ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КАНДИДОЗА У ЖЕНЩИН ПРИ ПРЕДГРАВИДАРНОЙ ПОДГОТОВКЕ

Материалы и методы. Проведено клиническое (гинекологическое) и микробиологическое обследование 285 женщин на этапе предгравидарной подготовки. Первую группу составили пациентки, у которых кроме кандидоза обнаружены возбудители инфекций, передающихся половым путем. Вторую группу составили пациентки с кандидозной моноинфекцией.

Результаты исследования. У пациенток первой группы аднексит встречался в 82% случаев (в второй – в 78%), цервицит – в 59% (в второй – в 50%), кольпит – в 40% (в второй – в 22%), эндометрит – в 73% (в второй – в 72%). Невынашивание беременности наблюдалось только у пациенток первой группы (9% случаев). Частота бесплодия была одинаковой в обеих группах.

При обследовании женщин грибки рода Candida были обнаружены в 14% случаев. Представители рода Candida в 90% случаев были представлены C. albicans, в 2,5% - C. tropicalis, в 7,5% - C. kefyr. В монокультуре грибки обнаружены у 5 обследованных (12,5%). Наибольшей обсемененность генитального тракта была у пациенток первой группы, у них Candida в количестве 10⁵ КОЕ/мл и более обнаружены в 85% случаев, а у пациенток второй группы – в 78% случаев.

Исследования других возбудителей инфекций, передающихся половым путем, показали, что у пациенток первой группы были обнаружены хламидии в 31% случаев, микоплазмы в 45,5%, уреаплазмы в 54,5%, вирус папилломы человека в 18%, гарднереллы в 9%, цитомегаловирус в 4,5% и вирус простого герпеса в 4,5%.

При анализе состава кандида-бактериальных ассоциаций: в 37% случаев обнаружена E. coli, в 20% - St. aureus, в 11% - условно-патогенные энтеробактерии (кроме E. coli), в 14% - коагулазаотрицательные стафилококки, в 43% - коагулазапозитивные стафилококки, в 6% - нейссерии (кроме N. gonorrhoeae).

Наряду с определением микробного пейзажа интерес представляет определение чувствительности к антимикробным препаратам. Установлено, что штаммы Candida были устойчивы к кетоконазолу в 55% случаев, к итраконазолу – в 50%, к амфотерицину В – в 35%, к флуконазолу – в 35%, к котримазолу – в 27,5% и к нистатину – в 20% случаев. К 1-3 препаратам було устойчиво 52,5% штаммов Candida, а к 4-6 – 20%. Штаммы, чувствительные ко всем 6 препаратам, выявлены в 27,5% случаев.

Обсуждение. Проведенные исследования показали, что у женщин на этапе предгравидарной подготовки в значительном количестве случаев выявлены грибы рода Candida, которые могут значительно снижать частоту имплантации плодного яйца [5]. При отягощенном гинекологическом анамнезе с инфекциями, передающимися половым путем, Candida выявляются чаще и в значительном количестве. В микробном пейзаже при урогенитальном кандидозе наблюдается большая доля участия E. coli и St. aureus. Подобный факт является крайне неблагоприятным, т.к. показано, что некоторые бактерии продуцируют канцерогены, а продукты бактерий семейства Enterobacteriaceae могут рассматриваться как инициаторы канцерогенеза в эндометрии [3]. Отмечен рост устойчивости Candida к флюконазолу. По данным Czaika et al. [2], лечение флуконазолом в дозах менее 800 мг/сут не превышает барьера адаптации для С. glabrata, а при стандартных дозах препарата устойчивость нарастает в ходе лечения.

Заключение. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о необходимости регулярного и тщательного микробиологического обследования женщин при предгравидарной подготовке.
Литература

1. Arsic-Arsenijevic V., Radonjic I., Mijac V., Cirkovic I. Importance of microbiologic examination of vaginal secretions in the reproductive period // Srp. Arh. Celok. Lek. – 2004. – Vol. 132, №1-2. – P. 44-49.

2. Czaika V., Tietz H.J., Schmalreck A. et al. Antifungal susceptibility testing in chronically recurrent vaginal candidosis as basis for effective therapy // Mycoses. – 2000. – Vol. 43, Suppl. 2. – P. 45-50.

