Определение степени поражения различными болезнями ячменя и пшеницы на территории аккайынского района северо-казахстанской области

2. Алыков, Н.М. Концентрирование и флуориметрическое определение антрациклиновых антибиотиков / Н.М. Алыков, Т.В. Некрестьянова, Л.В. Яковлева // ЖАХ. 1991. - Т. 46. - № 8. - С. 1642.

3. Антибиотики и антибиоз в сельском хозяйстве / Пер. с англ. З.Ф. Богаутдинова; под Ред. А.Н. Полина. М. : Колос, 1981.

4. Антибиотики в животноводстве и ветеринарии / Под ред. И.Е. Мозгова и др. М. : Сельхозиздат, 1963.

5. Артемьева, С.А. Микробиологический контроль мяса животных, птицы, яиц и продуктов их переработки : справочник / С.А. Артемьева, Т.Н. Артемьев, А.И. Дмитриев, В.В. Доргутина М. : КолосС, 2003.

6. Воробьева Т.В. Влияние на организм антибиотических примесей, обнаруживаемых в продуктах питания животного происхождения / Т.В. Ворбьева // Рациональное питание: Сб. науч тр. Киев : Здоровье. - 1980. -Вып. 15. - С.56 - 58.

7. Демидова, Л.Д. Разработка ускоренных методов индикации в молоке наиболее распространенных

антибиотиков и других ингибирующих веществ: автореф. дис. . канд. вет. наук. М., 1984. — 23 с.

8. Дмитриева, B.C. Микробиологический контроль активности антибиотических препаратов / B.C. Дмитриева, С.М. Семенов М. : Медгиз, 1965.-364 с

УДК 57.083.3:576.3

¹Секенова А.Е., ²Огай В.Б., ²Мукантаев К.Н.,²Бакирова Г.А.

В результате проведения электрофореза молекулярная масса белка антигена-транскрипционного фактора Sox2 составила 34 кДа (рисунок-1).

Оптимальная концентрация антигена Sox2 для иммунизаций составила – 50 мкг/мл. Антитела специфически реагировали только с антигеном Sox2 в иммуноферментном анализе. Иммунохимическое проявление взаимодействия антигенов, перенесенных после электрофореза с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану, с поликлональными антителами показало выявление полос серого цвета в иммуноблоте (рисунок-2).
Электрофореграмма антигена Sox2 в 12% полиакриламидном геле

←34 кД

←

Рисунок 1 Рисунок 2

←

Поликлональные антитела, полученные из сыворотки мышей, иммунизированных в концентрации 50 мкг/мл, имеют титр в ИФА 1:900 (таблица 1).
Таблица 1 - Исследование специфичности и активности антител с помощью варианта непрямого ИФА

Вариант ИФА	Концентрация антигена Sox2	Активность титра
Непрямой вариант ИФА	100 мкг/мл	1:300
Непрямой вариант ИФА	50 мкг/мл	1:900

Иммуноцитохимия антител на плюрипотентных СК

ЭСК мыши

ЭСК человека

А

В


Sox2/DAPI

Sox2/DAPI

ЭС

К человека (отриц. контроль)

С

D

Рисунок 3

1. 
   Получены поликлональные антитела, специфичные к транскрипционному фактору Sox2 плюрипотентных стволовых клеток.
   
2. 
   Специфичность и иммунохимические характеристики полученных поликлональных антител позволяют использовать их для определения экспрессии белка Sox2 в плюрипотентных стволовых клетках человека.
   

1. 
   Development of antibodies to human embryonic stem cell antigens. Jingli Cai, Judith M Olson, Mahendra S Rao, Marisa Stanley, Eva Taylor and Hsiao-Tzu Ni*. BMC Developmental Biology 2005, 5:26 doi:10.1186/1471-213X-5-26.
   
2. 
   Фридлянская И.И. Получение поликлональных антител. //Методы культивирования клеток: Сб. науч. трудов, Л.: Наука, 1988. - С. 194-205.
   

УДК 619:616.155.392:636.2

Тургимбаева А.М.

Широкое распространение болезни причиняет значительные убытки животноводческим хозяйствам, но главный ущерб наносится селекции и выращиванию ценных чистопородных высокопродуктивных животных [1]. По результатам последних исследований установлено, что годовой надой молока у серопозитивных коров на 10-14% ниже, чем у серонегативных, а содержание жира на 0,09%. Общий экономический ущерб от лейкоза в племенном хозяйстве достигает свыше 50 млн. тенге в год.

На данный момент в Казахстане данная болезнь регистрируется во всех областях республики, наибольшее распространение лейкоза в Северном Казахстане, а наименьшее - в Западном и Восточном Казахстане. На долю Северного Казахстана приходится 39,4% неблагополучных пунктов, 53,6% заболевших и 81,5% павших от ЛКРС.

