Микробиология, вирусология и иммунология
жүктеу/скачать 1.61 Mb. Pdf көрінісі
|
| Иммуноферментный анализ. Иммуноферментные методы в силу своей
безопасности и высокой чувствительности являются достаточно широко применяемыми. Кроме того, реагенты, к которым присоединен фермент, обычно весьма стабильны и допускают длительное хранение (рис. 11). 45 а Антиген Антитело кроличьей Светящийся комплекс сыворотки, меченное антиген — антитело флюорохромом б Антиген Антитело кроличьей Антитело против Светящийся комплекс иммунной сыворотки кроличьего глобулина антиген — антитело, (глобулин) (антиглобулин) меченное флюорохромом Рис. 10. Метод иммунофлюоресценции (по Кунсу): а — прямой; б — непрямой Чаще используют пероксидазу и фосфатазу, которые при добавлении к ре- агирующим компонентам соответствующего субстрата образуют окрашенные продукты. В случае определения антител антигены иммобилизуют на поверх- ности лунок пластиковых панелей, к ним добавляют исследуемую сыворотку. Связывание антител с антигеном дает образование иммунного комплекса. В следующую фазу реакции на образовавшийся иммунный комплекс наносятся меченые ферментом вторые антитела (анти-антитела). Далее, после промывки, добавляют раствор субстрата, который, вступая в реакцию с ферментом, дает окрашивание. Интенсивность окрашивания будет зависеть от количества фер- ментной метки (чем больше свяжется меченых антител, тем ярче окрашивание). Результаты учитывают фотометрически или визуально. В данной реакции можно использовать как меченые антитела для идентификации антигенов, так и меченые антигены для определения антител в сыворотке крови. А б 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 1 Рис. 11. Использование иммуноферментного метода для обнаружения антигенов (а) и антител (б). 1 — поверхность твердой фазы; 2 — специфические антитела; 3 — антиген (исследуемый материал); 4—5 — специфические к данному антигену антитела, меченные ферментом; 6 — субстрат для фермента; 7 — специфический антиген; 8 — исследуемая сыворотка (антитела); 9—10 — антивидовая сыворотка, содержащая антитела к человеческому иммуноглобулину и меченная ферментом 46 В настоящее время выпускается большое количество разнообразных иммуноферментных диагностических наборов как для определения антител в сыворотке или других биологических жидкостях, так и для определения антигенов. В качестве последних могут выступать возбудители различных заболеваний (микробы, вирусы), а также различные белки, определение содержания которых в крови или секретах представляет диагностический интерес (аутоантитела, факторы неспецифической защиты, гормоны, цито- кины, белки и др.). Данный метод широко используется для диагностики аллергических заболеваний (определения концентрации IgЕ). жүктеу/скачать 1.61 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|