Восстановление всхожести семян методом биотехнологии
Материалы и методы В эксперименте использовали гибридную
комбинацию: F
2
♀Виола х ♂Акдала, F
2
♀Виола
х ♂Баканасский, F
3
♀Виола х ♂Баканасский.
Наиболее
подходящая
фаза
получения
гаплоидов андрогенезом является одноядерная
стадия микроспор. Морфологический данная
стадия
соответствует
фазе
трубкования.
Метелки гибрида срезали в фазе трубкования и
подвергали холодовой обработке в течение 4-7
суток в холодильнике при температуре +4
0
С.
Для индукции эмбриоидов и каллусов
использовали питательную среду N6 с
добавлением 2,4-дихлорфеноксиуксусной
кислоты (2,4-Д) [5]. Для
получения
регенерантов
из
каллусов
использовали
регенерационную питательную среду Мурасиге
и Скуга (МС) с добавлением гормонов:
бензиламинопурина (5 мг/л), индолил-3-
уксусной (1,0 мг/л), а также органических
веществ: глутамин (500мг/л), гидролизат
казеина (500 мг/л) [6]. На 20-30 сутки
наблюдали
появление
зеленых
растении
регенерантов. Для увеличения количества
регенерантов
проводили
клональное
размножение in vitro. С этой целью растения
регенеранты
с
хорошей
кустистостью
разделяли
на
отдельные
побеги
и
культивировали
изолированно
на
регенерационной
среде
МС.
Часть
регенерантов которые, не имели корневую
систему, культивировали на среде для
ризогенеза [7]. Данная среда содержит
половинный набор базовый среды МС с
добавлением 1,0 мг/л ИУК, 30,0 г /л сахарозы,
7,0 г/л агара. Далее, растения регенеранты с
хорошо развитой корневой системой отмывали
от питательной среды и помещали в сосуды с
водопроводной водой на трое суток для
адаптации с in vitro в in vivo. После адаптации,
растения переводили в вегетационные сосуды с
почвенно-торфяной смесью.