Целью работы является разработка иммуноферментной тест-системы на основе использования рекомбинантного антигена р24 вируса лейкоза крупного рогатого скота.

Задачи:

- тестирование эффективности иммобилизации рекомбинантного р24 антигена ВЛКРС при различных режимах с последующим проведением иммуноферментного анализа;

- определение оптимального рабочего разведения моноклональных антител (МКА).

Научная новизна и практическая ценность:

В Казахстане получен рекомбинантный р24 антиген вируса лейкоза крупного рогатого скота. Установлены оптимальные условия постановки иммуноферментного анализа на основе использования рекомбинантного антигена р24.

Работа выполнена в РГП «Национальном центре биотехнологии Республики Казахстан», в лаборатории иммунохимии и иммунобиотехнологии.

Объектами исследования являлись сыворотки крупного рогатого скота, больного лейкозом, неблагополучных по лейкозу хозяйств.

Экспериментальная часть исследовательской работы заключается в постановке непрямого варианта иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантного антигена р24 для определения наиболее оптимальных условий для диагностики заболевания. В ходе эксперимента тестировались режимы инкубации антигена: в планшете 1 - при +37⁰С в течение 2 часов, а также в планшете 2 - при +4⁰С в течение 12 часов. Путем окрашивания реактивом Брэдфорда отобранной надосадочной жидкости из лунок планшетов 1 и 2 определяли количественное содержание белка (антигена р24) с целью выявления кинетики осаждения рекомбинантного антигена р24 на поверхность лунки.

Далее провели ИФА с целью тестирования оптимальных разведений моноклональных антител (1:2000, 1:4000, 1:8000, 1:1600). Титровали рекомбинантный антиген р24 попарно в 2 ряда (1-2, 3-4, 5-6, 7-8). Инкубировали планшет в течение часа при +37⁰С, промыли планшет 3 раза PBS+TW20. Затем внесли 1% BSA для забивки лунок, инкубировали в тех же условиях, так же промыли планшет. Далее внесли МКА в различных разведениях. Для получения разведения МКА 1:2000 в 4 мл фосфатно-солевого буфера рН-7,2 с 0,5% Твином-20 (PBS+TW20) внесли 2 мкл МКА, для разведения 1:4000 – к 8 мл PBS+TW20 внесли 2 мкл МКА, 1:8000 – 1,6 мл PBS+TW20 и 2 мкл МКА, а также 1:1600 – 3,2 PBS+TW20 и 2 мкл МКА. В ряды 1-2 планшета добавили по 100 мкл МКА 1:2000, в ряды 3-4 – 1:4000, в ряды 5-6 – 1:8000, в ряды 7-8 – 1:1600. Инкубация, промывка. Добавили антивидовой конъюгат anti-mouse в разведении 1:5000. Инкубировали, промыли 3 раза PBS+TW20, 3 раза дистиллированной водой. Внесли по 100 мкл субстратной смеси на лунку, затем наблюдали ход реакции окрашивания. Остановили реакцию 100 мкл стоп-реагентом (1н H₂SO₄).

Результаты реакции учитывали на спектрофотометре при длине волны 595 нм или визуально.

Результаты исследований показали, что наиболее эффективным условием для инкубирования антигена является температурный режим при +37⁰С в течение 2 часов. При проведении реакции Брэдфорда наименее интенсивное окрашивание наблюдалось по истечении 2 часов в надосадочной жидкости, которая находилась в лунках планшета, инкубируемого при +37⁰С. Того же результата добились и при инкубировании в условиях при +4⁰С в течение 12 часов и более. Следовательно, по временным параметрам инкубирование при +37⁰С в течение 2 часов наиболее эффективно, чем при +4⁰С в течение 12 часов.

Табл. 2 Сорбция рекомбинантного антигена на поверхность твердой фазы при +4⁰С.

При установлении оптимального разведения раствора моноклональных антител (МКА) выяснилось, что разведение МКА 1:8000 позволяет добиться оптимальных оптических показателей по сравнению с другими. Результаты документировались с помощью спектрофотометра при длине волне 595 нм.

Ряд 1 – МКА 1:2000; Ряд 2 – МКА 1:4000; Ряд 3 – МКА 1:8000; Ряд 4 – МКА 1:1600.

1. В результате проведения исследовательской работы была разработана иммуноферментная тест-система на основе использования рекомбинантного антигена р24 вируса лейкоза крупного рогатого скота.

2. Для диагностики заболевания. лейкозом наиболее эффективным условием для инкубирования рекомбинантного р24 антигена является температурный режим при +37⁰С.

