1. Биотехнологияны гылым жэне ондіріс саласы ретінде сипаттаны. Даму тарихын ашыныз, биотехнологиянын багыттарын жазыныз. Биотехнология
Жануар шикізатынан инсулинді бөлу
жүктеу/скачать 474.56 Kb.
|
| Жануар шикізатынан инсулинді бөлу
Инсулин-Лангерганс аралдарының жасушаларымен өндірілетін ұйқы безінің гормоны, көмірсу алмасуында маңызды рөл атқарады. Адам инсулинінің молекуласы екі полипептидті тізбектен тұрады-А және В, екі дисульфидтік байланыстарға қосылған. Тізбек 21 тұрады, ал В-тізбек - 30 амин қышқыл қалдықтарынан. 1952 жылы алғаш рет кристалды түрде инсулин бөлінді. В қазіргі уақытта инсулин бөліп алудың бірнеше әдістері бар қара мал мен шошқаның ұйқы бездері. Инсулин алу азап қатарынан тұрады: 1) мұздатылған ұйқы бездерін ұсақтау және қышқыл спиртті ерітіндімен экстракция. 2) балласты белоктардың шөгуі және липидтерден босату. 3) инсулин фракцияларының изоэлектрлік тұнбасы (pH=5,5 кезінде) және спиртпен, ацетонмен, эфирмен тұндыру. 4) инсулинді тазалау: тұздармен тұндыру, фракциялау хроматография, гель-сүзу әдістерімен. 5) кристалдар түрінде инсулинді тұндыру. 6) мырыш-инсулиннің тұнбасы. Жас немесе мұздатылған ұйқы бездері майдалаудан өтіп экстрагирленеді тәсілімен бисмацерации бірінші рет 80-85 % этанолом реакторда с араластырғышы және булау қабаты бар. Екінші рет 57% ортофосфор қышқылымен (Хлорлы сутекті) қышқылданған этанол PH 2,8-3 мәніне дейін. Экстракцияны 1,5-4 сағат жүргізеді. тұрақты араластыру. Қышқылданған спирт ықпал етеді ұйқы безіндегі трипсин ферментін инактивациялау, осының арқасында инсулин өзгеріссіз күйде сақталады. Бірақ Минск эндокриндік препараттар зауытында экстракциялау үшін роторлы-пульсациялық аппарат қолданылады, бұл қарқындылық береді және 1.5 сағатқа дейін уақытты қысқартады.Алынған сорғыштар біріктіріледі, суықта 48 сағ. шөгіндіге түсетін жағымсыз ақуыздардан босату. Тұнба Центрифугалау және жою. Әрі қарай бөлу және тазалау үшін инсулин ион алмасу хроматографиясын қолданады. Жүзеге асырады макропористпен мөлдір сұйықтықтан инсулиннің сорбциясы рh 3,0-3,3 мәні кезінде КУ-33-30/100 сульфокатиониті режимде жалған көру. Май катионитті жуу арқылы жойылады 65-67% этанолмен, ал балласты ақуыздар ацетатты буфердің 0,3 М ерітіндісімен. Инсулин десорбциясын 0,01-0,05 ерітіндінің көмегімен жүзеге асырады аммоний буфері (pH 10) және Хлорсутекті дереу қышқылдайды pH 4,5 дейін қышқылмен және ацетон қосады. Балласты тұнбалары заттар жойылады. Инсулинді мырыш-ацитат (pH 6,2) ерітіндісімен тұндырады. Алынған мырыш-инсулин кристалдау әдісімен тазартылады, содан кейін pH 2,8 лимон қышқылымен қышқылданған суда ериді. Ерітінді түскен балластты заттарды сүзу арқылы жояды. Сүзгіш ацетонмен араласады, хлорлы мырыш қосады және 0ºс дейін салқындатылған фенол. Инсулиннің баяу кристалдануы үшін PH ерітіндісінің дәйекті өзгеруімен жағдай жасайды. Ерітінді PH 8,5 дейін шайылады, 2-3 минутқа қалдырыңыз, pH 6,8 және 1 сағат араластырылады; PH 6,5 мәні кезінде 2 сағат араластырылады; pH 6,2 және 6,0 кезінде 2 сағат араластырылады және 20 сағат тұндырады; pH 5,8 мәні кезінде 2 сағат араластырылады. Және 5 °С температурада 96 сағат тұндырады. Центрифугалау арқылы бөлінеді, Бюхнердің шұңқырына жуылады дәйекті суық су, ацетон, эфир. Кептіруді жүргізеді ауада, сору шкафында және эксикаторда. "Ново индастри" компаниясы адам инсулин шығарады негізінде аланиннің қалдығын ауыстыру жатқан әдіспен треонин қалдығы. Бұл ферментативті алмастыру арқылы қол жеткізіледі нәтижесінде өнімді хроматографиялық тазартумен 99% құрамы бар адамның біркомпанентті инсулин шығады таза препарат. жүктеу/скачать 474.56 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|