Новая микробная тест-система для первичного отбора противоопухолевых соединений

Суетов Ж.Б., студент 3курса факультета общей медицины, Курбанмурадова А., студент 1 курса факультета общей медицины

Научный руководитель: Шакиев С.Ш.,к.б.н., доцент

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Для засева среды 3 использовалась взвесь конидий недельной культуры F.bulbigenumvar.blasticola с жидкой среды Чапека, на которой гриб проходит полный жизненный цикл (спора-мицелий-спора), и вторичные опухолеподобные колонии никогда не возникают.

Полученную взвесь конидий разбавляли стерильной водопроводной водой (1:10) и вносили по 0,1 мл в пробирки и по 0,2 мл в чашки Петри, распределяя равномерно по поверхности сред. Посевы выдерживали в термостате при температуре 28-30⁰С. При периодических просмотрах в течение 3-4 недель учитывали сроки появления, частоту образования вторичных опухолеподобных колоний и их типы. Об ингибирующем действии испытуемых соединений судили по отсутствию вторичных колоний, уменьшению их числа и размеров. Увеличение числа (на 50% и более), размеров вторичных колоний, ускорение сроков их появления оценивалось как стимуляция вторичного роста. Опыты проводили в двух-трех повторностях.

Основные результаты научного исследования:Ни одно из испытанных соединений, не ингибировало первичный рост F. bulbigenumvar.blasticola. Он становился видимым уже на вторые сутки, как и в контроле на среде 3, куда противоопухолевые соединения не вносились. Влияние большинства испытанных соединений на вторичный опухолеподобный рост гриба на второй и последующих неделях культивирования оказалось резко выраженным и неоднотипным. Оно проявилось

а) в полном избирательном подавлении вторичного роста (гидреа, метотрексат);

б) в повышении частоты возникновения у гриба вторичных опухолеподобных образований (дакарбазин, адриабластин, винбластин, циклофосфанЛэнс, циклофосфан КМП,); при этом средний вес опухолеподобных образований на косяк среды в пробирке составляет 8-12 мг, в присутствииидакарбазина, адриабластина и винбластина, соответственно 20,24 и 22 мг;

в) в двойственном (ингибирующем и стимулирующем) влиянии (вепезид);

г) в восстановлении дифференцировки гриба, что выражается в образовании воздушного мицелия и спор (метотрексат в концентрациях 0,25-1,0 мг/мл).

Все выявленные типы воздействия противоопухолевых соединений на вторичный рост гриба проявляют зависимость от испытанных концентраций. Однако эта зависимость не является строгой, частота образования вторичных колоний варьирует в повторностях опытов.

Интерес представляют данные о стимулирующем влиянии на вторичный опухолеподобный рост гриба F.bulbigenumvar. blasticola препаратов применяемых как противоопухолевые агенты и которые по отдаленным результатам отнесены к безусловным канцерогенам.

Наибольший интерес представляют данные о возможности с помощью данной тест системы отбора соединений восстанавливающих дифференцировку, т.е. препаратов приводящих к нормализации опухолей

На основании выполненных исследований гриб F.bulbigenumvar. blasticola рекомендуется для использования в скрининге как тест-система: для поиска противоопухолевых соединений. Показана также возможность использования новой тест-системы для выявления соединений, способных модифицировать эффект терапевтически ценных противоопухолевых препаратов.

В связи с изложенным, актуален поиск новых эффективных противоопухолевых препаратов, не оказывающих двойственного влияния на опухолевый рост. Возрастает значение исследований по созданию микробной тест-системы, которая повысила бы эффективность поисковой работы за счет более быстрого выявления у исследуемых соединений нежелаемых побочных эффектов.

1. 
   Reif E. The causes of cancer//J.Amer.scientist.-1981.-V.69,july-august.-P.437-445.
   
2. 
   Dulbecco R. La nature du cancer//Recherchе.-1982.-V.139.-P.1426-1436.
   
3. 
   Эренпрейс Я.Г. Современные концепции опухолевого роста.-Рига:Зинатне,1987.-120с.
   
4. 
   Раушенбах М.О. Взаимосвязь общего и частного, причины и следствия в онкологии//Методологические вопросы изучения онкогенеза.-М.:Медицина,1988.-С.13-27.
   
5. 
   Никитина Е.Т., Калакуцкий Л.В. Образование вторичных автономных колоний у грибов на синтетической среде при старении //Микробиология.-1977.-Т.46,в.6.-С.1087-1094.
   
6. 
   Шакиев С.Ш., Никитина Е.Т. Сравнительное исследование цикла развития F.bulbigenumvar.blasticola и культур из вторичных колоний этого гриба//Тр.Института микробиологии и вирусологии АН КазССР.-Алма-Ата,1982.-Т.27.-С.163-167.
   
7. 
   Скоблилова Н.К. Сравнительное изучение клеточной стенки Streptomyces roseoflavus var.roseofungini 1128 и его адифференцированного варианта 1-68 //Автореф.дис.канд.биол.наук.-М.,1983.-22с.
   
8. 
   Seino Y., Nagao M., Yahagi T. et al.Mutagenicity of several classes of antitumor agents to Salmonella typhimurium TA98,TA100 and TA92//Cancer Res.-1978.-V.38, N7.-P.2148-2156.
   
9. 
   Шапиро А.А., Фонштейн Л.М. Изучение мутагенного действия циклофосфана на бактерии в опытах с млекопитающим-посредником//Известия АНСССР,сер.биол.-1979.-№3.-С.371-377
   
10. 
    Ferguson L.R.,Turner P.M.,Gourdie T.A. et al. ”Petite” mutagenesis and mitotic crossingover in yeast by DNA-targeted alkylating agents//Mutat.Res.-1989.-V.215, N2.-P.213-222.
    
11. 
    Adamson R.H., Sieber S.M. Antineoplastic agents as potential carcinogenes//Jn:Origins of Human Cancer.-1977.-P.429-443.
    
12. 
    Уотсон Дж. Молекулярная биология гена.-М.: Мир,1978.-720с.
    
13. 
    Reif E. The causes of cancer//J.Amer.scientist.-1981.-V.69,july-august.-P.437-445.
    
14. 
    Dulbecco R. La nature du cancer//Recherchе.-1982.-V.139.-P.1426-1436.
    
15. 
    Эренпрейс Я.Г. Современные концепции опухолевого роста.-Рига:Зинатне,1987.-120с.