3. Mikamo H., Izumi K., Ito K. et al. Endometrial bacterial flora detected in patients with uterine endometrial cancer // Kansenshogaku Zasshi. – 1993. – Vol. 67, №8. – P. 712-717.

4. Vermitsky J.P., Self M.J., Chadwick S.G. et al. Survey of vaginal flora Candida species isolates from women of different age groups by use of species-specific PCR detection // J. Clin. Microbiol. – 2008. – Vol. 46, №4. – P. 1501-1503.

5. Wittemer C., Bettahar-Lebugle K., Ohl J. et al. Abnormal bacterial colonisation of the vagina and implantation during assisted reproduction // Gynecol. Obstet. Fertil. – 2004. – Vol. 32, №2. – P. 135-139.

В связи с неудовлетворительным санитарно-техническим состоянием канализационных сетей, недостаточным количеством автотранспорта для вывоза жидких бытовых отходов большинство территорий населённых пунктов Якутии продолжают обширно загрязняться хозяйственно-бытовыми сточными водами, что в значительной степени обусловливает циркуляцию в окружающей среде энтеробактерий и кишечных вирусов.

Например, в условиях многофакторного антропогенного загрязнения окружающей среды на территории северного мегаполиса диагностирован факт обсеменённости снежного покрова потенциально-патогенными микроорганизмами, в том числе энтеробактериями. Доминирующими видами в испытуемых образцах снежного покрова селитебной зоны г. Якутска и пригорода явились энтеробактерии рода Klebsiella (40,6%) [2].

Анализ циркуляции выделенных микроорганизмов в городской экосистеме подтвердил тесную взаимосвязь макро и микроорганизмов. Из числа положительных находок на представителей рода Klebsiella при исследованиях пищевых продуктов пришлось 48,0 %; воды - 35 ,1 %; смывов с объектов окружающей среды - 48,2%. При расшифровке гастроэнтероколитов этот показатель составил 40%. На развитие дисбактериозов Klebsiella повлияла в 13% случаев. Клебсиеллёз органов дыхания составил 5 % от всей выделенной микрофлоры.

Проанализирована лекарственная устойчивость клебсиелл к антибиотическим препаратам у 49 больных. У всех пациентов выделенные штаммы бактерий имели резистентность одновременно к двум, трём, четырём и более антибактериальным препаратам. При анализе структуры лекарственно устойчивых клебсиелл по отдельным препаратам отмечена 100% устойчивость к тетрациклину, фуразолидону, клиндамицину, полимиксину, фурадонину, амикацину, карбециллину, что служит показателем эволюционной изменчивости энтеробактерий под влиянием факторов окружающей среды [3].

К сожалению, существующая система микробиологического мониторинга природной среды слабо увязана с наблюдением за циркуляцией микроорганизмов и заболеваемостью населения [4]. Изученность же данной проблемы в Якутии остаётся такой, что большей частью не даёт оснований указывать на наличие прямой причинной связи состояния здоровья населения с нарушением экологического равновесия.

Однако было бы ошибкой не оценивать роль микробной контаминации наземных экосистем поскольку, в совокупности, они являются возможным звеном в эпидемиологической цепочке инфекционных заболеваний.

Немаловажным фактором, способствующим распространению инфекций, бактериальной природы могут служить различные земляные работы и строительство, объём которых за последние годы в Якутске стремительно растёт, в связи с переселением жителей отдалённых улусов и мигрирующего населения ближе к столице республики. Осваиваются и застраиваются свободные земельные участки, при этом горизонты почвы, а вместе с ними и микроорганизмы покоящиеся в них, оказываются вскрытыми, выброшенными на поверхность и рассеянными в окружающей среде.

Путём статистической обработки исследований почвогрунтов селитебных зон Якутска за 16 лет установлено, что среди выделенных культур 93% приходится на энтеробактерии. Из них: 49% - Escherichia; 25% - Citrobacter; 11% - Serratia; по 2-3%- Enterobacter, Klebsiella , Proteus [5]. Широкое распространение грамотрицательных бактерий, представляющих группу потенциально патогенных для людей, наблюдалось и в почвах малообжитых районах Якутии и крайнего Севера [6].

