Обследование стоматологического больного
Реакция иммунофлоресценции (РИФ)
жүктеу/скачать 1.82 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Иммуноферментный анализ (ИФА).
- Радиоиммунный анализ (РИА).
- Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
| Реакция иммунофлоресценции (РИФ). Метод основан на использова-
нии антител, связанных с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики. В практике применяются два варианта РИФ: прямой и непрямой. В пер- вом случае применяются меченые антитела к вирусам, которые наносятся на инфицированные клетки, мазок, культуры клеток). Таким образом, реакция протекает одноэтапно. При непрямом варианте РИФ на исследуемый материал наносится спе- цифическая сыворотка, антитела который связываются с вирусным антигеном. Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод основывается на метке ан- тител ферментами, а не красителями. Наиболее широко используется перокси- даза хрена и щелочная фосфатаза. Меченые антитела связываются с антигеном, и такой комплекс обнаруживается при добавлении субстрата для фермента, с которым конъюгированы антитела. Конечный продукт реакции может быть в виде нерастворимого осадка, и тогда учет проводится с помощью обычного светового микроскопа или в виде растворимого продукта, который обычно ок- 51 рашен (или может флюоресцировать или люминесцировать), и регистрируется инструментально. Другое важное преимущество метода ИФА — возможность количествен- ного определения антигенов, что позволяет применять его для оценки клиниче- ского течения болезни и эффективности химиотерапии (рис. 33). Радиоиммунный анализ (РИА). Метод обоснован на метке антител ра- диоизотопами, что обеспечивало высокую чувствительность в определении ви- русного антигена. К недостаткам метода относится необходимость работать с радиоактивными веществами и использование дорогостоящего оборудования (гамма-счетчиков). Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Первоначально классическим методм выявления вирусного генома считался высокоспецифичный метод гиб- ридизации нуклеиновых кислот, но в настоящее время все шире спользуется выделение геномов вируса с помощью ПЦР. Полимеразная цепная реакция – искусственный процесс многократного копирования (амплификации) специфической последовательности ДНК. Копи- рование ДНК при ПЦР осуществляется специальным ферментом – ДНК- полимеразой, как и в клетках живых организмов. ДНК-полимераза, двигаясь по одиночной цепи ДНК (матрице), синтезирует комплементарную ей последова- тельность ДНК. Важно, что ДНК-полимераза не может начать синтез цепи ДНК «с нуля», ей необходима короткая «затравочная» цепь РНК или ДНК, к которой она может начать присоединять нуклеотиды. Основной принцип ПЦР состоит в том, что реакция полимеризации (син- теза полимерной цепи ДНК из мономерных нуклеотидных звеньев) иницииру- ется специфическими праймерами (короткими фрагментами «затравочной» ДНК) в каждом из множества повторяющихся циклов. Специфичность ПЦР оп- ределяется способностью праймеров «узнавать» строго определенный участок ДНК и связываться с ним согласно принципу молекулярной комлементарности. 52 |