3. Оптимальным рабочим разведением моноклональных антител является разведение МКА 1:8000.

1. Джурина С.И. Методы эпизоотического исследования и теория эпизоотического процесса. – Новосибирск: «Наука» Сибирское отделение, 1991 г.

2. Инфекционные болезни животных./Под ред. Д.Ф.Осидзе – М.: Агропроиздат, 1987.

3. Лейкоз крупного рогатого скота. – М.: Россельхозиздат, 1986 г.

4. Нахмансон В.М., Бурба Л.Г. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. – М.: Росагропроиздат, 1990 г.

5. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В.//Ветеринарная вирусология/М.: «Агропромиздат», 1991 г.

Ахметова А.Е.

В настоящее время широко известны лечебные свойства кисломолочных продуктов, которые могут производиться путем биологического сквашивания молока различных сельскохозяйственных животных специально подобранными штаммами молочнокислых бактерий, или путем искусственного подкисления молока и молочных смесей лимонной, соляной или молочной кислотами [1].

В Казахстане выпускают кисломолочные продукты, полученные только путем биологического сквашивания, так как они имеют преимущество перед искусственно подкисленными смесями в связи с тем, что в процессе жизнедеятельности молочнокислых, бифидо- и пропионовокислых бактерий, вносимых с закваской, в продуктах накапливаются ферменты, антибактериальные вещества, полипептиды, свободные аминокислоты, органические кислоты, ряд витаминов, что повышает биологическую ценность продуктов и придает им направленные физиолого-биохимические свойства [2].

На лечебно-диетические свойства кисломолочных продуктов впервые обратил внимание русский микробиолог И.И. Мечников, он установил, что употреблением кисломолочных продуктов можно вытеснить гнилостную микрофлору кишечника. Известно, что гнилостная микрофлора развивается только в слабощелочной и нейтральной среде. Разлагая остатки белков пищи, она образует яды (индол, скатол, фенол), которые поступают в кровь и лимфу.

Лечебное воздействие кисломолочных продуктов состоит также в том, что в результате лучшей усвояемости они быстрее перевариваются, чем обычное молоко, хорошо переносятся пациентами при кишечных заболеваниях и болезнях печени. [3].

При приготовлении кисломолочных продуктов изменяется также содержание витаминов. Наибольшее внимание уделяется обогащению кисломолочных продуктов витаминами группы «В» и фолацином. В этом направлении можно также использовать исключительные способности бактерий пропионовокислого брожения синтезировать эти витамины[2,4].

В последнее время, в качестве заквасок для приготовления кисломолочных продуктов функционального назначения используется различные композиции молочнокислых бактерий, ацидофильные штаммы, бифидобактерии, являющиеся важнейшими компонентами микрофлоры желудочно-кишечного тракта [17,18].

Растительная добавка, обладающая кроветворными, антиоксидантными, дезинфицирующими свойствами, содержит в своем составе набор органических кислот, дубильных веществ, каротина, витаминов и железа. В качестве естественного подсластителя используется пчелиный мед, а в качестве ароматизатора – мята [1,5].

В целях улучшения структуры питания населения, повышения качества и биологической ценности продовольственного сырья, перспективным является производство кисломолочных продуктов, обогащенных водо- и жирорастворимыми витаминами [3].

В питании большинства регионов не только РК, но и стран СНГ выявлен значительный дефицит витаминов А, Е, С, группы «В», РР, фолиевой кислоты. Отсутствие должных профилактических мероприятий усиливает эффект негативного влияния радиации на организм, повышает риск сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний. Особенно опасен в этом плане дефицит β-каротина. Имеющиеся данные по обеспеченности витаминами репрезентативных групп населения различных регионов страны показывает, что потребление данных нутриентов, особенно в зимне-весенний период не соответствует рекомендуемым нормам.

Возникает необходимость восполнения недостаточного поступления в организм ряда витаминов за счет искусственного их введения в продукты массового потребления.

Исследования в данной работе, мы проводили с учеными Казахского НИКИ мяса и молочной промышленности и государственного университета Семей, которые разработали рецептуру и технологии детских кисломолочных комбинированных продуктов с направленными лечебными свойствами «Томпак». Лечебные и диетические свойства его предопределяются интенсивностью и направленностью микробиологических процессов, обусловленных полезными свойствами заквасочной микрофлоры. Подобрана полизакваска, удовлетворяющая всем микробиологическим требованиям. В состав продукта входят гречневая и рисовая крупы, пюре из яблок, тыквы, как источники пищевых волокон, пектиновых веществ и витаминов в активной форме. Продукты необходимы для питания лиц, проживающих в экологически неблагоприятных зонах РК. [4].