В процессе проведения микробиологического мониторинга за наземными экосистемами на аварийных объектах нефтегазового комплекса Якутии, не являющимися местом для постоянного проживания людей и находящимися в удалении от транспортной магистрали также установлен факт распространения энтеробактерий в почвах, воде открытых водоёмов и донных отложениях. Остаточное содержание нефтепродуктов не оказало токсического влияния на данную группу микроорганизмов. Более того, те же пресловутые клебсиеллы, были выделены практически из всех исследованных проб, а часть штаммов обладали способностью активно окислять нефтяные углеводороды.

1. 
   Ягодинский В. Н., Рейнару И. Элементы эпидемиологического надзора. – Таллин: Вангус, 1987. - 272с.
   
2. 
   Ерофеевская Л.А., Чернявский В.Ф., Антонов Н.А., Литвинова Л.Н. Методологический и методический подходы при микробиологических исследования снежных покровов в северных широтах // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, Якутск, 2007.- Вып.2(18). - С. 39 - 41.
   
3. 
   Ерофеевская Л.А., Чернявский В.Ф.Циркуляция микроорганизмов в городской экосистеме // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, 2007.- Вып.2(18). – С. 33 - 37.
   
4. 
   Мамонтова Л.М., Кондратьева А.М., Марков А.В., Зуенок Н.В., Анганова Е.В. и др. Принципы организации микробиологического мониторинга // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2001. - №4(18). – С.53 - 55.
   
5. 
   Ерофеевская Л.А. Санитарно-экологическая оценка почв экосистемы г. Якутска // Якутский медицинский журнал. ЯНЦ СО РАМН, 2007.-№.2(18). – С. 48 - 51.
   
6. 
   Литвин В.Ю. Случайный паразитизм микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 1992. - №1. – С. 52-55.
   

Цель исследования – изучить влияние разных способов приготовления препарата для пломбирования корневых каналов под все типы постоянных пломбировочных материалов “Радент” на жизнеспособность возбудителей периодонтита.

Материалы и методы. В работе использовали материал для пломбирования корневых каналов под все типы постоянных пломбировочных материалов “Радент” (Радуга Р, Россия), который состоит из окиси цинка (70%) и гидроокиси кальция (30%). В первой серии опытов порошкообразный препарат “Радент” растворяли в дистиллированной воде, а во второй – с использованием 1% раствора хлоргексидина. Для определения противомикробного действия препарата “Радент” использовали методику Lai et al. [2]. Чувствительность микроорганизмов определяли путем прямого нанесения проб материала “Радент” на газонный посев инокулюма тестируемого штамма, который соответствует по плотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержит примерно 1,5×10⁸ КОЕ/мл. Пломбировочный материал наносился на посев в объеме 40 мкл. Учет результатов производили через 18-24 ч инкубации посевов при температуре +35^оС. Результат выражали в миллиметрах диаметра зоны задержки роста тестируемого штамма. Все штаммы были получены при микробиологическом исследовании отделяемого зубных каналов пациентов с периодонтитом. Статистическую обработку данных осуществляли с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение. В ходе проведенных исследований установлено, что препарат “Радент” обладает антибактериальными свойствами. Вокруг препарата формируется четко видимая зона задержки роста всех исследуемых штаммов. При приготовлении препарата “Радент” с использованием хлоргексидина зона задержки роста статистически значимо увеличивается для всех исследуемых штаммов микроорганизмов (табл. 1).

Таблица 1. Влияние препарата “Радент”, приготовленного на дистиллированной воде и хлоргексидине,

на жизнеспособность микроорганизмов

Таким образом, проведенные исследования показали, что от типа транспортного средства, на котором готовили гидроксид-содержащий препарат “Радент” в качестве внутриканального лекарственного средства, зависит его антимикробная активность; последняя может быть усилена за счет использования раствора хлоргексидина.

1. Queiroz A.M., Nelson-Filho P., Silva L.A., Assed S., Silva R.A., Ito I.Y. Antibacterial activity of root canal filling materials for primary teeth: zinc oxide and eugenol cement, Calen paste thickened with zinc oxide, Sealapex and EndoREZ // Braz. Dent. J. – 2009. – Vol. 20(4). – P. 290-296.

