Клетка биологиясы docx
Имуннофлоуресценция əдісі
жүктеу/скачать 329.02 Kb. Pdf көрінісі
|
| Имуннофлоуресценция əдісі
Имуннофлоуресценция əдісі өте жоғары сезімталдығымен ерекшеленеді. Бұл əдісті тек белоктарды анықтауда ғана емес, сонымен қатар ДНК-дағы нуклеотидтер кезектесуімен гибридті молекулалар РНК-ДНК таралмауын анықтайды. Ол үшін белокқа (мысалы: тубулин) антиденеден тұратын арнаулы сарысу (ірікті) алады. Тазаланған антиденелер химиялық түрде флюрохромдармен əрекеттеседі. Мұндай препараттарды обьектіге салып, люминесцентті микроскоп көмегімен флюрохром ағысымен жасушадағы белоктын таралу аймағын табады. Алайда, флюрохроммен антиденелер жасушаға ену үшін, плазматикалық мембрананы енетін етіп жасау керек. Бұл клетка фиксациясымен жəне мембрананың ішіндегі липидтердің біртіндеп экстракциясымен жасалынады. Биополимерлер синтезінің жойылмау орнын анықтау үшін жəне клеткадағы заттар тасымалдау жолдарын, клетка миграция (коныс аудару) анықтау үшін изотоппен белгіленген заттар тіркейтін - радиоавтография əдісі кенінен қолданылады. Бұл əдіс Беккерель əдісін қайталайды. Радиоактивті изотоптармен танбаланған молекулаларды, мысалы, фосфордын (Р32) көміртегінің (С4), сутегінін-тритийдін (Н3) изотоптарын тағамға қосып, иньекция арқылы организмге енгізеді. Биополимерлер синтезі процесінде бастаушы танбаланған молекуласы қосылады, клеткада фотоэмулсиянын көмегімен орнын тіркей алады. Таңбаланған клетка неғурлым фотоэмульсиямен көп уакыт байланысса, соғұрлым AgBr түйірі сəулеленеді. Экспозициядан кейін препараттарды айкындау керек, сол Аg-ң кайта жасалынады, препараттың фиксация кезінде жаркырамаған AgBr түйірлері еріп кетеді. Нэтижесінде объектті қоршап тұрған түйіршіктердің тек В-саулеленумен əсер еткені ғана калады. Бұл əдістін дəлдігі - AgBr түйірінің мөлшері мен бөлшектің энергиясына байланысты. Түйіршек үлкейген сайын, изотоп орнын анықтау азаяды. Бөлшек энергиясы артқан сайын, AgBr түйірінің белсенділігі артады. Негізінен сутек-тритий (Н) пайдаланалады. Тритиймен макромолекулалар - нуклеотидтер, амин қышқылдары, майлы қышқылдар, қант т.б. танбаланады. Радиоавтографиялық зерттеулерде белгіленген гормондар, антибиотиктер, ингибиторлар т.б. пайдаланылады. Клетка өңдеуде сулы еріткіштерде жоғалып кететіндіктен, бұл əдісте суда еритін қосылыстар анықталмайды. жүктеу/скачать 329.02 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|