Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг возбудителя чумы из природных очагов разного типа 03. 00. 07 микробиология
жүктеу/скачать 1.84 Mb.
|
|
Резистентных к антибактериальным препаратам штаммов чумного микроба, как среди коллекционных (музейных), так и среди свежевыделенных, обнаружено не было. Большинство изученных музейных штаммов чумного микроба чувствительны к стрептомицину (92%), гентамицину (94%), левомицетину (79%), тетрациклину (76%) и ципрофлоксацину (97%) (рисунок 1). 
Рисунок 1 – Чувствительность к антибиотикам музейных штаммов Y. pestis Свежевыделенные штаммы чумного микроба из разных очагов чумы были чувствительными к пефлоксацину, гентамицину, ципрофлоксацину, левомицетину (хлорамфениколу), стрептомицину (рисунок 2). По отношению к канамицину в 17,7 % случаев были выявлены штаммы с умеренной чувствительностью. Умеренно чувствительные штаммы встречались при изучении чувствительности к амикацину (13,3%); азитромицину (15,5%); рифампицину (28,8%), бензилпенициллину (26,6%) (рисунок 2). 
Рисунок 2 – Чувствительность к антибиотикам свежевыделенных штаммов Y. pestis
Наибольшее количество бактериофагов было выделено из штаммов Северо-Приаральского автономного очага чумы 17, Бетпакдалинском 4 и Мойынкумском 3 автономных очагах чумы. По 2 штамма бактериофагов выявлено в Гиссарском и Таласском очагах. По одному штамму бактериофагов обнаружено в Приаральско-Каракумском, Таукумском, Урало-Эмбенском, Устюртском, Зааральском, Прибалхашском, Сарыджазском автономных очагах. 1 бактериофаг также обнаружен в Каракумском очаге (Туркмения) (рисунок 3). Штаммы чумного микроба, из которых были выделены фаги, обладали типичными для возбудителя чумы свойствами. Отмечены отличия по внешним признакам поражения бактериофагом. У 13,5+0,5% штаммов колонии были светлее обычного, далее к 5 суткам – почти прозрачные с характерной исчерченностью – «тающие» колонии. У 27,0+2,5% штаммов по всему газону роста были выявлены мелкие стерильные пятна диаметром 1,0 мм. У 59,5+15,5% штаммов через 24 часа инкубации при 28оС образовывались стерильные пятна, правильной округлой формы диаметром 2-2,5 мм. Через 2 суток пятна увеличивались до 3 - 9 мм (22 штамма).
Рисунок 3 – Процент бактериофагов, выделенных в разных очагах чумы В группе бактериофагов, выделенных из музейных штаммов чумного микроба, преобладают штаммы, изолированные от грызунов (72,2+20,5%). При работе со свежевыделенными штаммами характерной особенностью явилось то, что большая часть бактериофагов, была получена из штаммов, изолированных от эктопаразитов (54,1+12,9%) (рисунок 4).   А – музейные штаммы Б – свежевыделенные штаммы Рисунок 4 – Процент выделенных бактериофагов из штаммов Y. pestis, изолированных от грызунов и эктопаразитов Наибольшее количество бактериофагов (20) было выделено из штаммов Y. pestis в период 1999-2005 гг.. с пиком их выделения в 2001 году – 18 (рисунок 5, причем 17 из них – в Северо-Приаральском автономном очаге чумы. 
Рисунок 5 – Количество бактериофагов, выделенных в разные годы Изолированные штаммы бактериофагов, отличались друг от друга по морфологическим свойствам, степени литической активности и специфичности. Изучение штаммов бактериофагов в ПЦР показало их гомологичность, за исключением 2 штаммов бактериофагов из Прибалхашского и Мойынкумского автономных очагов. Собранная коллекция бактериофагов в перспективе может быть использована при поиске более чувствительного и специфичного диагностического фага для серийного производства. Использование ПЦР и мультилокусной ПЦР с высокой специфичностью позволяет идентифицировать атипичные штаммы возбудителя чумы и повышает информативность лабораторных исследований. Штаммы чумного микроба из различных природных очагов исследовали в ПЦР с целью детекции видоспецифичного гена caf1, локализованного на плазмиде pFra и детерминирующего продукцию антигена F1(рисунок 6).  1 – маркеры молекулярных масс; 2 – штамм Y. pestis А1122 (caf1+); 3 – штамм Y. psedotuberculosis (caf1–); 4-13 и 15 – штаммы Y. pestis № 2032, 1846, 396, 1690, 1894, 84, 88, 1204, 277, 316, 1710 (caf1+); 14 – штамм Y. pestis 1481(caf1–); 16 – отрицательный контроль. Рисунок 6 – Электрофореграмма амплификации фрагмента гена caf1 возбудителя чумы Полученные результаты были сопоставлены с фактом выявления F1-антигена всеми другими методами. Штаммы 1481 (Сарыджазский автономный очаг), 23, 1903 и 2010 (Прибалхашский автономный очаг), не содержащих в геноме ген caf1, не имели плазмиды pFra и не проявляли соответствующих фенотипических свойств, т. е. были F1– отрицательны при исследовании в РНГА, Western blot и МФА, за исключением штамма №1481, который реагировал с ИДЧЛ и давал флюоресценцию, вероятно за счет антигенов кодируемых плазмидами pPst, pCad (таблица 5).
жүктеу/скачать 1.84 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
