клеток. Если нет возможности доставить материал в лабораторию в течение нескольких часов, его помещают в консервирующий раствор. С. С Кальтер уточняет условия, обеспечивающие оптимальное сохранение проб.

1) соотношение жидкости и ткани 20:1,

2) толщина пробы не более 0,5 см (длина и ширина не играют особой роли);

3) использование для пересылки проб сосудов с широким горлом.

Ни в коем случае нельзя замораживать ткани или использовать буру при консервации проб, предназначенных для гистопатологического исследования!

Хороший фиксирующий раствор получают при смешивании 50 мл формалина (40 % раствора формальдегида в воде) с 450 мл воды и 3,8 г поваренной соли. При отсутствии измерительных приборов и весов такой раствор можно приготовить, взяв 3 столовые ложки формалина, 0,5 л воды и чайную ложечку поваренной соли.

В качестве материала для гистологических исследований берут кусочки (размером в несколько кубических сантиметров) тех органов, которые имеют видимые отклонения от нормы (по форме, размеру, цвету, консистенции, наличию необычных образований); могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни и предположительной избирательной локализации.

2.4 Транспортировка и хранение проб.

Пробы рекомендуется как можно быстрее поместить в условия, обеспечивающие замедление процессов инактивации вируса. Такие условия обеспечивают низкие температуры. Для этого пробирки (флакончики) с патматериалом, закрытые резиновыми пробками, надо поместить в термос с охлаждающей смесью (рис. 4, 5). В качестве охлаждающей смеси можно взять смесь равных частей сухого льда (твердой углекислоты) и этилового спирта (температура минус 71 °С держится несколько дней). Можно использовать смесь, состоящую из трех массовых частей льда или снега и одной массовой части поваренной соли. В последнем случае удается получить температуру минус 15 – минус 20 °С. Вместо замораживания можно использовать для консервирования химические средства (менее эффективно). Лучшим из последних считается смесь равных объемов стерильных глицерина и 0,85%-ного раствора поваренной соли (изотонический раствор), в которую и помещается патматериал. Обычно эту смесь используют для консервирования кусочков паренхиматозных органов и тканей. Растворы глицерина менее пригодны для вируссодержащих жидкостей, особенно в тех случаях, когда этот материал нужно вводить животным, эмбрионам и в культуру клеток в неразведенном виде. Употребление глицерина делает невозможным исследование патологического материала методом иммунофлюоресценции. Поэтому одновременно с пробой патматериала необходимо направлять мазки-отпечатки, приготовленные и фиксированные на предметном стекле, для исследования в люминесцентном микроскопе.

В некоторых случаях возникает необходимость пересылки проб внутри обла­сти или страны, обмена пробами между диагностическими, научно-производ­ственными или научно-исследовательскими лабораториями. В этом случае ла­боратория, отправляющая материал, должна приготовить вируссодержащие пробы с максимальным титром. Это требование должно выдерживаться в случаях, если проводится идентификация вируса, если исходная лаборатория выделила вирус, но не в состоянии его идентифицировать, а другая лаборатория используется в качестве справочной для проведения полной идентификации. Вирус иногда удобно бывает послать в форме инфицированных культур кле­ток, которые не требуют сильного охлаждения. Культуры клеток должны быть предохранены от резких колебаний температур изолирующими материалами. Чтобы предупредить повреждение клеток от вспенивания, пробирка или пузы­рек должны быть полностью заполнены средой. Особое внимание необходимо обратить на то, чтобы пробки были нетоксичными, тщательно пригнанными и исключали утечку. Упаковка для радиоактивно­го меченого вируса или проти­вовирусных антител должна от­вечать требованиям, предъяв­ляемым к перевозке радиоактив­ных материалов, при этом адек­ватный поглощающий материал должен действовать в качестве изолирующего средства, обеспе­чивающего медленное охлажде­ние пробы снаружи.

Сопроводительная к пересылаемому материалу должна иметь четкую марки­ровку (рис. 6). Указывают: фамилию и адрес грузоотправителя, фамилию и адрес грузополучателя. Эти два пункта должны быть четко разграничены; тамо­женную декларацию снабжают: предупреждающей этикеткой или этикеткой, рекомендованной ВОЗ для использования при меж­дународных перевозках; при пересылке меченых материалов – соответствую­щей этикеткой, предупреждающей о радиоактивной опасности. Могут потребо­ваться и другие этикетки типа «Срочно, не задерживать» или «Хранить в про­хладном месте». Внутрь упаковки должны быть вложены дополнительная эти­кетка с описанием деталей материала, сопроводительный лист или перечень со­держимого этой упаковки.

1) получение смывов слизистых оболочек дыхательных путей телят, овец или других животных;

2) получение фецес;

3) консервация полученных материалов;

4) этикетирование;

5) приготовление из вируссодержащей ткани суспензии вируса;

6) подготовка смывов, полученных от животных, для вирусологического исследования.

Подведение итогов занятия

Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы:

1. Каковы общие правила взятия материала от больных животных и трупов?

2. Как консервируют и транспортируют патологический материал?

3. Что вы знаете о подготовке патологического материала к исследованию?