Для профилактики анемии различного генеза создан кисломолочный продукт «Асыл» на основе коровьего молока путем сквашивания его специально подобранной композицией молочнокислых бактерий с ценными биологическими и иммунологическими свойствами и добавления солей железа, цинка, меди, йода и витаминов С, РР, В₁, В₂, В₃, В₆, В₁₂ и В_С. [45].

Продолжая исследования на кафедре «Технология производства молочных продуктов» Государственного университета «Семей» разработали технологию приготовления продукта «Алтынсут», на основе натурального коровьего молока, сброженного ассоциациями культур, состоящий из бифидо- и лактобактерий. Такая ассоциация при средней энергии кислотообразования формирует в продукте высокую антагонистическую активность против возбудителей желудочно-кишечных заболеваний. Кроме того, продукт обогащен клетчаткой и пектином. Эти вещества способствуют выведению и сорбции тяжелых металлов из организма [1,5].

Биологически активный кисломолочный продукт «Ацидолакт-Наринэ» также содержит микробные ассоциации молочнокислых бактерий, обладающие выраженными антибактериальными, иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами.

Хочется еще раз заметить, что важнейшим этапом в производстве кисломолочных продуктов функционального назначения является направленный подбор заквасочного материала.

При подборе культур для ферментированных продуктов необходимо учитывать наряду с активностью кислотообразования, протеолитической и липолитической активностью, способностью к образованию веществ, ответственных за ферментирование аромата готового продукта, устойчивостью к антибиотикам и бактериофагу, ряд ценных физиологических свойств, указывающих на их приживаемость в кишечнике [6,7].

В настоящее время известно большое количество молочнокислых бактерий объединенных в обширную группу микроорганизмов. Основным отличительным признаком их является способность образовывать в качестве главного продукта брожения молочную кислоту, кроме этого свойства, молочнокислые микробы имеют следующие основные признаки: по форме они могут быть кокками, палочками; окрашиваются положительно по Грамму; спор не образуют; неподвижны; факультативные анаэробы [1,6].

При производстве кисломолочных продуктов особое внимание уделяется закваскам, в состав которых входят чистые культуры ацидофильной палочки или их штаммы.

С использованием ацидофильной палочки создан и применяется в педиатрии кисломолочный продукт «Биолакт». При применении смеси «Биолакт» отмечается хорошее физическое и нервно-психическое развитие детей, нормализация кишечной микрофлоры, улучшение показателей специфического и неспецифического иммунитета. Та же закваска используется в производстве детской биологически активной смеси «Балдырган». В ее состав введены специальные добавки (сахар, сернокислая медь, лактат железа, лизоцим, растительное масло), позволяющие повысить его питательную ценность [7,8].

Продукты применяют при профилактике острых кишечных инфекций и как средство, смягчающее побочные действия антибиотиков, используемых при лечении некоторых заболеваний.

В США институтом раковых исследований апробировано действие Lactobacilus acidophilus на рост опухолевых клеток, установлен выраженный противоопухолевый эффект и прямая связь между количеством потребляемых с их участием продуктов и степенью подавления опухолевых клеток.

Перспективным направлением в технологии продуктов с различным функциональным назначением является применение консорциумов микроорганизмов – комбинированных заквасок лактобактерий.

В последнее время в результате воздействия ряда негативных факторов (ухудшающаяся экологическая обстановка, повсеместное использование антибиотиков и химиотерапия, стрессовые ситуации и т.д.) употребление кисломолочных продуктов приобретает важное значение в питании человека.

Литературные данные, касающиеся производства кисломолочных напитков, достаточно обширны. Однако большинство вырабатываемых напитков содержит лактобактерии, обладающие недостаточной приживаемостью в кишечнике, поэтому вызываемый ими положительный эффект обусловлен в основном присутствием продуктов их метаболизма.

В связи с этим создание новых комбинаций лактобактерий с учетом их особой физиологической роли в организме человека и разработка технологии продуктов питания на основе молока является актуальной проблемой современной биотехнологии.

Биотехнология в настоящее время развивается по пути создания комбинированных пищевых продуктов, сбалансированных по основным компонентам, важным с точки зрения физиологического питания. Из приведенных литературных источников следует, что с помощью введения нетрадиционных добавок можно значительно улучшить лечебные свойства молочных продуктов, расширить спектр их применения.

Таким образом, проблема разработки функциональных продуктов на кисломолочной основе является актуальной и имеет большую медико-социальную значимость, направленную на решение вопросов оздоровления населения.

Поиск новых биологически активных добавок, заквасочного материала создание нетрадиционных композиций позволит получить новые продукты с полипотентными свойствами, эффективность применения которых гораздо выше, чем у молока. Данное направление должно усиленно развиваться.