2. Lai C.C., Huang F.M., Yang H.W., Chan Y., Huang M.S., Chou M.Y., Chang Y.C. Antimicrobial activity of four root canal sealers against endodontic pathogens // Clin. Oral. Investig. – 2001. – Vol. 5(4). – P. 236-239.

3. Vaghela D.J., Kandaswamy D., Venkateshbabu N., Jamini N., Ganesh A. Disinfection of dentinal tubules with two different formulations of calcium hydroxide as compared to 2% chlorhexidine: As intracanal medicaments against Enterococcus faecalis and Candida albicans: An in vitro study // J. Conserv. Dent. – 2011. – Vol. 14(2). – P. 182-186.

Известно, что одна треть населения планеты является носителем латентной формы туберкулёза [1], при которой не наблюдается проявления клинических признаков заболевания. Такая форма заболевания связана с важной особенностью микобактерий переходить в дормантное (покоящееся или некультивируемое (НК)) состояние [2]. Исследование особенностей строения клеточной стенки микобактерий является ключевым при разработке новых подходов лечения не только туберкулёза, но и других микобактериальных заболеваний в связи с растущим количеством рецидивных и плохо поддающихся лечению случаев заболевания.

Из-за сложности изучения in vivo влияния воздействий организма-хозяина и ответной реакции со стороны микобактерий был разработан подход создания моделей дормантности in vitro. Такие модели позволяют изучать механизмы перехода в некультивируемое состояние и механизмы реактивации; также была доказана целесообразность использования в качестве моделей близкородственных Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis) быстрорастущих непатогенных микобактерий, например, таких как Mycobacterium smegmatis (M.smegmatis).

Для сравнения клеточного состава микобактерий нами были использованы две модели перехода из активно-делящегося в некультивируемое состояние. Одна модель была разработана на основе штамма M.smegmatis mc²155 [3], другая pH-зависимая модель была получена на основе штамма M.tuberculosis H37Rv [4].

Клетки микобактерий отделяли от внеклеточной среды центрифугированием, белки экстрагировали водным раствором додецилсульфата натрия, липиды – смесью хлороформа и метанола по модифицированному метода Блайя-Дайера.

Рис. 1. Зависимость роста M.smegmatis в среде H-dB (1), содержания липидов (2) и белков (3) клеток, находящихся в активном состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу. Среднеквадратическое отклонение значений КОЕ находится в пределах от 10 до 30%.

Рис. 2. Зависимость роста M.smegmatis в среде mH-deB (1), содержания липидов (2) и белков (3) в клетках при переходе в НК состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу. Среднеквадратическое отклонение значений КОЕ находится в пределах от 10 до 30%.

Похожая закономерность была нами обнаружена и при изучении белково-липидного состава клеток M.tuberculosis, находящихся в активном и НК состояниях (см. Рис.3, 4).

Рис. 3. Изменение численности жизнеспособных клеток (КОЕ и НВЧК (наиболее вероятное число клеток) (1, 2 в случае роста НК-клеток и 4 (значение КОЕ = значению НВЧК) в случае роста активных клеток) M.tuberculosis, а также измерение pH среды роста Sauton со стартовым значением pH 8,0 (3) в случае НК-клеток и 8,4 (5) в случае активных клеток от времени культивирования в расчете на сухую биомассу.

Рис. 4. Зависимость содержания липидов (1) и белков (2) в клетках M.tuberculosis, находящихся в НК-состоянии, а также липидов (3) и белков (4) в клетках M.tuberculosis, находящихся в активном состоянии, от времени культивирования в расчете на сухую биомассу.

1. 
   Dye C. et al. // JAMA (J Am Med Assoc). 1999. V. 282. P. 677 – 686.
   
2. 
   Перельман М. И. и др. Фтизиатрия. – М.: Медицина, 2004. – 520 с.
   
3. 
   Салина Е. Г. и др. // Микробиология. 2006. Т.75.№4. С.1-7.
   
4. 
   Shleeva M. O. et al. // Tuberculosis. 2011. V.91(2). P.146 – 154.
   
5. 
   Deb C. et al. // PLoS ONE. 2009. V.4. No.6. P.1 – 15.